采用HPLC法测定复方鲜竹沥液中对羟基苯甲酸乙酯的含量

采用HPLC法测定复方鲜竹沥液中对羟基苯甲酸乙酯的含量 金卓(江苏省无锡药品检验所，江苏 无锡 214028) 摘要:目的:建立复方鲜竹沥液中对羟基苯甲酸乙酯的含量测定方法。方法:以Lichrospher C18柱(4.6 ×250mm，5µm)为色谱柱;以A:0.025mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH3.7)- B:甲醇为梯度洗脱;检 -1-1测波长: 258nm;流速:1.0mL?min;柱温:35?。结果:对羟基苯甲酸乙酯在0.6915,55.32μg.ml 范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均回收率为96.31%，RSD为1.17%(n=6)。结论:本方法简便可 行，重现性好，可用于复方鲜竹沥液中对羟基苯甲酸乙酯的含量测定。 关键词:HPLC;复方鲜竹沥液;对羟基苯甲酸乙酯;含量测定 HPLC method is used to simultaneously determine fresh bamboo liquid compound in the content of five kinds of taste masking agent or preservatives (Wuxi Institute for Drug control Jiangsu Province, Wuxi，214028) Abstract:objective: Establish a compound in fresh bamboo liquid p-hydroxy benzoic acid ethyl ester content determination method. Methods:To Lichrospher C18 column (4.6 x 250 mm， including 5 m) for the chromatographic column;In A:0.025 mol/L sodium dihydrogen phosphate solution (adjustable pH3.7 phosphate) –B: methanol as the – 1gradient elution;Detection wavelength: 258 nm;Flow rate: 1.0 mL, min ;Column temperature 35 ?.Results:P-hydroxy benzoic acid ethyl ester had a good linear and -1linear correlation in the range of 0.6915 ~ 55.32μg.ml (r = 0.9999)，the average recovery was 96.31%， RSD was 1.17% (n = 6). Conclusion:This method is simple and feasible, and reproducible, and Can be used to compound in fresh bamboo liquid content determination of hydroxyl benzoic acid ethyl ester. Keywords:HPLC;Fresh bamboo liquid compound;P-hydroxy benzoic acid ethyl ester;Content determination 复方鲜竹沥液是由鲜竹沥、鱼腥草、生半夏、生姜、枇杷叶、桔梗、薄荷素油等7味药 组成，其中鲜竹沥具有清热化痰的功效。用于肺热咳嗽痰多,气喘胸闷,中风舌强，痰涎壅盛， 小儿痰热惊风。由于口服液制剂方面的诸多原因及病人开瓶服药可能造成的污染等，都有易 长霉、发酵的缺点，加入防腐剂可以防止药品变质，延长有效期，已被公认为保障中药液体 制剂质量的有效措施。但是近年来大量的临床观察和实验资料 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明这些防腐剂本身存在一定 的刺激性、毒性，为此防腐剂的选择及其用量需严格控制，开展复方鲜竹沥液中防腐剂的探 索性研究具有非常重要的意义。本文通过研究建立了采用高效液相色谱法测定对羟基苯甲酸 乙酯这一防腐剂的含量，更好的控制复方鲜竹沥液中对羟基苯甲酸乙酯的质量。 1仪器、试药与样品 Agilent 1200高效液相色谱仪系统，Mettler XS-205电子天平 对羟基苯甲酸乙酯(批号90806)为Labor Dr.Ehrenstorfer提供。 甲醇为色谱纯，磷酸二氢钠、磷酸为分析纯，水为纯化水。 复方鲜竹沥液 江西某厂家(批号111102、120115) 2方法与结果 2.1色谱条件: 色谱柱:Lichrospher C18(4.6×250mm,5μm);流动相:以A:0.025mol/L磷酸二氢钠溶 -1液(磷酸调pH3.7)-B:甲醇为梯度洗脱(见表1);检测波长:258nm;流速:1.0mL?min;柱温:35?;进样量:10μl。 表1 流动相梯度洗脱表 t(min) A(,) B(,) 0 70 30 5 70 30 15 30 75 20 15 85 22 70 30 25 70 30 在上述色谱条件下，复方鲜竹沥液自身成分对这对羟基苯甲酸乙酯的检测无干扰，阴性样品、对照品溶液色谱图和供试品溶液色谱图详见图1-3。 图1 阴性样品溶液色谱图 图2 对照品溶液色谱图 图3 供试品溶液色谱图 2.2对照品溶液的制备: 精密称取对羟基苯甲酸乙酯加50%甲醇制成1mg/ml的溶液，作为防腐剂的对照品母液。