【doc】四个平菇菌种液体培养选育研究

【doc】四个平菇菌种液体培养选育研究 四个平菇菌种液体培养选育研究 安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.20O6,34(3).458—459责任编辑罗芸责任校对罗芸 四个平菇菌种液体培养选育研究 卜庆梅,王淑芳,王瑜2,许家英 (1.烟台师范学院生命科学学院,山东烟台264025~2.山东省烟台市海阳行村第一初级中学.山东烟台265128) 摘耍对4个平菇菌种PL-6,PL-39,PL-678,PL-J~3分别在25cc,160r/min恒温震荡培养箱中进行培养,然后对其茵球密度,茵球直径,茵 丝体干重及胞内外粗多糖等进行比较分析,结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,P德3是液体培养选育最佳优选茵种. 关键词平菇;液体培养;茵球;茵丝体;粗多糖 中图分类号$646.14文献标识码A文章编号0517—6611(2006)03—0458一cl2 R姻凹r?IIandC.onlOimativeB印哪.hnelItofFourKhldsotsI血"唧翟edCulturedP/eurotusostreats BUQing-mei(CollegeofLifeScienee,YantaiNormalUniversity,Yantai,Shandong264O25 ) AllstraetInthisexperiment,fourkindsofP/eurotusOStT"P.O~:PL-6,P39,PL-678,PL-de3, wereseparatelyculturedin25C~ntigv.de,160r/min. theirftalgushal/'sdensity.血hal/'sdiameter,myceliumdryweiOxtandofpolysaeeharide,theresult惴that瞄 thebestkindofpleurotusostreats. KeywordsP/eurotusostreats;Sub,~rgedculture;Fungusball;Hypha~IhiekII勘ycandies 平菇(PleurotusostreoIs),伞菌目,口蘑科,侧耳属,其肉肥 质嫩,味道鲜美,总糖含量高达444%,并含有各种维生素和 人体必需的氨基酸及微量元素.平菇作为高蛋白,低脂肪的 保健食品,不仅已进入千家万户,而且是食用菌出口商品中 的主要品种之一_】j.平菇是全世界栽培面积最大,可利用资 源最丰富,生长栽培技术最成熟,生物学效率高,经济效益比 较好的一种食用菌_2J. 但是,目前平菇栽培所用的菌种多为固体菌种,由于固 体菌种上下部位菌龄相差悬殊,往往造成发菌不均匀,影响 出菇的时间和产量,也给管理带来了困难.与固体菌种相 比,液体菌种具有流动性,易分散的特点.当接入栽培料后, 分布于整个培养料内,定植快,萌发早,发菌整齐,成品率高, 相应生物学效率也高l3].另外,液体培养平菇菌种采用深层 发酵生产工艺,生产条件稳定,有利于机械化,自动化生产. 液体培养菌丝体生长均匀一致,菌龄整齐,周期短,流程快, 产量高,成本低,是平菇菌种生产的发展方向. 从目前的研究情况看,对深层发酵平菇菌株的选育研究 较少.为此,笔者对4个平菇菌种进行液体培养,从中筛选 出适合液体发酵的良种.首先将搜集到的4个平菇菌种进 行复壮l_4J,然后对菌丝生长量,菌球直径,菌丝干重及胞内外 粗多糖含量等进行测定和比较. 1材料与方法 1,1供试菌种PL-6,PL-39,PL-678,PL德3(均由烟台师范 学院食用菌研究所提供). 1.2仪器设备Q-Q型震荡器(哈尔滨东联电子有限公 司).LS-B50L型立式压力蒸汽灭菌锅(上海医用核子仪器 厂),FAIO04型上皿电子天平(上海精科电子天平厂),超净工 作台(蚌埠净化设备厂).