犬皮肤真菌病中医治疗药物的研究

犬皮肤真菌病中医治疗药物的研究 【,,】，在犬睡前刷牙或让其采食时增加口腔的咀嚼以便及时清除食物残渣的菌斑、软垢。致谢 感谢钱存忠、赵艳兵、刘永旺、宋旭东、宋大鲁、史雄、兰爱红、武卫泽、皱敦铎、贺星亮、李刚等同志在此次调查研究过程中提供的支持和帮助。感谢南京大学现代分析中心红外研究室朱卫高级工程师，南京理工大学化工学院环保系李健生副教授在尿石样品分析过程中提供的帮助。 犬皮肤真菌病中医治疗药物的研究 马琪,，宋旭东,，宋大鲁“,，芮荣,(,(南京农业大学动物医学院，江苏南京,,,,,,;,(南京师皇宠物医院，江苏南京,,,,,,) 摘要:本研究旨在研制一种具有抗真菌作用的复方中药。从皮肤真菌病患犬分离出,种病原真菌:犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、絮状 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 皮癣菌和马拉色菌。采用试管内药基法测定,,味中药的抑真菌活性，筛选出,,味效果较好的药物，再测定其最小抑菌浓度(,，,)。选用,种抗真菌西药，测定其,，,值。根据上述抑菌实验结果，设计,个中药组方，同时引入临床已有成方作为对照组，采用,因素,水平正交实验设计，最终筛选出体外抑真菌效果优良的中西药复合处方，命名为“复方抗癣剂”:以黄芩、玄参、川芎、土槿皮、厚朴等,味中药为主，中药总浓度为,, ,,,,,，再辅以,(,, ,,,,,冰醋酸。刺激性和安全性实验结果表明，该复方抗癣剂无皮肤刺激性、无毒性，属实际无毒类药物。用复方抗癣剂全身药浴，,次,周，,, ,,,,次，结合使用复方抗癣剂制成的喷剂喷涂患部，,次,,，连用,, ,，用药后抑菌率达,,(,,。 关键词:犬;皮肤真菌病;中药 犬皮肤真菌病临床分布广、病程长、治愈难、易复发，可在动物与动物、动物与人之间传播，造成严重的公共卫生问题。常用的抗真菌药物主要有多烯类、唑类、丙烯胺类、细胞壁抑制剂等，这些药物大多价格较贵、有毒副作用，并且因耐药菌株的增多，使之应用和疗效受到限制…。中药是我国的传统优势资源，其价格低廉、效果确实，具有广阔的开发利用前景。本实验旨在通过对中西药物的筛选，研制一种有效的复方抗真菌制剂组方，以期为宠物临床药物的开发奠定基础。,材料与方法,(,供试动物 南京师皇宠物医院门诊皮肤真菌病患犬，经临床诊断、显微镜检查、伍氏灯检查等确诊。,(,中西药物作者简介:马琪(,,,,,,)，男，山西晋城人，硕士研究生，研究方向为小动物疾病。，通讯作者，,,,:,,,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,(,,,(;, ,, 选择,,味具有抗真菌作用的中药，包括厚朴、丹参、蒿本、木通、川芎、白芍、百部、苦参、玄参、青蒿、熟地黄、土茯苓、白癣皮、黄柏、夏枯草、藿香、拔契、防风、生黄芩、丁香、紫苏叶、漏芦、槟榔、乌梅、白头翁、菖蒲、虎杖、使君子、土槿皮、蛇床子、’地肤子等。分别取各味中药,,,，加水,,,,,,,,,，开锅后煮,,,,,，将药汁用纱布滤出:再重复,次，合并滤液，浓缩至,, ,,，制得生药浓度为,,,,,,,,,的中药水煎液为中药原液。 