阿托伐他汀钙胶囊的人体生物等效性研究

· 262· 解放军药学学报 第 21卷 第4期 阿托伐他汀钙胶囊的人体生物等效性研究 邸晓辉 文章编号：1008—9926(20o5)o4一O262—04 中图分类号：R969．1 文献标识码：A 阿托伐他汀钙胶囊的人体生物等效性研究 邸晓辉①，杨永革 ，梅 巍 ，刘 静，许雪廷 (中国人民解放军北京军区总医院 药理科 北京 1OO7OO) 摘 要：目的 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 国产阿托伐他汀钙胶囊与进口阿托伐汀钙片剂(立普妥片)的生物等效性。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 22名男性健康志愿者 ， 采用随机、单剂量 、自身交叉对照试验设计，空腹口服国产阿托伐他汀钙胶囊和立普妥片 20mg，分别于服药前及服药后各时间 点采集血样 ，用 LC／MS／MS法测定血浆中阿托伐他汀的浓度 ，并计算 C一 、 一 、Tl／2、AUC(o_1)、AUC{o一 )等相关参数，利用 方差 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 及双单侧 t检验判断2种制剂是否具有生物等效性。结果 口服阿托伐他汀钙受试及参比制剂后，血浆中阿托伐他 汀的 C一 分别为 7．98±3．25、8．47±3．36t~g·L ；T一 分别为 1．37±0．64、1、20±1．01h；T1／2分别为 10、64 ±3．21、10．01±1． 81h；AUC{o — t)分别为 52、70±13．79、51．83±17．52／~g·L ·h；AUC(0一 )分别为 55．45±14．66、54．09±17．79／~g·L一 -h；2组参数均 无统计学差异(P>0．05)；受试制剂的相对生物利用度为(106．0-4-23．8)％。结论 国产阿托伐他汀钙胶囊与进 口立普妥片 剂具有生物等效性。 关键词 阿托伐他汀钙；立普妥 ；生物等效性；液质联用法 Studies on Bioequivalence of Atorvastatin Calcium Capsules DI Xiao-Hui，YANG Yong-Ge，MEI Wei，LIU Jing，XU Xue-Ting (Department of Pharmacology Beijing Military Command General Hospital，Beijing 100700 China) AI~TRAC'r：Aim To study the relative bioavailability of atorvastatin calcium capsules and imported lipitor tablets in healthy volunteers．M ethods In a randomized two—way crossover design，a single oral dose of 20mg atorvastatin calcium capsules(A)and lipitor tablets (B)were ven to 22 male healthy volunteers．The plasma atorvastatin concentrations within 48h after administration were determined with LC／MS／MS and parameters C ， 1／2，AUC(o — t)，AUC(o一 ) were obtained an d analyed with two—one side t test．Results The main pharmacokinetic parameters of domestic atorvas- tatin calcium capsule an d imported lipitor tablet were as follows：C眦x were 7．98-4-3．25 and 8．47±3．36 g·L_。，re- spectively；T咖 were 1．37-4-0．64 and 1．20-4-1．01h，respectively；T 1／2j3 were 10．64-4-3．21 and 10．01±1．81h，re- speetively；AUC(o—t)were 52．70 4-13．79 an d 51．83± 17．52 g‘L一 h，AUC(o一 ∞)were 55．45 4-14．66 and 54．09 4- 17．79ktg‘L一 h，respectively．