非甾体类抗炎药阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的影响

非甾体类抗炎药阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的影响 非甾体类抗炎药阿司匹林和消炎痛对白假 丝酵母菌菌丝形成的影响 第35卷第3期第298页 2006年6月 华中科技大学(医学版) ActaMedUnivSeiTechno|Huazhong VoI.35NO.3P.298 june2006 非甾体类抗炎药阿司匹林和消炎痛对 白假丝酵母菌菌丝形成的影响 周婷婷肖敦振?赵丁源高俊姚念 华中科技大学同济医学院计划生育研究所,武汉430030 摘要目的探讨阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的抑制效应.方法选择以1O小牛血清一RPMI 1640培养液和微缺氧环境作为诱导菌丝生成的两个条件,检测0.5,l_0,2.0mmol/L 的消炎痛和阿司匹林对3株白假 丝酵母菌芽管和菌丝生成的影响.结果0.5,l_0,2.0mmol/L消炎痛和阿司匹林的芽管生成率分别是(82.58_-4- 4.30),(29.25?4.97),(5.O8?1.83)和(83.25?2.09),(76.67?l_44),(74.67_-4-l_97);0.5mmol/L的 消炎痛已有显着的菌丝抑制作用,1.0,2.0mmol/L的消炎痛几乎可以完全抑制菌丝的生长;0.5,l_0,2.0mmol/L的阿 司匹林对菌丝生长无抑制作用.结论消炎痛能抑制白假丝酵母菌菌丝和芽管的生成,极有可能成为一种很有前途的 治疗外阴阴道炎症的药物. 关键词白假丝酵母菌;消炎痛;阿司匹林;菌丝 中图法分类号R379.4 EffectofNSAIDAspirinandIndomethacinontheFilamentousGrowthofCandidaalbicans ZhouTingting,XiaoDunzhen?,ZhaoDingyuanetal InstituteofFamilyPlanning,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030 AbstractObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectofaspirinandindomethacinonthefilamentousgrowthofCandida nlbifns.MethodsTheRPMI一 1640supplementedwith10calfserumandanoxicenvironmentwerechosenasthetwokinds ofconditionsofinducingthefilamentousgrowth,andtheeffectsofindomethacinandaspirinatconcentrationsof0.5,1.0and 2.0mmol/LonthefilamentousgrowthofCandidaalbicansweretested.ResultsThegerminationpercentageofCandidaal— bifnstreatedwithindomethacinandaspirinwith0.5,l_0and2.0mmol/Lwere(82.58? 4.30),(29.25?4.97),(5. O8?l_83)and(83.25?2.09),(76.67?l_44),(74.67? 