选取,种临床常用的抗真菌西药:抗癣特片(特比荼酚,,,,,,片)、里素劳(酮康唑片,,,,,,片)和冰醋酸(,,,,,,,,,),，,,用于本实验。,(,病原真菌的分离培养 门诊犬皮肤真菌病病例，经刮片检查为真菌阳性或伍氏灯检查见荧光者，用,,,酒精作患部消毒后，采集毛发数根接种于沙氏培养基(,,,)，,,。,连续培养,,,,,，作菌落宏观检验(菌落生长快慢、色泽、表面形状等)，并通过镜检(微观检查)进行真菌鉴定?,,: 以菌落生长的快慢和特征等来决定何时镜检或终止培养，确定受试真菌为犬小孢子菌 (,,;,,,,,,,, ; ,,,,,,,,,，,,,,)、石膏样小孢子菌(,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,)、絮状表皮癣菌(,,,,,,,,,,,,,, ,,,;;,,,,,,,,,，,,,,)和马拉色菌(,,,,,,,,,,砌,忽, (,,,,,),,,,,,,)。,(, ,,味中药体外抑真菌实验〔,,,〕,(,(,真菌菌液制备 常规制取,,,培养基，将分离保存的病原真菌接种于,,,培养基中央，,,。,活化培养,,,,,;加含,(,,吐温一,,的生理盐水,,,于活化好的菌苔表面;刮取菌苔，置于组织研磨器中研磨,, ,,,，至悬液呈毛玻璃状;利用血细胞计数板，调整菌液浓度为(,,,,,)×,,,;,,,,,，备用。,(,(,药基制备 常规制取,,,培养基，分装至,,,支试管内，每管,(, ,,，置斜面冷却备用。分别取各中药原液,(, ,,加入上述试管内，每味中药作,支试管，共计,,×,,,,,支，分别编号;设阳性对照组,支试管，分别加入浓度为,, ,,,,,的特比萘芬,(, ,,;设阴性对照组,支试管，分别加入生理盐水,(, ,,;共计试管,,,支。,,,”,高压灭菌,, ,,,，置斜面，冷却备用。,(,(,接种 用微量加样器吸取菌液, , ,，接种于药基表面，涂布均匀;置于,,。,恒温培养,周，观察生长情况。按照真菌生长发育情况，以“，”或“一”表示中药对病原真菌“有”或“无”抑制生长的作用。,(, ,,味中药最低抑菌浓度(川,)测定,(,(,菌液制备 同,,味中药体外抑真菌实验中菌液制备的方法。,(,(,药基制备 准备试管,,支，另加阳性对照和阴性对照各,支，计,,支;由于有,种不同的病原真菌，故共需试管,,,支:分别编号。每支试管内加入,,,培养基,(,, ,,:,,味中药，每味中药作,个浓度梯度。取, ,,注射器，分别吸取中药原液,(, ,,,,，加入含培养基试管内,(,,,,，药物浓度稀释为,,,(即,,, ,,,,,)。继续抽取生理盐水至,(, ,,刻度，再加入含培养基试管内,(,, ,,，药物浓度稀释为,,(即,, ,,,,,);依次制备,(,,(,, ,,,,,)、,(,,,(,,(, ,,,,,)、,(,,,,(,(,, ,,,,,)的药基，,,,”,高压灭菌,, ,,,,，置斜面冷却备用。,(,(,接种 微量加样器吸取菌液, , ,，接种于药基表面，涂布均匀;置于,,。,恒温培养,周，观察生长情况。,(,(,最低抑菌浓度(…;值)的测定 按照真菌生长发育情况，以“一”、“，”、“，，”、“，，，”、“，，，，”,个级别，表示中药的抑菌效果。真菌培养,周后，用宏观检验法判定终点。与生长对照组比较，生长完全抑制，培养基清亮所对应的最低药物浓度判为药物的最低抑菌浓度。