芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道上皮MMP-9、TIMP-1表达的影响（可编辑）

芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道上皮MMP-9、TIMP-1表达的影响（可编辑） 芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道上 皮MMP-9、TIMP-1表达的影响 第卷第期年月 北京中医药大学学报 . .?科技之窗? 芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道上皮 一、.表达的影响 于会勇 李根茂葛东字黄文通 冯淬灵坤 刘治坤 张前李宝萍 北京;北京中医药大学基础医学院 北京中医药大学东直门医院 摘要:目的 探讨芪蛭益肺颗粒改善慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道重塑作用与其 干预基质金属蛋白水解酶、基质金属蛋白水解酶抑制剂一一表达间的关系。 方法只大鼠随机分为正常组、模型组和中药治疗组,采用香烟烟雾暴露及气道内滴入脂多 糖的联合造模方法建立大鼠模型,于实验第天起,模型组每天灌胃生理盐水次,中药 治疗组每天灌胃芪蛭益肺颗粒次,正常组正常喂养。各组大鼠于实验第、、天分批处 模型组第天 死,留取标本用免疫组化法测定气道上皮、一蛋白表达。结果 表达低于正常组,第天高于正常组,差异均具有统计学意义.,中药治疗组 各期表达与模型组差异无统计学意义;模型组.各期表达与正常组无差异,中药治疗组在 第天下调.的表达,差异具有统计学意义.。模型组/比值在 第、天较正常组降低,中药治疗组在第、天该比值均较模型组提高,差异均具有统计 学意义.。结论 芪蛭益肺颗粒在 前可以通过上调/一比值干预 模型大鼠小气道重塑。 关键词:慢性阻塞性肺疾病;小气道重塑;信号通路;动物模型;芪蛭益肺颗粒;大鼠 中图分类号:. :./......, ., ?, , ., ?, ?. ?, ; , ,:一一 ., . . “, , , . , . “,山 一 . .刘治坤,男,在读博士生 撑通信作者:冯淬灵,女,博士,教授,主任医师,博士生导师,:.. ?国家自然科学基金资助项目. 万方数据第期 刘治坤等芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道上 皮、.表达的影响 .. . . .小 ,一..“ “,..一 ? . :; ; ; ; ; 慢性阻塞性肺疾病 二抗试剂盒,批号;试剂 ,为慢性气道炎症性疾病,以不完全 盒,批号,均购自北京中杉金 可逆气流受限为特征,小气道重塑及肺气肿是其 桥生物技术有 限公司。 个关键病理表现,并与气流受限直接相关。 .主要仪器 小气道重塑的形成由众多细胞、组织结构、细胞因 切片机德国 ,显微镜本. 子、炎症介质、信号通路共同参与。基质金属蛋白水 , .图像分析软件美国 解酶 ,是一类参与 。 平衡细胞外基质 ,的重要 方法 . 蛋白酶,与组织重塑、纤维化等病理变化有关,改变 制备大鼠模型 及基质金属蛋白水解酶抑制剂 使用香烟烟雾暴露联合气道内滴人法建,的含量除能调 立模型。采用烟熏箱烟熏大鼠,每次点燃大前门香 节气道炎症外?,也能通过调控来干预 烟支,每个箱中一次烟熏只大鼠,用.% 小气道重塑。 生理盐水中配制为 /溶液。 芪蛭益肺颗粒针对气虚血瘀痰阻的根本病机来 大鼠连续香烟烟雾暴露 ,每天上午次,每 治疗,我们前期的实验结果表明该药可以减 次 ;分别于第、、天气道内滴入,滴 轻大鼠模型的气道炎症,缓解气道重塑,提高 药日不烟熏。既往研究结果表明该方法复制的大鼠 其肺功能心,并能够下调小气道上皮?。的表 模型病理改变符合人类病理表现,并体现 达旧。本次实验我们将明确芪蛭益肺颗粒对 了气虚血瘀痰阻的 证候特征”。气道滴人方法 模型大鼠小气道上皮、.的表达影响及 及操作同文献。 .分组及给药 其与小气道重塑的关系。 材料 大鼠随机分为正常组、模型组、中药治疗组,每 . 动物 组只。实验第天起,模型组大鼠按 / / 清洁级大鼠只,雌雄各半,鼠龄个 每灌胃生理盐水次,中药治疗组大鼠按 月,体重 ,北京华阜康生物科技股份有 约合生药. /,相当于人临床用量倍每 灌胃芪蛭益肺颗粒次,对照组正常喂养。 