There is no statistically significant difference between these two test groups．Th e relative bioavailability of the test capsule Was (106．0-4-23．8)％．Conclusions The atorvastatin calcium capsules and lipitor tablets are bioequivalent． KEY WORDS：Aatorvastatin calcium ；Lipitor；Relative bioavailability；LC／MS／MS 阿托伐他汀钙(Atorvastatin Calcium Capsules)是 一 种新型的3．羟基．3．甲基戊二酰辅酶 A(HMG-CoA) 还原酶抑制剂_1j，临床试验已证实可降低总胆固醇 (30％ ～46％)、低密度脂蛋白(41％ ～61％)、载脂蛋 白B(34％ ～50％)及甘油三酯(14％～33％)，同时不 同程度地升高高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A， 其疗效均高于洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀 ]。 用于治疗杂合子型的家族性高胆固醇血症、非混合 性高脂血症者，包括非胰岛素依赖型糖尿病患者。 阿托伐他汀钙可有效降低纯合子家族性高胆固醇血 症患者的低密度脂蛋白、胆固醇水平，通常降脂类药 物对这类患者疗效不佳。 由于阿托伐他汀钙在人体血浆中以阿托伐他汀 的形式存在，本试验采用 LC／MS／MS法测定人血浆 中的阿托伐他汀的浓度，并对受试制剂阿托伐他汀 的药代动力学特性、生物利用度及其与参比制剂的 生物等效性进行研究。 1 材料和方法 1．1 仪器 质谱仪：API 4O0O型液相色谱一三重四 ① 作者简介：邸晓辉(1961一)，女，北京人，副主任药师。研究方向：新药临床研究。Tel：(010)66721842 维普资讯 http://www.cqvip.com 解放军药学学报 2005年 8月 第 2 鲞 盟 4塑- 』 ! 级杆质谱联用仪，电喷雾离子化源(ESI源，或 Turbo Spray源)(美国 ABI公司)；液相色谱输液泵：Agilent 1100系统：四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、 柱温箱(美国 Agilent公司)；预柱：C18，4mm×3．Omm (Phenomenex，Torrance，CA，USA)；分析柱：Symmetry C18(3．5tma，50ramX4．6mm)，(Waters公司 PN：wAT 200625)数据系统：Analyst1．4软件(美国ABI公司)。 1．2 药品和试剂 阿托伐他汀钙 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品(原料药) (北京红惠生物制药股份公司，纯度 99．8％)。氯硝 西泮(elonazepam)对照品(中国药品生物制品鉴定 所)。受试制剂：阿托伐他汀钙胶囊(1Omg／粒，河南 天方药业股份有限公司，批号 040901410)。参比制 剂：阿托伐他汀钙片剂(立普妥)(1Omg／片，美国辉瑞 公司，批号 J2O030o47)。乙腈、甲醇、甲基叔丁基醚 均为色谱纯，乙醚、乙酸乙酯均为分析纯。 1．3 色谱及质谱条件 色谱条件：流动相：甲醇 一 乙腈 一0．1％甲酸水溶液(3O：40：30，v／v)；流速：0． 5ml／min；进样量：20 ；柱温：30~C；检测器：质谱。 质谱条件：离子源为电喷雾离子化(ESI)源；喷 雾电压 IS为4 500V；雾化温度为 450℃；雾化气 NEB (GAS 1)为35 Psig；帘气 CUR为 25 Psig；碰撞气 CAD 为6 Psig；辅助气 AUx(GAS 2)为30 Psig；检测方式为 负离子多离子反应监测(MRM)，用于定量分析的离 子反应分别为 m／z 559，2--~m／z440．2(阿托伐他汀)， m／z 316一m／z 27O(内标，氯硝西泮)，碰撞诱导解离 (CID)电压均 为 35V；驻 留时间 (dwell time)均 为 200ms。 1．4 试验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 选择 22名健康成年男性受试者， 平均年龄为 25．7岁 ±5．0岁，平均身高为 173．3± 4．4em，平均体重为 67．4±6．2kg，受试者经心电图、 血压、血尿常规及肝肾功能等检查 ，各项检查指标均 正常。