,，,西药,，,测定 取特比萘酚、酮康唑,片，分别制备,,,,,,、,(,,,,,,、,(,,,,,,,、,(,,,,,,,,、,(,,,,,,,,,等,个浓度梯度药基:取冰醋酸溶液，分别配制,, ,,,,,、, ,,,,,、,(,,,,,,;,(,,,,,,,;,(,,,,,,,,等,个浓度梯度药基，按上述方法进行抑真菌实验，测定药物的,，,值。,(,中西结合组方体外抑真菌实验 为寻找合适的中西结合处方，设计,因素,水平正交实验，确定中药组方、中药浓度、西药 掣隹疾煲蛩兀 扛鲆蛩匮?瘢掣鏊 健,蛩厮 奖砑 恚薄,捎蒙鲜龇椒ń 刑逋庖终婢 笛椤?表，(中西药结合复方因素水平表 ,,,,,，(,,,, ,, ,,;,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,, ;,,,,,,,,,, , , ,,, ,,,, ,,,,;,, ,,,,,,;,,,,;,,,,(,组方的安全性和刺激性实验,(,(,安全性实验 中药浓度为,,, ,,,,,，调整冰醋酸为,, ,,,,,;测定小鼠最大耐受量(,,,)。取健康昆明小鼠,,只，体重,,,,,,，随机分为试验组和对照组，每组,,只，雌雄各半。试验组 ,,采用,,, ,,,,,浓度的药物(为药物的最高浓度)，按,(, ,,,,,,,灌胃给药,次，每次间隔, ,(累积折合日用中药量为,,,,, ,,,,,,、冰醋酸,,,, ,,,,,,);对照组以生理盐水代替药物，灌药后连续观察, ,。, ,后全部小鼠采用颈椎脱臼法致死，剖检并 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 心、肝、脾、肺、肾等组织器官的病理变化。,(,(,皮肤刺激性实验 家兔,只，体重,(, ,,左右。于给药前,, ,将兔脊柱两侧用,,硫化钠去毛，去毛区域约,, ;,,，去毛,, ,后检查去毛区域皮肤有无受损。分为,组实验，即完整皮肤组、破损皮肤组。破损皮肤的制作采用消毒针头在去毛消毒皮肤上划“,”字 云し羟嵛? 龋 笥伊讲嗥し舻钠扑鸪潭然 疽恢隆,谝徊嗤暾 し糇椋 蒙 硌嗡 ?,,涂抹，作为对照;另一侧用方剂, ,,涂抹:并分别用浸有生理盐水和复方抗癣剂的纱布敷料隔离受试部位。破损皮肤组的处理与完整皮肤组相同操作。,, ,后用温水去除受试物并观察，然后涂抹相同受试物，连续,,，并于末次涂药后,、,,、,,和,, ,观察脱毛区域的皮肤反应。,(,组方的药效检测 随机取家犬,只:,只受试犬，,只对照犬。分别从犬头、嘴、耳、背、腹、前肢、后肢、尾部等,个部位采集毛样，接种于,,,固体培养基上，,,”,培养,,,,,,,。,只受试犬用组方药液全身药浴，,次,周，,, ,,,,次;同时，用组方制成的喷剂，喷涂于取样部位，,,,,次，,次,,;连续用药,,,。再次从取样部位采集毛样作真菌分离培养。对照犬，在实验过程中仅采取常规洗澡，不用药物。,结果,(,单昧中药的抗真菌效果 试管内药敏试验对犬小孢子菌抑制作用较好的中药有厚朴、川芎、玄参、青蒿、熟地黄、土茯苓、黄柏、夏枯草、藿香、生黄芩、丁香、乌梅、白头翁、使君子、土槿皮、蛇床子、地肤子。对石膏样小孢子菌抑制作用较好的中药包括厚朴、川芎、玄参、青蒿、熟地黄、黄柏、防风、生黄芩、丁香、乌梅、白头翁、使君子、土槿皮、蛇床子、地肤子。