电热鼓风干燥箱(上海市实验仪器 厂),LRtt-250-A型生化培养箱(广东省医疗器械厂),电热恒 温水浴锅,抽滤机,以及离心机,刻度尺,量筒,三角烧瓶等. 1.3供试培养基 1.3.1母种培养基(PDA).马铃薯2o%,蔗糖2%,麸皮 作者筒介庆梅(1966一),女,山东烟台人.副教授.从事食(药)用真 茼的深屡培养,菌种选育以厦栽培技术研究. 收稿日期2OO5-12-02 5%,琼脂2%,MgS040.15%,KH2P040.1%. 1.3.2一级摇瓶培养基(可溶性淀粉培养基l2】).可溶性淀 粉5%,MgS040.15%,KH2PO40.3%,蔗糖1%,酵母膏0.1%. 1.3.3二级摇瓶培养基.马铃薯20%,葡萄糖2%,蛋白胨 0.5%,KH2P041.25%,0.15%,维生素B1lmg. 1.4试验方法 1.4.1菌种活化.将4个平菇菌种分别转接在PDA斜面培 养基上,于25?生化培养箱中培养5,7d. 1.4.2一级摇瓶培养.于500ml三角烧瓶内装150ml可溶 性淀粉培养基,高压常规灭菌后,每瓶接种约1rn3的活化菌 种3块,置于25?恒温培养箱中静止培养24h后,置于25?, 以160r/rain恒温振荡培养箱中培养6d. 1.4.3二级摇瓶培养.于500ml三角烧瓶内装200ml二级 摇瓶培养基,经高压常规灭菌后,以10%的接种量接入一级 摇瓶种子,置于25?,振速160r/rain摇床振荡培养4d. 1.5测定方法 1.5.1菌球大小.随机取培养基中菌球3o一50个置于培养皿 中紧密排成一排,测量总直径,求出菌球平均直径,重复3次. 1.5.2菌球密度.取10培养液,按一定比例准确稀释, 摇匀后取一定量在直径为9em的培养皿中摊匀,培养皿下 垫方格纸,进行计数,求出每毫克培养液中菌球个数.每次 处理重复3次. 1.5.3菌丝体干重.将培养好的菌液,以3000r/rain在离 心机上离心15mln,用蒸馏水洗涤菌球,再离心,然后将菌球 置于6o?恒温干燥箱内烘干至恒重,称量. 1.5.4多糖测定.?胞内多糖测定.取适量干的菌丝体, 经粉碎,过30目筛娟,按质量比1:20加入蒸馏水,95?下 浸提3次,每次时间为2h,合并3次浸提液,经减压浓缩1O 倍后,加入3倍体积的95%乙醇,4?低温下静置12h以上, 于3000r/rain下离心30min,将所得沉淀物于6o?恒温干 燥箱中烘干至恒重.所称得的重量即为胞内多糖的含量. ?胞外多糖的测定.发酵滤液经离心机离心后除去沉淀, 收集上清液,浓缩5倍,加入3倍体积95%乙醇,低温醇洗, 离心,收集沉淀物,于6o?恒温干燥箱中烘干至恒重,称量 所得即为胞外多糖的含量. 34卷3期1,庆梅等四个平菇菌种液体培养选育研究459 胞内多糖的量加上胞外多糖的量即为待测粗多糖的含量. 2结果与分析 2.1各参试菌种,级摇瓶培养结果4个平菇菌种在一级 摇瓶培养基质中生长差异较大(表1). 表1参试菌种一级摇瓶培养结果 从表1可以看出,PL-德3菌种在一级摇瓶培养基中生 长,其菌球直径较小,菌球密度最大,胞内多糖含量最高. 其菌丝体干重在培养6d后达到最高,比PL-6,PL-39,PL-678 分别高36.4%,8.4%,2.9%. 2.2各参试菌株二级摇瓶培养结果4个平菇菌种在二级 摇瓶培养基质中,刚开始呈混浊状,随着菌丝的生长,不断 地分泌胞外酶分解利用基质,基质则逐渐变为澄清.4个平 菇菌种在二级摇瓶培养基质中生长差异明显(表2). 表2参试菌种二级摇瓶培养结果 (上接第441页) 地中粒重稳定在45g以上,变化范围在45—65g,调节能力 强.籽粒无论大小饱满度均可达到一级. 4.2抗逆性强该品种耐高温,抗干热风,抗青干.一般 年份都能正常成熟.蜡粉层较厚,蚜虫达到防治指标的时 间比一般品种晚5,7d,一般年份防治1次即可,而一般品 种需防治2次.