半夏愈伤组织诱导优化研究

半夏愈伤组织诱导优化研究 摘 要: 为快速诱导形成适合悬浮培养的半夏愈伤组织，对半夏愈伤诱导培养基采取 了优化组合。在MS+1.0 mg?L-16-BA+2.0 mg?L-1 NAA培养基上能诱导形成浓绿、致密的愈 伤组织;在MS+0.5 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1 2，4-D的培养基上，可诱导形成疏松的黄白色 愈伤组织，但生长缓慢。将前者后期继代培养基配方调整为MS+0.5 mg?L-16-BA+2.0 mg?L-1 2，4-D，可较快诱导出疏松的黄白色愈伤组织，适合做悬浮培养。 关键词:半夏;愈伤组织;诱导;培养基 中图分类号:S567.2 文献标识码:A DOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2013.09.002 Optimization Study of Callus Induction on Pinellia ternata CHENG Xia-ying， YANG Zong-qi (College of Life Sciences，Zhejiang Sci-Tech University，Hangzhou，Zhejiang 310018， China) Abstract: In order to quickly induce callus of Pinellia ternata Breit suitable for suspension culture， the optimum combination of medium was taken.The dark green and dense callus were induced on MS+1.0 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1 NAA;and yellow and white callus were induced on MS+0.5 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1 2，4-D，but the callus grew slowly.Suitable callus could be got when the medium in the late of the former were adjusted for MS+0.5 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1 2，4-D，and could be suspended in liquid medium after 3,5 times of subculture. Key words: Pinellia ternata;callus;induction;cultivation medium 三叶半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.(又名半夏)为天南星科Araceae半夏属Pinellia多年生小草本，株高15,30 cm，块茎近球形，叶出自块茎顶端，叶柄长6,23 cm，主产四 川、湖北、河南、贵州、安徽等地。半夏是一种重要的药用植物，其块茎可入药[1-2]。据统 计，在558种中药处方中，半夏的使用频率处第22位。半夏性温，味辛，有毒，传统药理 作用为燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结，主要用于痰多咳喘，头痛眩晕，呕吐反胃，梅核气 症等。进一步研究发现，半夏还具有抗肿瘤、抗生育、降血脂、护肝和治疗冠心病等多种重 要的作用[3]。本试验对半夏愈伤组织的诱导进行进一步探究，通过调整继代过程中培养基 配方，优化培养 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 ，提高了适合悬浮培养的愈伤组织培养效率，为半夏悬浮培养药物产业 化生产提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 试验材料 半夏块茎采自河北省易县(三叶半夏)。 1.2 试验方法 1.2.1 外植体的获得及处理 选取直径为1.0 cm左右的的块茎用清水洗净，在温度为 28 ?、相对湿度为80%条件下用湿沙催芽，待叶片长至3,4 cm时，取叶片及叶柄用0.1% 升汞灭菌15 min，无菌水冲洗5次。叶片和叶炳分别切片和切段接种在不同激素配比的培 养基上，放置于25 ?