油脂不皂化物的测定

油脂不皂化物的测定不皂化物是指在规定操作条件下，试样用氢氧化钾皂化后的全部生成物，用一种特定的溶剂提取，蒸发溶剂，干燥后的残留物。不皂化物包括天然类脂物，如：固醇、高分子脂肪醇及萜烯类化合物等。除此以外，任何在103oC的温度下被溶剂提取的不会发的有机杂质（如矿物油等）也可能存在。测定过程中，提取试剂主要采用乙醚，当气候条件或环境条件不允许时，可使用己烷。一.乙醚提取法原理：油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流的情况下进行皂化，用乙醚从肥皂液中提取不皂化物，蒸=蒸发溶剂并对残留物干燥后称量。试剂：（1）乙醚（不含过氧化物和残留物）（2）丙酮（3）氢氧化钾-乙醇溶液，c=lmol/L。在50mL水中溶解60g氢氧KOH化钾，然后用95%乙醇稀释至1000mL。溶液应为无色或浅黄色。（4）氢氧化钾水溶液，c=0.5mol/L。（5）酚酞指示剂溶液，10g/L的95%乙醇溶液仪器与设备（1）圆底烧瓶，带标准磨口的250mL。（2）回流冷凝管，具有与圆底烧瓶相配的磨口。（3）500mL分液漏斗，使用聚四氟乙烯活塞和塞子。（4）水浴锅（5）电烘箱，可控制温度在（103土2）cCo操作流程：称样f加氢氧化钾-乙醇溶液f回流皂化f加水震荡f冷却f转移f提取一洗涤一蒸发溶剂一残留物干燥一称量一结果计算。测定步骤：称取5g试样，精确至0.01g,放入250mL烧瓶中。加入50mL氢氧化钾溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后煮沸回流1ho停止加热，从回流管顶部加入100mL水并震荡。如果提取的不皂化物用于测定生育酚，则必须添加联苯三酚且尽快的完成操作（30min以内）冷却后转移皂化液到500mL分液漏斗，用100mL乙醚分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗涤液倒入分液漏斗。盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1min，小心打开活塞，间歇的释放内部压力。静置分层后，将下层皂液尽量完全放入第二只分液漏斗，如果形成乳化液，可加入少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液破乳。采用相同的方法，每次用100mL乙醚，再提取皂化液两次，收集三次提取液，放入有40mL水的分液漏斗中。轻轻转动分液漏斗。等完全分层后，弃去下面水层，用40mL水再洗涤乙醚溶液两次，每次都要剧烈震荡，且在完成后弃去下面水层。排出洗涤液时需要留加L,然后沿着其轴线旋转分液漏斗，等待几分钟让保留的水层分离，弃去水层，当乙醚溶液到达旋塞口时关闭旋塞。用40mL氢氧化钾水溶液、40mL水相连续洗涤乙醚溶液后，在用40mL氢氧化钾水溶液进行洗涤，然后用40mL水洗涤至少两次以上。继续用水洗涤，直到洗涤液加入1滴酚酞溶液后不出现粉红色为止。通过分液漏斗的上口，小心的将乙醚溶液全部转移到250mL的烧瓶中，此烧瓶需要预先在（103±2）oC下干燥，冷却后称量，精确至0.1mg，在沸水浴上蒸馏回收溶剂。加入5mL丙酮，在沸水浴上转动是倾斜握住烧瓶，在缓缓的空气流下，将挥发性溶剂全部蒸干。将烧瓶放在（103±2）oC烘箱中，干燥15min,然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1mg。按上述方法每隔15min重复干燥，直至两次称量质量相差不超过1.5mg，如3次干燥后仍然不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。当需要对残留物中游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4mL乙醇中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇。用氢氧化钾乙醇溶液滴定到相同的终点颜色。以油酸来计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。同一试样需要进行两次测定。用同样的步骤和试剂量进行空白实验，如果残留物超过1.5mg，需要对试剂和方法进行检查。结果计算：不皂化物含量按下式计算:叫-m2-m3X100其中：X——不皂化物含量，以质量分数计，％。m试样质量，go0m残留物的质量，go1m——空白实验的残留物质量，g2m——游离脂肪酸质量，如果需要，计算方法为0.28VXc(V3为滴定所用氢氧化钾乙醇标准溶液的体积，mL；c为标准氢氧化钾乙醇溶液的浓度，mol/L；0.28每毫摩尔油酸的质量，g)o两次测定结果的算数平均值作为结果。