1.97)respectively.0.5mmol/Lindomethacinhad strikingeffectonthefilamentousgrowthofCandidaalbicans,whilel_0and2.0mmol/Lindomethacinalmostcouldfullyin— hibitthefilamentousgrowthofCandidaalbicans:0.5,l_0and2.0mmol/Laspirinhadnosuppressiononthefilamentous growthofCandidaalbicans.ConclusionIndomethacincansuppressthefilamentousgrowthandgerminationofCandidaalbi— cans,anditmaybeapromisingdrugoftreatingvulvovaginalcandidiasis. KeywordsCandidaalbicans;indomethacin;aspirin;hypha 白假丝酵母菌是一种寄居在正常人体黏膜表面 的条件致病菌,近年来研究证实,白假丝酵母菌的 形态转换过程与它的致病性有关[1],菌丝的形成有 助于它逃脱人体免疫系统的攻击,菌丝形态的白假 丝酵母菌对宿主有更强的黏附和侵人能力,致病能 力更强].白假丝酵母菌的形态发育过程受多个信 号通路的调控,其中,血清因子-cAMP—EGF的信号 通路和微缺氧条件下的CZF信号通路与其对人体 黏膜感染有关.寻求阻断白假丝酵母菌菌丝形成的 药物将是今后治疗念珠菌感染的一个方向.已有文 献报道,在营养限制性弱诱导菌丝形成培养条件下, 周婷婷.女,l977年生,硕士研究生 ?通讯作者,CorTespondingauthor 用非甾体抗炎药(nonsteroidalanti—inflammatory drugs,NSAIDs)阿司匹林可抑制芽管生成].但在 不同的诱导条件下,阿司匹林是否也具有阻断菌丝 形成的效应,以及同类的NSAIDs有无效应差异尚 需证实.本研究在以109/6小牛血清一RPMI1640培 养液组成的强诱导菌丝形成的培养条件下和在微缺 氧的环境中,观察消炎痛和阿司匹林对白假丝酵母 菌形态发育变化的影响,以探讨NSAIDs对菌丝形 成通路的作用及其临床意义. 1材料和方法 1.1菌株 ATCC10231白假丝酵母菌标准株,由湖北省 疾病控制中心微生物实验室赠送,CA50,CA216为 周婷婷等.非甾体类抗炎药阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的影 响?299? 临床分离纯化鉴定的白假丝酵母菌株. 1.2药品和试剂 消炎痛,阿司匹林购于Sigma公司;YPD培养 液;SDA固体培养基;玉米吐温8O琼脂培养液;RP— MI1640,小牛血清购于中美合资兰州民海生物工 程有限公司. 1.3实验方法 1.3.1芽管及菌丝抑制实验取冷冻真空干燥保 存的白假丝酵母菌ATCC1O231,CA5O,CA216转 种于SDA固体培养基上,再从SDA固体培养基上 挑取单个菌落接种于YPD培养液上,25?恒温无 振动培养48h,获得同步生长的白假丝酵母菌孢 子.调整菌悬液浓度为5×10个/ml.取1Ol菌 悬液加入容量1ml,pH为7.0的含有消炎痛和阿 司匹林的1O小牛血清RPMI1640培养液中.消 炎痛和阿司匹林的浓度分别为0.5,1.0,2.0retool/ L.每组各设4个平行管.使白假丝酵母菌孢子的 终末浓度为5×1O个/ml,调整培养液的pH值为 7.0.37?恒温培养2.5h,显微镜下观察白假丝酵 母菌的芽管生成情况,4h显微镜下观察其菌丝形 成情况. 1.3.2微缺氧厚壁孢子实验将含有浓度为0.5, 1.0,2.0mmol/L消炎痛和阿司匹林的玉米吐温8O 琼脂溶化后,取1滴滴在盖玻片上,待凝.用接种针 蘸取少许待检菌,从紧贴盖玻片处穿刺到培养液中, 用镊子将盖玻片翻转,有培养液的一面贴在载玻片 上,载玻片编号后放入湿盒置25?温箱孵育48h, 显微镜下观察厚壁孢子生成情况. 1.4数据 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 计算芽管生成率,以SPSS12.0软件进行统计 分析,组间比较采用t检验. 2结果 2.1阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌芽管及西丝形成的 影响 37?恒温培养2.5h,分别取各菌株各浓度的 阿司匹林和消炎痛在400倍显微镜下计数200个孢 子,计算白假丝酵母菌的出芽率.非甾体类抗炎药 阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌芽管生成率的影 响见表1.