、光照1 500 lx，10,12 h?d-1条件下进行培养。 1.2.2 诱导半夏愈伤组织的培养基设计方案 在MS培养基中添加不同激素浓度及组合 (包括6-BA、2，4-D和6-BA、NAA)，制成不同浓度梯度的激素培养基配方，如 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1和表 2所示。 1.2.3 愈伤继代[4-5] 选取生长状况良好的愈伤组织进行继代培养，每15 d继代一次。 1.2.4 半夏愈伤组织继代过程中培养基的调整 用以上2种激素组合的MS培养基进行 愈伤组织的诱导，并经过2次继代后观察发现，用6-BA、2，4-D诱导的愈伤组织疏松、黄 白色，但生长缓慢，且死亡率相对较高;用6-BA、NAA诱导的愈伤组织生长快，几乎无死 亡现象，但是愈伤组织坚实，呈绿色，易形成丛生芽。将部分用6-BA、NAA诱导的愈伤组织经2次继代后，转到6-BA、2，4-D激素的培养基上(选择对愈伤诱导最佳的6-BA和2，4-D激素组合配方)继代，观察记录试验结果。 2 结果与分析 2.1 不同外植体形成愈伤组织的差别 将半夏外植体叶片和叶柄分别接入上述培养基中培养，2周后叶柄开始膨大，形成明显的愈伤组织，但叶片变化不明显。1个月后叶片和叶柄均可形成明显的愈伤组织，其结果如表3所示。 由表3可以看出，在15 d内用叶柄诱导愈伤组织比叶片诱导率高，而且愈伤组织生长快。30 d后，诱导率差别变得不太明显，但愈伤组织生长量差别明显。这说明虽然用叶片和叶柄均能诱导出愈伤组织，但叶柄更适合用作诱导愈伤组织的外植体。 2.2 不同激素组合对诱导半夏形成愈伤组织的影响 用6-BA、NAA和6-BA、2，4-D两种激素组合对半夏进行愈伤组织的诱导，接种1月后观察生长变化(图1、图2)。 由表4和表5可以看出，使用NAA诱导愈伤的最适激素浓度为MS+1.0 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1NAA，愈伤诱导率高达93.6%;使用2，4-D诱导愈伤的最适激素浓度为MS+0.5 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1 2，4-D，愈伤诱导率高达92.5%。使用两种组合1个月后，对半夏愈伤组织诱导率的影响不大，但是愈伤形态差别较大。使用6-BA、2，4-D诱导出的愈伤组织松软，呈黄白色，但生长量极小;而使用6-BA、NAA得到的愈伤组织则相对坚实，多呈绿色，且生长量大。 2.3 调整继代培养基后的效果 -BA、NAA及6-BA、2，4-D对半夏愈伤组织进行2次继代培养(1个 在分别使用6 月)后发现，使用NAA诱导的愈伤组织依然呈绿色，而且很坚实;而使用2，4-D诱导的愈伤组织生长很慢。将部分用MS+1.0 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1NAA诱导的愈伤组织，在用相同培养基继代2次后，改用MS+0.5 mg?L-1 6-BA+2.0 mg?L-1 2，4-D继代，继代培养2,3次后愈伤组织形态改变很大，颜色由绿色变为白色或黄白色，变得很疏松(图3)。 由表6看出，虽然调整培养基后，生长速率有所减缓，但愈伤变得疏松，成黄白色，且死亡率并没有增加，所以综合比较来看，进行优化处理后的愈伤诱导培养方法效率更高，可为半夏悬浮培养药物产业化生产提供参考。 3 结 论 在半夏愈伤组织诱导过程中，叶柄比叶片更适合用作诱导愈伤组织的外植体;使用6-BA、NAA及6-BA、2，4-D组合均可得到结果。使用NAA诱导得到的愈伤组织浓绿、坚实，更易形成丛生芽;使用2，4-D得到的愈伤组织多呈黄白色、疏松，适合作悬浮培养，但愈伤生长缓慢，且死亡率相对较高。在经过2次继代培养后调整继代培养基，通过对比表明，调整培养基后的愈伤组织不仅疏松，颜色呈黄白色，且愈伤组织生长较快，适合作悬浮培养。 参考文献: [1] 中国医科学院药物研究所.中药志(第2册)[M].第2版.北京:人民卫生出版社，1993. [2] 张洁，杨耀文，胡建林，等.组培半夏与野生半夏的生药学初步比较研究[J].云南中医学院学报，2006，29(2):11-14. [3] 章艳玲，李关荣，位运粮.中药半夏的研究进展[J].中国农学通报，2007，23(7):163-167. [4] 范美华，周吉源，彭瑜，等.半夏愈伤组织的诱导及增殖效应[J].山东中医杂志，2005，24(3):168-171. [5] 罗成科，彭正松.半夏疏松愈伤组织诱导的研究[J].西华师范大学学报:自然科学版， 2005，26(3):37-41.