抑制絮状表皮癣菌作用较好的中药有川芎、玄参、青蒿、黄柏、生黄芩、丁香、乌梅、白头翁、使君子。对马拉色菌抑制作用较强的中药为厚朴、川芎、玄参、青蒿、黄柏、藿香、生黄芩、丁香、乌梅、白头翁、使君子。 综合分析上述结果后，选择如下,,味中药开展后续试验，包括:(,)清热解毒药，生黄芩、黄柏、白头翁;(,)活血化淤药，川芎、玄参;(,)杀虫药，青蒿、土槿皮、使君子; (,)理气药，厚朴、丁香;(,)芳香化湿药，霍香;(,)收敛药:乌梅。,(,中西药物最低抑菌浓度(,，,)测定 对上述所选的,,味中药,,,测定表明，(中药浓度为,,,(,,, ,,,,,)时，对,种病原真菌都有抑制作用的中药包括黄柏、使君子、乌梅、生黄芩、川芎、玄参、土槿皮。中药浓度为,,(,,,,,,,)时，对,种病原真菌都有抑制作用的中药有黄柏、使君子、乌梅、生黄芩、川芎、玄参。中药浓度为,(,,(,, ,,,,,)时，对,种病原真菌都有抑制作用的中药包括使君子、生黄芩、玄参。 所选,种西药均具有一定程度的抑菌作用，针对犬小孢子菌的抑菌效果:酮康唑,特比萘芬,冰醋酸;其,，,值分别为:酮康唑,(,,, ,,,,,、特比萘酚,(,, ,,,,,、冰醋酸,(,,,, ,,,。,(,中西结合组方抑真菌结果 试验结果表明，对,种不同病原真菌的抑菌作用中，各因素之间差异不显著。其中“中药组合”在组方里起到了相对关键的作用。根据数据统计分析，综合各种因素，表,中最佳复方组合为:,，,,,,，即理论组方(黄芩、玄参、川芎、土槿皮、厚朴)、中药总浓度为,,(,, ,,,,,)、加冰醋酸浓度为,(,, ,,,,,。这个组方对,种病原真菌均有,,,,的抑菌效果，命名为“复方抗癣剂”。,(,复方抗癣剂的安全性和刺激性 安全性试验表明，小鼠精神、食欲、活动与对照相比均未见异常变化，内脏器官未出现任何病理变化;表明该复方不具有毒性作用。复方抗癣剂未造成动物皮肤红斑、水肿等异常情况。刺激强度评价结果表明，该复方无皮肤刺激性。,(,复方抗癣剂的药效 受试犬用药前共,,个被毛样本，分离真菌,,株，占样本总量,,(,,;对照犬共,个被毛样本，分离真菌,株，检出率为,,,,;用药后再次从相同部位采集毛样分离培养真菌，受试犬,,个被毛样本仅分离出真菌,株，占样本总量,(,,，抑菌率为,,(,,;对照组抑菌率为,,,。,讨论 犬皮肤真菌病现已成为宠物临床常见病和多发病，且为人畜共患病，难痊愈、易复发。中兽医理论认为，犬皮肤真菌病的致病因素主要是湿、热、虫、毒。由于湿邪粘滞，病情缠绵，反复难愈。日久则伤津耗血，瘀阻脉络，致血不荣肤。中医治疗该病，主要选择杀虫止痒、清热燥湿剂，以外治为主，辅以内治。本试验所选,,味中草药，皆是文献记载有抑菌作用的药物，其中一些已多次在皮肤真菌病成方中出现。中药成分的复杂性也决定了它们药效的多样化，试验中将,,味中药按主要药性进行分类，针对临床分离的,株皮肤真菌，按照一定的体外抑真菌方法，筛选出,,味抑菌效果较明显的中药继续测定其,，,值，虽然不同中药对不同真菌的抑制作用有所不同，同一中药对不同真菌的抑制作用也有差异，但是在本实验室条件下，以筛选为目的，还是取得了较为理想的结果。 抗皮肤真菌西药的研究也相对比较成熟，各种化学药物的抑菌效果也得到证实旧,，但因其价格昂贵、毒副作用较大等而使用受限;如何合理使用西药抑真菌便成为了许多研究者关注的话题。