二.己烷提取法：原理：油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流的情况下进行皂化，用己烷或石油醚从肥皂液中提取不皂化物，蒸发溶剂并对残留物干燥后称量。试剂:正己烷沸程40-60oC的石油醚，碘价低于1,且不得含有杂质。10%乙醇溶液。酚酞指示剂，10g/L的95%乙醇溶液氢氧化钾-乙醇溶液，c=1mol/L。在50mL水中溶解60g氢氧K0H化钾，然后用95%乙醇稀释至1000mL。溶液应为无色或浅黄色。仪器与设备：（1）圆底烧瓶，带标准磨口的250mL。（2）回流冷凝管，具有与圆底烧瓶相配的磨口。（3）250mL分液漏斗，使用聚四氟乙烯活塞和塞子。（4）水浴锅.（5）电烘箱，可控制温度在（103土2）oC，或者真空干燥器，如旋转蒸发器或其他类似设备。操作流程：称样f加氢氧化钾-乙醇溶液f回流皂化f加水震荡f冷却f转移f提取一洗涤己烷提取物一蒸发溶剂一残留物干燥一称量一结果计算。测定步骤：称取5g试样，精确至0.01g,放入250mL烧瓶中。加入50mL氢氧化钾溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后煮沸回流1h。停止加热，从回流管顶部加入50mL水并震荡。冷却后转移皂化液到250mL分液漏斗，用50mL己烷分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗涤液倒入分液漏斗。盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1min，小心打开活塞，间歇的释放内部压力。静置分层后，将下层皂液尽量完全放入第二只分液漏斗，如果形成乳化液，可加入少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液破乳。采用相同的方法，每次用50mL己烷，再提取皂化液两次，三次提取液收集在同一分液漏斗中。用乙醇溶液洗涤提取液3次，每次用量25mL，并剧烈摇动，洗涤后弃去乙醇水溶液，每次弃去洗涤液后，保持分液漏斗中剩余2mL洗涤液，然后将分液漏斗沿其轴线旋转。静置数分钟，使剩余的乙醇水相进一步分离，然后弃去，当己烷溶液到达旋塞孔道时关闭旋塞。继续乙醇水溶液洗涤。等完全分层后弃去下面的水层。用40mL水在洗涤己烷溶液两次，每次都要剧烈震荡，且在分层后弃去下面的水层。排出洗涤液时需留加L，然后沿其轴线旋转分液漏斗，等待几分钟，分层后，弃去水层,直到洗涤液加入加入一滴酚酞指示剂后不呈粉红色。通过分液漏斗的上口，小心的将己烷溶液全部转移到已准确称量至0.1mg的250mL的烧瓶中［此烧瓶需要预先在（103土2）°C下干燥，冷却后称量，精确至0.1mg］，在沸水浴上蒸馏回收溶剂。将烧瓶放在（103±2）°C烘箱中，干燥15min,然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1mg。重复进行干燥操作，直至两次称量质量相差不超过1.5mg，如3次干燥后仍然不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。当需要对残留物中游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4mL正己烷中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇。用氢氧化钾乙醇溶液滴定到相同的终点。以油酸来计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。同一试样需要进行两次测定。用同样的步骤和试剂量进行空白实验，如果残留物超过1.5mg，需要对试剂和方法进行检查。结果计算：不皂化物含量按下式计算:叫-m2-m3X100其中：X——不皂化物含量，以质量分数计，％。m试样质量，go0m残留物的质量，go1m——空白实验的残留物质量，g2m——游离脂肪酸质量，如果需要，计算方法为0.28VXc（V3为滴定所用氢氧化钾乙醇标准溶液的体积，mL；c为标准氢氧化钾乙醇溶液的浓度，mol/L；0.28每毫摩尔油酸的质量，g）o两次测定结果的算数平均值作为结果。说明:索氏抽提器进行回收乙醚时应注意用水浴加热。试样的用量应与K0H乙醇溶液相符，如果油脂酸值较高，应适当补加KOH乙醇溶液。KOH乙醇溶液的浓度不需要进行标定。如果条件允许，尤其是不皂化物需要进一步检测时，可使用真空旋转蒸发器。