限公司提供,许可证编号:京。 . .药物与试剂 标本采集 芪蛭益肺颗粒由北京中医药大学东直门医院制 实验第、、天分批处死各组大鼠,每批 剂室生产,批准文号:京卫药制字,批号 只,每组各只。麻醉大鼠,仰卧固定于鼠板,开 ,主要药物为黄芪、黄精、水蛭、当归、陈皮等, 胸暴露肺部, 摘除肺脏,置于?生理盐水中漂洗 次,取左肺以%多聚甲醛灌注,放人倍多聚甲 每袋 。脂多糖购自美国公司,大前 醛固定,常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。 门牌香烟烤烟型,焦油量 ,烟气烟碱量. . 小气道上皮、一的免疫组化测定 ,烟气一氧化碳量 由上海烟草公司生产。 一抗:,批号;?,批号,均 按照中杉金桥免疫组化超敏二步法试剂盒说明 购自武汉博士德生物工程有限公司。兔超敏二步法 书进行,一抗均按:稀释,具体操作同文献。 万方数据 北京中医药大学学报 第卷 在相同显微镜放大倍数、相同相机曝光参数下使用 .均主要表达在小气道上皮细胞中,在 肺泡隔细胞、血管内皮中也有较强表达,在气道周围 摄像系统进行拍照,使用? .软件测定每个视野小气道阳性物质表达区域的 炎症细胞中表达较弱,蛋白在肺泡隔细胞表 达较弱。、.第天时在小气道周围 平均光密度值,值越高,蛋白表达越强。 . 统计方法 的表达见图、图彩图见插页。 . 小气道上皮、.蛋白表达的平均 采用 .统计软件,数据以均数? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 光密度值 差面?表示,多组间比较采用单因素方差分析 ,方差齐采用进行多重比 模型组第、天蛋白表达较正常组 ? 较,方差不齐采用’法进行多重比较。 降低,第天时差异具有统计学意义.; .为差异具有统计学意义。 第天较正常组表达上升,差异具有统计学意义 结果 .。中药治疗组与模型组比较第、天 .各组切片染色病理形态改变 表达升高,第天表达下降,但差异 模型组各期小气道周围均可见大量淋巴细胞浸 均无统计学意义。结果见表。 润,气道壁增厚,上皮结构紊乱不规则,上皮细胞脱 模型组第、、天一蛋白表达较正常 组升高,但差异均无统计学意义。中药治疗组较模型 落,肺组织血管明显增多。中药治疗组各期上皮结 组在第、、天.表达较模型组均降低,第 构较规整,肺组织血管较同期模型组明显减少,第 天开始小气道周围炎症细胞较模型组显著减少。 天差异具有统 计学意义.。结果见表。 各组大鼠第天时小气道病理改变见图彩图见 模型组第、天/一比值较正常 插页。 组降低,差异具有统计学意义尸.。中药治 . 、一在小气道上皮及肺组织中的 疗组在第、天比值较模型组升高,差异具有统 表达情况 计学意义.。结果见表。 各组大鼠第天肺组织轮廓清晰,、 表 蛋白在各组小气道上皮表达的平均光密度值;?; 枷;露;注:与正常组比.。 :木.表 ?蛋白在各组小气道上皮表达的平均光密度值;?; 枷;?; 注:与正常组比十.;与模型组比卯.。:女. ;.万方数据第期 刘治坤等芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠小气道上皮、.表达的影响 注:与正常组比.;与模型组比.。 :.;.讨论 瘀渐去,肺络隧通,气机和畅。临床表明芪蛭益肺颗 粒治疗取得了良好的疗效?。 小气道重塑是的重要病理特征,动物实 本次实验研究结果表明,模型组第、天时 验证实中胶原增多是这一病理变化的主要表 /.比值较正常组明显降低,说明一 现?胡。能够分解一种或多种组分, 相对于.表达减少,对胞外胶原的调节作用 与共同调节使的成分处在动态 以胶原的沉积、增多为主;中药治疗组这一比值较模 稳定中,/比值的变化反映了合成 型组都有上升,其中在、天时差异具有统计学 和分解的失衡。与也参与调节组织炎 意义,说明中药治疗组相对于一表达 症的过程,在包括等炎症疾病中的抗 增多,调节作用以胞外胶原的溶解、减少为主。前期 炎作用是目前研究热点。气道上皮形成的连续屏障 的研究结果表明,益气活血化痰法中药复方可以通 保护气道免受外界环境各种有害物质的损伤, 过减少气道壁胶原沉积干预气道重塑旧,本次研究 时反复的损伤和重塑最终导致上皮防御功能 提示、.可能参与了模型大鼠小气道重 的破坏,损伤同时伴随修复。气道上皮修复包括受 塑胞外胶原的调节过程,芪蛭益肺颗粒可以通过调 损伤周围上皮细胞的扩散、迁移和分化,迁移的上皮 节/.