本试验依据文献报道,训，选用酮康唑、特比萘芬和冰醋酸,种西药，比较其中西结合方的功效，结果证实，中西结合复方抑菌效果良好。组方试验中，充分肯定单味药试验 ,,结果的可靠性，依据试验结果设置了“理论组方”，“最佳单味组方”，同时以“门诊对照方”作为试验对照。采用设计,因素,水平正交试验筛选最佳组合。从结果来看，,个因素间差异并不显著，究其原因可能是本试验以数字分级来比较抑菌效果，方法上略显粗糙，增加了实验误差，降低了实验灵敏性，从而掩盖了考察因素的显著性。经数据统计分析得出，“中药组合”相比其它两个因素略显重要，这与单味药试验结果较为吻合。因此，组方筛选主要依据对,种病原真菌的抑制作用，结合直观分析得出最佳组合:即“理论组方”，中药总浓度为,, ,,,,,，配合,(,, ,,,,,的冰醋酸，命名为“复方抗癣剂”。 复方抗癣剂包含黄芩、玄参、川芎、土槿皮、厚朴等,味中药，其中黄芩具有广谱抗真菌和抗炎作用;玄参能够抗病毒微生物及其毒素;川芎有活血行气，抑真菌作用，土槿皮具有杀虫止痒、清热燥湿、止痛作用;厚朴有治肌肤坏死之功，驱虫之效。几昧药组合，既符合中医理论，又适合制成外用制剂。 中药是我国的传统优势资源。研究表明，具有较好抑真菌活性的中药多达,,,多种;中药价格低廉、效果确实。近几十年来，随着科技水平的不断提高，中药的开发和利用已受到更多的霞视和关注。在利用中药进行抗真菌作 用研究方面，也已取得了不少进展。中药用于真菌病的防治，不仪效果好、副作用少，也不易产生耐药性。本试验形成的复方抗癣剂组成成分中，根据文献记载均为无毒中草药，现代药理研究也表明该组成成分均无毒性作用，这些均为复方抗癣剂的安全性提供了保障。本试验中，完整皮肤组受试兔在药物处理后未表现刺激和毒性反应;而受损皮肤组，虽有轻微刺激表现，但在药物去除, ,后表现正常，且无毒性反应。这为宠物的临床药物研制和开发及抗皮肤真菌病药物的研发思路，提供了有益的参考。 犬细小病毒病的血液学检查与临床治疗试验 赵晓丹，汪杨力，马琪，王映红，廖继学，韩芸婷，王恒毅，芮荣， (南京农业大学动物医学院，江苏南京,, ,,,,) 摘要:本试验侧重对,,例犬细小病毒病门诊病犬进行血液学检查分析，包括红、白细胞计数，白细胞分类计数和血液生化指标测定;并对常规的临床疗法进行疗效比较。结果表明，患犬的红、白细胞平均数低于正常参考值，但不同动物个体的红、白细胞计数变化不一。,,例血样中,,例白细胞总数低于正常白细胞最低值，约占,,,;,,例白细胞计数值高于正常白细胞最高值，约占,,,。在白细胞分类计数上，病犬嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、杆状细胞和单核细胞所占比重增加，中性分叶核细胞和淋巴细胞所占比重减少。患犬的生化指标大体正常，仅,,，、,，一、,,,，离子浓度略为偏高。本实验表明，采用高免血清，结合对症疗法可取得最好的犬细小病毒病治疗效果，治愈率为,,(,,;采用单抗结合对症治疗或单纯进行作者简介:赵晓丹(,,,,一)，女，河南汝阳人，,,,,级本科生。，通讯作者，,,,:,,,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,(,,,(;,。 ,,