于试验前 由本人签署知情同意书，并经院伦 理委员会批准后进行试验。 试验采用双周期随机交叉双盲试验。将 22名志 愿者随机等分成 2组(A组和 B组)，第 1试验周期 A组服用受试制剂(阿托伐他汀钙胶囊)，B组服用 标准参比制剂(立普妥片剂)，经 2周净化期后进行 第 2周期试验，A组服用标准参比制剂，B组服用受 试制剂。 健康受试者于试验前 1d吃清淡晚餐后收住我 院 I期临床试验病房，禁食 12h，于试验当天早晨空 腹12I服单剂量 20mg国产阿托伐他汀钙胶囊(1Omg／ 粒 ×2粒)或进 口阿托伐他汀钙片剂(1Omg／片 X 2 片)，以20Oral温开水送服。服药后 2h可以自由饮 水，4h进统一标准午餐。分别于服药前及服药后 0． 33、0．67、1、1．5、2、3、5、8、12、24、48h各采取前臂静 脉血 5ml，立即移入经肝素处理的试管中，0．5h后(3 O00r／min)离心 lOmin，分离血浆，置 20℃冰箱保存待 测。间隔2周后交叉给药，重复试验。试验期间禁 用其他药物及含咖啡因、果汁类的饮料，禁止吸烟、 饮酒。 将受试者口服国产待测阿托伐他汀钙胶囊与进 口参比阿托伐他汀钙片剂后，阿托伐他汀的血药浓 度列表并计算其平均值及标准差，绘制血药浓度一时 间曲线；计算主要药物动力学参数，以梯形面积法计 算 AUC，求出每一受试者口服阿托伐他汀钙受试制 剂的相对生物利用度，并求出其均值及标准差；利用 方差分析及双单侧 t检验对 AUC和 c 进行统计 分析，并进一步评价国产待测阿托伐他汀钙胶囊和 进口参比阿托伐他汀钙片剂的生物等效性。 1．5 血浆样本处理 于 0．5ml血浆中加入 lOO~d蒸 馏水和 10o 内标溶液(20p．g·L 氯硝西泮的水溶 液)，加入 10o 碱化试剂(0．1mo]·L 的 Na2C03)， 涡旋混合 20s，超声 lmin，再加入 lOOtA酸化试剂 (1mo|·L 的盐酸)，涡旋混合 20s后，加入 3ml有机 提取溶剂(乙醚一正己烷 一乙酸乙酯：5：5：2)，涡旋 混合 1．Omin，振荡 lOmin(200次／min)，离心(3 O00r／ min)lOrnin后，取上层有机相至另一干燥试管中，于 40℃空气流下吹干，残留物于0．2ml(甲醇 一乙腈 一 水：30：30：4o)溶解，取 20 进样，记录色谱图。 1，6 方法专一性 分别取 6名志愿者的空白血浆 0．5ml，除不加内标溶液外，其余按 1．5“血浆样本处 理”项下方法操作，进样 20 进行 LC／MS／MS分析， 获得空白样品的色谱图；将一定浓度待测物的标准 溶液加入空白血浆中，依同法操作，获得相应的色谱 图；同样方法得到志愿者血浆样品的色谱图。阿托 伐他汀和内标的保留时间分别为0．99、0．55rain。色 谱图(略)与空白生物样品的色谱图比较，证明生物 样品中内源性物质不干扰阿托伐他汀及内标物氯硝 西泮的测定。 1．7 标准曲线 取空白血浆 0．5ml置离心试管中， 加入 loo~a含阿托伐他汀不同浓度 的标准系列溶 液，使成相应血浆浓度。除不加 1o0出水外，其余按 1．5“血浆样本处理”项下方法操作，分别以生物样 品中待测物的浓度为横坐标，以待测物与内标的峰 面积比为纵坐标，用加权最jJ~--乘法(w：1／x2)进 行回归计算，求得直线回归方程，即为标准曲线： Y=0．088 3 C +0．000 92，r=0．998 5 维普资讯 http://www.cqvip.com 解放军药学学报 2OO5年8月 第21卷 第4期 』 堡 鳖 同时随行空白生物样品，但计算时不包括该点， 仅用于评价干扰。测定阿托伐他汀的线性范围为 0．08～20．0fig·L～，定量下限为标准曲线的最低浓 度点。 每个分析样品(1d内测试的同种样品)制备一 条标准曲线，标准曲线的血浆浓度同方法确证。 为保证本分析方法准确、可靠，在对血浆样品测 试时，对本方法连续 3d进行方法确证，结果表明，阿 托伐他汀的血浆浓度在 0．08～20．0fig·L 范围内线 性关系良好，r在 0．998 2～0．999 4之间。阿托伐 他汀的血浆样品定量下限浓度为 0．08fig·L～。 1．8 精密度和回收率 取空白血浆 0．5ml，按 1．7 “标准曲线”项下的方法制备高、中、低 3个浓度(16． 0,2．0,0．2fig·L )的质控样品(Qc)，依法与标准曲 线同批测定，重复测定 4d，以当Et的标准曲线计算 QC样品的浓度。根据 Qc样品的结果，求算方法的 精密度和准确度。同时考察最低定量浓度(o．o8ffg· L )的Et内精密度和准确度。要求高、中、低浓度 的Et内和Et间 RSD不超过 15％，最低定量浓度的日 内 RSD不超过 2O％。 由结果可看出，本试验中阿托伐他汀(浓度分别 为 16．