的比值来干预小气道重塑,减少 细胞释放蛋白成分可以为细胞提供支撑并刺 胞外基质沉积。 激更多的细胞迁移。上皮细胞释放的因子调节着细 另外,慢性气道炎症是的主要发病机制, 胞的迁移、增殖、分化和的重塑,抑制上皮中 能导致包括气道上皮破坏在内的众多变化,有研究 一的表达,能显著降低细胞的迁移?。气道 证实由臭氧暴露引起的小鼠气道上皮破坏与 上皮细胞与之间的相互作用是修复的核心,上 的低表达相关?,表明在气道炎症调控中 皮细胞释放受到自身及炎症细胞释放的调节 存在双重作用,这与对炎症的调控具有双向 因子的调控?。患者上皮修复功能存在异 性一致,既可以激活炎性趋化因子、炎性介质,又可 常【,反复的香烟刺激使部分吸烟患者气道及肺泡 。本次实验结果发现,模型组 以使之失活 上皮形成损伤与修复的慢性循环,导致的 在第天较正常组显著下降,第天表达显著升 发生‘“。 高。.模型组各期的表达较正常组都有升高, 多因其他肺系疾病久治迁延所致,属于 但均无统计学差异。中药治疗组各期较模型组都下 中医学“肺胀”范畴。气虚血瘀痰阻是稳定期 调了一的表达,第天差异具有统计学意义。 的主要病机特点,益气活血化痰是治疗的重 因此,芪蛭益肺颗粒是否通过、参 要方法?。痰瘀互结、痹阻肺络是小气道重 与炎症的调控干预气道重塑需进一步研究。 塑的基本病机,益气活血、化痰通络是干预气道重塑 综上,芪蛭益肺颗粒可以通过调节/ 的主要治法?。芪蛭益肺颗粒是学科带头人武维 .比值来改善模型大鼠的小气道重塑, 屏教授依据益气活血化痰法组方而成的院内制剂, 其作用机理可能与调节细胞外基质沉积和/或干预 黄芪、半夏、水蛭为方中主药。黄芪皮黄肉白,专人 炎症反应有关。 肺脾,善补元气;半夏辛能散结、燥能除湿、温能化 参考文献: 痰,以解络中痰凝;水蛭功专破血逐瘀,能人络以消. ? , 宿血顽痰。三药鼎足,攻补协同,能使正气日充、痰 万方数据 北京中医药大学学报 第卷 . , , , ,,:?. .冯淬灵,金焱,武红莉,等.益气活血化痰方对慢性阻 塞 . ,,:?. 肺疾病模型大鼠肺组织病理学的影响.中国中医药 , , . 信息杂志,,:?. : ,,: 冯淬灵,张前,刘治坤,等.芪蛭益肺颗粒对模型 . ?. 大鼠肺组织.表达的影响.北京中医药大学 . 学报,,:?. , , 武红莉,冯淬灵.慢性阻塞性肺疾病大鼠形态学比较研 ,, 究.心肺血管病杂志,,:?. . ,,: ?. 冯淬灵.慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气虚血瘀痰阻证 . 评价.中国中医药信息杂志,,:?. , , , ,’ , , .,, ? . 一. , ,,:?. .:?. 王琦,武维屏,田秀英.益气活血化痰法防治肺胀的临,’ , , . 床与实验研究.北京中医药大学学报,, ? , :“一. 一 冯淬灵,武维屏.络病理论与慢性阻塞性肺疾病气道重 , . ,,:?. 塑.北京中医药大学学报,,:?. . 一/一 , , , 冯淬灵,武维屏,万霞.益气活血化痰方对慢性阻塞性 ? 肺疾病患者生活质量的影响.中国中西医结合杂 .,,: 志,,:?. ?. . , , ?? , , , .一 ?? . ?? ,,:?. . ,,:?. , , ,, , , . . ?. :一 . ,,:?. 收稿日期: . , ,:?. ???卜一?。一一??卜。。一。。卜。。。?卜一??卜??卜??卜一?卜一?卜?卜一一十一一一一一一一一一一一一一一一一一一 关于正确使用统计学符号的通知 根据国家标准?统计学名词及符号》的有关规定,请作者书写统计学符号时注意:?样本的算 术平均数用英文斜体小写元表示,不用正体,也不用或中位数仍用;?标准差用英文斜体小 写,不用;?标准误用英文斜体小写,不用,也不用;?检验用英文斜体小写 ;?检验用英 文斜体大写;?卡方检验用希腊文斜体小写疋;?相关系数用英文斜体小写;?自由度用希腊文斜体小写 ;?样本用英文斜体小写;?概率用英文斜体大写。 万方数据 正文见第页 。 . ,?. :常组;模型组;中药治疗组。 : : 图 各组大鼠第天时肺组织病理学变化染色× 。 。。 。 . 狲 瓜 ’ .‘ 正常组:模犁组;中药治疗组。 : : 图各组大鼠第天时一的免疫组化表达 。 一 “× . 。。 峄 墨 / .~? ? ? .~ . ,/ 峙..』薯? 圈 止常组;模型组;中药治疗组。: : 图各组大鼠第天时一的免疫组化表达一?× . 万方数据