并用50%甲醇稀释成5.532μg/ml的溶液作为对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备: 精密吸取样品1ml，加50%甲醇稀释50倍，过滤，滤液作为供试品溶液。 2.4方法学研究 2.4.1线性关系考察 精密吸取对羟基苯甲酸乙酯对照品母液适量，然后逐级稀释至不同浓度的对照品溶液，作为线性溶液。进样10µl，记录对羟基苯甲酸乙酯的峰面积，以对照品的浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线。得对羟基苯甲酸乙酯回归方程为y = 50.626x-3.8788，r=0.9999，表明对羟基苯甲酸乙酯在0.6915,55.32μg/ml范围内呈良好的线性关系。 2.4.2最低检测限的测定 将对照品母液分别用50,甲醇进行多次等倍稀释，在上述色谱条件下进行测定，计算最低检测限，当信噪比为3.2时，检测限为0.0183μg/ml。 2.4.3精密度试验 精密吸取对照品线性溶液(对羟基苯甲酸乙酯5.532μg/ml)，在上述色谱条件下连续进样6次，记录峰面积，RSD为0.28%，结果表明仪器精密度良好，详见下表2。 表2 精密度试验-对羟基苯甲酸乙酯 对羟基苯甲酸乙酯进样次数 峰面积均值 RSD(%) 峰面积 1 280.57 2 281.28 3 280.57 280.73 0.28% 4 280.25 5 279.78 6 281.92 2.4.4重复性试验 取同一批号样品1ml(江西某厂家C，批号:111102)，共6份，用50%甲醇稀释50倍后，在上述色谱条件下进行测定，结果对羟基苯甲酸乙酯平均含量为0.233mg/ml，RSD为0.92%，表明实验重复性较好。 2.4.5稳定性试验 取重复性项下的供试品，在上述色谱条件下分别在0、2、4、6、8、12小时进行测定，结果对羟基苯甲酸乙酯的平均含量0.231mg/ml，RSD为1.03%，表明样品在12h内稳定。 2.4.6加样回收率试验 精密吸取已知含量的同一样品0.5ml，(江西某厂家C，批号:111102)共6份，分别加入对羟基苯甲酸乙酯对照品1.389mg，用50%甲醇稀释50倍后，按上述色谱条件进行测定，计算加样回收率，平均回收率为96.31%，RSD为1.17%，(n=6)。结果见表3。 表3 加样回收率试验(n=6) RSD 取样量样品含量加入量测得量 回收率 平均回收率(%(ml) (mg) (mg) (mg) (%) (%) ) 0.5 0.116 0.104 0.215 95.19 96.15 0.5 0.116 0.104 0.216 0.5 0.116 0.104 0.218 98.08 96.31 1.17 0.5 0.116 0.104 0.217 97.12 0.5 0.116 0.104 0.216 96.15 0.5 0.116 0.104 0.215 95.19 2.6样品测定 将本品按2.1的条件进行含量测定，结果分别为0.233 mg/ml 、0.263 mg/ml(n=3)。 3 讨论 3.1 本文在对复方鲜竹沥液对羟基苯甲酸乙酯含量测定过程中，对其余的防腐剂或矫味剂也进行了研究，共选择了7个厂家共13批样品进行了研究，色谱条件为检测波长:糖精205nm，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯258nm，其余条件同对羟基苯甲酸乙酯，结果这均未检测出糖精、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，对于建立复方鲜竹沥液同时测定这5种防腐剂或矫味剂的含量提供了参考。对照品图谱见图4。 图4 对照品图谱 3.2口服液体制剂，在生产和患者使用过程中均易被微生物所污染，容易出现长霉现象，近年来，应用防腐剂已成了解决口服液体制剂染菌的重要手段之一。适用于制剂生产中的防腐剂种类很多，不过，使用防腐剂来保证制剂的质量不是绝对的手段和措施。关键还是要把预防污染工作做在制剂生产的每一个环节。目前使用的防腐剂大多是人工合成的，超标准使用会对人体造成一定损害，有些企业在包装上并未注明含防腐剂，而实际检出了防腐剂，这侵犯了消费者的知情权，建议企业在以后的生产中要明确其添加的防腐剂的品名和数量，并逐步完善复方鲜竹沥中标准，对防腐剂进行质量标准上的控制。《中国药典》(2010年版)一部附录合剂项下有明确规定，山梨酸和苯甲酸的限量不得大于0.3%， 对羟基苯甲酸酯类的用量不得大于0.05%。有关防腐剂的检查，有报道只对口服液类中苯甲酸进行了含量测定，不足以全面控制防腐剂的使用，本文建立了复方鲜竹沥液中对羟基苯甲酸乙酯含量测定，能有效的控制产品质量，建议有关部门对口服液类药品防腐剂使用方面作出明确规定，为保证人民用药安全提供有效的法定依据。 参考文献: 1、孙蒙、毕开顺等.HPLC测定11种中药口服液中6种防腐剂的含量.中国实验方剂学杂志，2012，18(3):76-79 2、罗晶，施法等.HPLC法同时测定抗病毒口服液中4种防腐剂.西北药学杂志， 3、刘建平.口服液体制剂中常用防腐剂的选择和使用.中国医院药学杂志，1987 江文明，金薇等.HPLC法测定盐酸氨溴索口服液体制剂中的防腐剂含量.药物分析杂志，2012，32(10):1838-1841 4、吴春敏，朱精英等.HPLC法快速检测苦参注射液中8种抑菌剂及苯甲醛.药物分析杂志，2012，32(3):451 5、常兆生、于静波.恰当使用防腐剂 确保口服液质量.中成药，1990 6、Chp《中国药典》.2010.Vol II(二部) 7、凌关庭. 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