0、2．0、0．2fig·L )的 RSD均小于±2．7％，最 低定量浓度(0．08t~g·L )的 RSD为0．15％。 采用单因素方差分析法计算分析方法的Et内和 Et间精密度。结果表明，阿托伐他汀(浓度分别为 16．0、2．0、0．2fig·L )的Et内 RSD均小于 5．2％，Et 间 RSD均小于 4．3％，最低定量浓度(0．08fig·L ) 的Et内 RSD为7．3％。 取空白血浆0．5ml，按 1．7“标准曲线”项下的方 法制备高、中、低 3个浓度(16．0、2．0、0．2fig·L )的 样品，每个浓度测定 6个样品。以待测物的峰面积 与相应浓度的标准溶液直接进样的峰面积比计算回 收率。同法考察内标的回收率。 阿托伐他汀血浆浓度为 16．0,2．0,0．2fig·L 时 的回收率分别为 73．O％、70．1％、74．3％，RSD分别 为 2．57％、0．71％、1．78％。内标氯硝西泮的回收率 为 86．9％。RSD为 2．57％。 1．9 稳定性 对阿托伐他汀在血浆中室温放置 4h、血浆样品按样品预处理项下操作后室温放置 4、 24h及在血浆中3次冷冻一解冻循环的稳定性进行 考察。结果表明，阿托伐他汀在血浆中及处理后流 动相溶液中稳定。 1．10 质控样品 每个分析批生物样品测定时应建 立新的标准曲线，并随行测定高、中、低 3个浓度的 质控样品(QCs)。每个浓度至少双样本，并应均匀 分布在未知样品测试顺序中。当未知样品数 目较多 时，应增加各浓度质控样品数，使之大于未知样品总 数的 5％。质控样品测定结果的偏差一般应小于 15％，低浓度点偏差一般应小于 20％，最多允许 1／3 不在同一浓度的质控样品结果超限。 2 实验结果 2．1 血药浓度 22名受试者单剂量 口服国产待测 阿托伐他汀钙胶囊和进口参比阿托伐他汀钙片剂后 各时间点平均血药浓度 一时间曲线，见图 1。 10．130 8．∞ 6．130 蠖 4．∞ 蠕 ● 2．∞ 0．130 t，h 图 1 阿托伐他汀钙胶囊及进口参比阿托伐他汀钙片剂平均药一时曲线 1 Concentration— time aln，嚣 of atorvastatin calcium 衄 ll嚣 and lipitor tablets 2．2 数据处理 将受试者 口服国产待测阿托伐他 汀钙胶囊及进口参比阿托伐他汀钙片剂后的血药浓 度数据，经 3P97程序处理，求算出有关的药代动力 学参数，并用梯形面积法计算药 一时曲线下面积 AUC(0一 )，根据 Fr=AUC受试／AUC参比 X 100％ 求算国产待测阿托伐他汀钙胶囊的相对生物利 用度。将口服受试和参比制剂后的药代动力学参数 采用配对 t检验进行分析。对 C一 、AUC(o_1)和 AUCf0_ )数据进行对数转换后，采用方差分析对 2 种制剂的生物等效性进行评价。 2．3 药代动力学参数 根据血药浓度 一时间曲线 末端直线部分的试验点，以ln C对t进行回归，求得 消除速率常数 ke；C一 、 一 为试验的实测值；用 梯形面积法计算样品的 AUC(0_1)、AUC(0_ )。 AUC(o一 )=AUC(o—t)+ C t／k 主要药动学参数详见表 1。 2．4 生物等效性研究 将单剂量 口服国产阿托伐 他汀钙胶囊及进口阿托伐他汀钙片剂(立普妥)后的 AUC(o_1)、AUC(o一 )和 C一 分别进行对数转换后进 行方差分析，再采用双单侧 t检验法对国产阿托伐 他汀钙胶囊和参比片剂的生物等效性进行评价。 2．4．1 以口服 2种制剂后的 AUC(0_ )评价生物等 效性 (1)双单侧检验：由试验数据计算得检验统计 维普资讯 http://www.cqvip.com 并放军药学学报 20O5年 8月 第 2l卷 第 4期 Pharm J Chin PIA Vol 21 No 4 Aug2005 量为 T1=5．175，T2=3．807，查 t单侧分位数表 T1’0 ． ∞(20)=1．725，贝0 T1>1．725，T2>1．725 l司时成 立，所以判定国产待测阿托伐他汀钙胶囊和参 比片 剂生物等效。(2)90％的置信 区间：试 验数据经 3P97计算得国产待测阿托伐他汀钙胶囊生物利用 度参数 AUCf0-I1平均值的 90％置信区间为 95．O％ ～ 112．7％，落在参比片剂的 80％ ～125％的置信区 间内，所以国产待测阿托伐他汀钙胶囊和参 比片剂 物等效。 表 1 阿托伐他汀钙胶囊与立普妥片的药动学参数比较{；±s) Tab 1 C IlI —s咖 ofplmm-taeokineticimrameters be r伐m atorvastati~ealeimm瑚 瞄andlipi tablets(；±s) 2．4．