耐湿性好,1998年在试验区挑旗,灌浆期在 地表有水的情况下能够健壮生长至成熟,这一特性使得该 品种在稻茬湿地获得高产,得以大面积推广种植.抗盐碱, 在粱山县碱性地试验种植表明,该品种抗盐碱能力强,丰产 性好,现在该品种占该县小麦播种面积的70%左右. 4.3茎秆质量好茎秆坚韧有弹性,不易折断,抗纵向拉 力强,倒伏后背地生长能力强,后期倒伏,顶部节间直立性 好,基部节间生长健壮,对产量影响较小.一般品种倒伏 后,生长基本处停滞状态,造成大幅度减产. 4.4株型合理幼苗匍匐,能够充分利用光照资源,春生叶 片上冲,最大叶面积指数高,可以制造储存更多的干物质,灌浆 期叶片夹角较大,可充分利用光照提高灌浆速度,提高粒重. 5讨论. (1)合理组配亲本是选育优异品种的关键.该品种亲 本组配是3个亲本组配原则的良好例证:一是地理远缘,亲 本之一地处北方冬麦区,亲本之二地处冬性半冬性麦区. 二是亲本之一应为当地推广品种,父本775l当时在山东省 从表2可以看出,胞外多糖的分泌量与生物量呈正相 关,而且随生物量的增加,胞外多糖的量也随之增加.同 时,不同菌种其胞外多糖的分泌量是不同的,其中.PL-德3 表现最优,其菌球直径最小,菌球密度最大,胞内多糖,胞外 多糖含量最高.其菌丝体干重比PL-6,PL-39,PL-678分别 高29.1%,7.9%,2.7%. 3小结与讨论 (1)在该试验中,4个平菇菌种在摇瓶振荡培养条件下, 都能正常增殖菌丝体.菌丝体产量随着培养时间的延长而 逐渐增加,第5—6天最高. (2)PL德3菌种在一级摇瓶培养基中生长,其菌球赢 径较小,菌球密度最大,胞内多糖含量最高,其菌丝体干重 在培养6d后达到最高. (3)P德3菌种在二级摇瓶培养基中生长表现最优, 其菌球直径最小,菌球密度最大,胞内多糖,胞外多糖含量 最高,而且胞外多糖的分泌量与生物量呈正相关. 综上所述,m德3是该试验液体培养选育最佳优选菌种. 参考文献 1邹积华,丛明日.食用菌优质高产栽培技术[M].济南:山东人民出版 社,2000.70—71. 2罗传生,罗家燕.平菇栽培新法[M],北京:中国农业出版,1991.7—8. 3王淑芳庆梅,钟旭生,等.平菇液体菌种发酵料栽培研究[J].江苏 农业科学,21305,(3):106一l08, 4薛进,孟昭平.平菇良种提纯与复壮实验[J].食用菌,1997,(2):11—12, 5王淑芳庆梅,蔡德华.棉籽壳发酵料栽培平菇优良菌株的选育[J]. 食用菌,2001.8(1):30—33. -- t--,--t--,--t---+----t--?--t-?---t-----t-----+?---t--,--t-?一+"+n十一 的推广面积在66.67万hm0以上.三是优缺点能够互补,无 致命缺点,该品种综合了父本775.1高抗倒伏,抗干热风,抗 病,耐盐碱,株型好等优点和母本的抗寒性好,多花多粒,品 质优的特性,同时克服了父本775.1抗寒性差,母本82610 抗逆性差的缺点. (2)茎秆质量好,活力强,倒伏后背地生长能力强,应作 为选育品种的一个重要特性.济宁12号茎秆韧性好,倒伏 后茎秆仍能保持正常的活力,能够保证养分的运输,保持粒 重的稳定,而不像大部分品种,倒伏后茎秆死亡,造成"麦倒 一 把草"的景象.这是该品种育成10多年来,能够得到农 民的欢迎的最主要原因之一.茎秆质量好,在纤维结构上 表现为茎秆粗壮,基部茎节间壁厚,机械组织发达.在农艺 性状上表现为有弹性.但在育种工作中,一般只是凭经验 感觉,尚没有量化指标.建议用茎下节问抗纵向拉力的大 小作为体现茎秆质量优劣的一个量化指标. (3)JJ~强对生长发育起调控作用基因的研究,合理调控 小麦的生长发育节律.理想的生长发育节律应为苗期生长 速度快,根系发育快而强壮,分蘖多而强壮.干物质积累 多,作好养分储备.春季生长稳健,茎部节间短而粗壮,穗 分化时间长,利于形成大穗,保证有充足的库.后期衰老速 度慢,保持较高的活力.营养物质向库中调运强度大,达到 较高的经济系数.