实验三 叶绿素含量的测定实验三叶绿素含量的测定
一.实验原理:
根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比。
叶绿素在652nm(混合)、663nm、645nm有最大吸收峰。
根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素的含量。
二。实验材料与实验器具:
植物材料:女贞、海桐叶片
实验器具:分光光度计;电子天平;研钵;试管;小漏斗;
滤纸;吸水纸;移液管;量筒;剪刀
试剂:95%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸钙粉
三。操作步骤
1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右,放入研钵中,加...
实验三叶绿素含量的测定
一.实验原理:
根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比。
叶绿素在652nm(混合)、663nm、645nm有最大吸收峰。
根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素的含量。
二。实验材料与实验器具:
植物材料:女贞、海桐叶片
实验器具:分光光度计;电子天平;研钵;试管;小漏斗;
滤纸;吸水纸;移液管;量筒;剪刀
试剂:95%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸钙粉
三。操作步骤
1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右,放入研钵中,加少量石英砂
和碳酸钙粉及3~5ml 95%乙醇,研成均浆,继续研磨至组织变白。静置3~5min。
2. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入
漏斗中,过滤到10ml试管中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。
3.用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直
至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ,摇匀。
4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95%乙醇
为空白,在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。
5. 计算公式:
叶绿素的含量(mg/g)= [(O.D652/34.5)×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重(或干重)。
Ca=13.95A663-6.88A645;
Cb=24.96A645-7.32A663
四.实验结果
女贞:叶绿素的含量(mg/g)=0.932/34.5*10/0.119=2.270
冬青: 叶绿素的含量(mg/g)=0.886/34.5*10/0.104=2.469
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