2 以口服 2种制剂后的 AUCf0． )评价生物等 效性 (1)双单侧检验：由试验数据计算得检验统计 量为 T1=4．987，T2=3．523，查 t单侧分位数表 T1’0∞(20)=1．725，贝0 T1>1．725，T2>1．725同时成 立，所以判定国产待测阿托伐他汀钙胶囊和参比片 剂生物等效。(2)90％的置信区间：试验数据经 3P97计算得国产阿托伐他汀钙胶囊生物利用度参 数 AUC(0-l1平均值的90％置信区间为94．9％～113． 8％，落在参比片剂的 80％～125％的置信区间内，所 以国产阿托伐他汀钙胶囊和参比片剂生物等效。 2．4．3 以口服2种制剂后的 C 评价生物等效性 (1)双单侧检验：试验数据经 3P97计算得检验统计 量为 T1：2．226，T2=4．218，查 t单侧分位数表 T1’0 ．∞(20)=1．725，贝0 T1>1．725，T2>1．725同时成 立，所以判定国产阿托伐他汀钙胶囊和参比片剂生 物等效。(2)90％的置信区间：试验数据经 3P97计 算得国产阿托伐他汀钙胶囊生物利用度参数 C 平均值的 90％置信区间为 82．8％～105．2％，落在 参比片剂的 70％ ～143％的置信区间内，所以国产 阿托伐他汀钙胶囊和参比片剂生物等效。 2．5 受试制剂的相对生物利用度 由每名受试者 口服 2种制剂的阿托伐他汀的药时曲线下面积 AUC(o-t1，计算出受试制剂的相对生物利用度，得受 试制剂阿托伐他汀的平均相对生物利用度为(106．0 ±23．8)％。 2．7 结论 本试验结果表明，22名健康男性志愿 者双周期随机交叉口服单剂量 20rag国产阿托伐他 汀钙胶囊和参比阿托伐他汀钙片剂后药动学参数见 表 1。国产阿托伐他汀钙胶囊对参比片剂的相对生 物利用度为(106．0±23．8)％。统计学分析，口服 2 种阿托伐他汀钙制剂后阿托伐他汀在人体内的药代 动力学参数无显著差异(P >0．05)。经方差分析 和双单侧 t检验，表明国产阿托伐他汀钙胶囊与进 口参比阿托伐他汀钙片剂具有生物等效性。 3 讨论 3．1 与文献方法【 ]相比，本法 同样具有操作简 单，专属性强，灵敏度高的特点。 3．2 志愿者口服受试及参比制剂后的 一 分别为 1．37±0．64、1．20±1．Olh，但其中一人的 一 分别 为 3、5h，分析可能为个体差异，具体原因有待进一 步分析、探讨。 参考文献 ： l1j Plosker GL，Wagstaff AJ．Fluvastatin：a review of its pharma— eology and use in the rrmnagement og hypercholesterolaemia lJj．D／-／／g8，1996，51：433 l2j NaoumovaRP，MaraisAD，Mountney J，et a1．Plasmameval— onic acid，an index of cholesterol synthesis in vivo and respon— siveness to HMG—CO A reductase inhibitors in familial hyper- cholestemlaemia[Jj．Atherosclerosis，1996，119：203 [3] Blum CB．Comparison of properties of four inhibitors of 3-hy— droxy-3一methylglutaryl—coenzyme A reductase[J]．Am J Cardiol，1994，73 Suppl D：3D l4] Bullen ww，Miller RA，Hayes RN．Development and valida— tion of a high— performance liquid chromatography tandem rrlass spectrometry assay for atorvastatin．oaho—hydroxy ator— vastatin，and para—hydroxy atorvastatin in human，dog，and rat plasma[J]．JAm SacMass Spectrom，1999，10(1)：55 l5 J Shah VP，Midha KK，Dighe S，et a1．Analytical methods vali— clarion： bioavailability，bioequivalence and pharmacokinetic studies[JJ．JPharm Sc／，1992，81：309 (收稿 日期：2OO5．04—07；修回日期：2005—06—06) (本文编辑 梁爱君) 维普资讯 http://www.cqvip.com