结果发现,浓度为0.5mmol/L的消炎痛 和阿司匹林对芽管生成的影响没有显着性差异(P >O.05),1.0,2.0mmol/L的消炎痛和阿司匹林对 白假丝酵母菌芽管生长的作用差异有显着性意义 (均P<O.05).阿司匹林和消炎痛对3株菌株的作 用差异无显着性意义(P>0.05). 表1不同浓度阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌 芽管生成率的影响(,?5) 与消炎痛组比较P<O.05 37?恒温培养4h,显微镜下观察其菌丝形成 情况,发现0.5,1.0,2.0mmol/L阿司匹林组白假 丝酵母菌菌丝生长情况与对照组菌丝生长情况没有 差别,在400倍显微镜下观察,都能形成长长交织成 团的菌丝,未见单个孢子存在.0.5mmol/L消炎 痛组白假丝酵母菌菌丝的生长即受到显着的抑制, 不能形成长长的菌丝.1.0mmol/L消炎痛组不能 形成菌丝,只能形成稀少短棒状的芽管,2.0retool/ L消炎痛组在400倍显微镜下只可见散在孢子.不 同浓度消炎痛对菌丝形成的影响见图1. 一一 一一A:空白对照组,茵丝呈大的团块状,无散在孢子存 在;B:消炎痛浓度为0.5mmol/L时,可见大量茵丝 形成,大多呈团块状,散在孢子少;C:消炎痛浓度为 1.0retool/L时,茵丝生成明显减少,偶见呈小团状茵 丝,可见大量散在孢子;D:消炎痛浓度为2.0mmol/L 时,高倍镜下几乎不见茵丝,有大量散在孢子存在. 图l不同浓度消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的 影响 2.2微缺氧条件下阿司匹林和消炎痛对白假丝酵母菌菌丝 形成的作用 含有消炎痛的玉米吐温8O琼脂上生长的白假 丝酵母菌厚壁孢子的菌丝生长受到抑制,且随着消 炎痛浓度的增加,抑制效果越明显,在2.0mmol/L 的浓度时几乎无菌丝生长,镜下只见大量散在孢子. 而含有阿司匹林的玉米吐温8O琼脂上生长的白假 ? 300?华中科技大学(医学版)2006年6月第35卷第3期 丝酵母菌的菌丝交织成网状团块,无散在孢子存在, 与对照组几乎没有差异,同等条件同浓度的阿司匹 林组与消炎痛组比较对菌丝形成的影响相差很大. 见图2. 一一 一一A:空白对照,沿划线可见自中心向四周扩展的呈簇 状的长茵丝,并伴有顶端厚壁孢子的形成,单个孢子 少;B:0.5mmol/L消炎痛培养液上仍有呈簇的茵丝, 厚壁孢子减少;C:1.0mmol/L消炎痛培养液上偶见 少量菌丝和厚壁孢子;D:消炎痛浓度为2.0mmol/L 时,镜下几乎见不到菌丝和厚壁孢子,只见大量散在 孢子. 图2不同浓度消炎痛在微缺氧条件下对白假丝酵 3讨论 母菌菌丝形成的作用 在营养限制性DMEM培养液条件下,可诱导 白假丝酵母菌的芽管形成,加入阿司匹林后可有效 抑制其芽管形成,Deva等认为阿司匹林的作用在 于阻断了白假丝酵母菌的加氧脂(Oxylipins)生物 合成,从而抑制了菌丝的形成.然而本实验研究结 果表明,在强力的血清诱导环境下,阿司匹林阻断芽 管和菌丝形成作用并不明显.在厚壁孢子试验的微 缺氧条件下,阿司匹林亦无明显的抑制菌丝生成作 用.而在同样的两种诱导环境下,消炎痛却有很强 的抑制菌丝形成的作用.且3株白假丝酵母菌芽管 生成率的数据表明,同种药物对3株菌株芽管生成 的抑制作用差异没有显着性意义(P>0.05).由此 可见,在不同的诱导条件下同种药物出现不同的生 物效应.相同的诱导条件下同类NSAIDs抑制菌 丝形成的效应不同.NSAIDs对白假丝酵母菌菌丝 形成影响的作用机制还有待探讨. 在真菌感染过程中,宿主细胞和病原体都能产 生前列腺素,引起前列腺素产量增加],前列腺素E2 (PGE)可以通过增加cAMP的含量而促进白假丝 酵母菌菌丝形成].在诱导菌丝形成的血清中加入 抗PGE的抗体或抗血栓生成素抗体,分别可抑制 30的芽管形成],可见前列腺素产物确与菌丝形 成有关.在血清诱导环境下,当加入消炎痛时,血清 中前列腺素产物作为信号分子已经存在,通过信号 转导,级联激活cAMP—EFG.通路,应可诱导菌丝形 成.然而加入消炎痛却抑制了菌丝的形成.这说明 环氧化酶抑制剂消炎痛对白假丝酵母菌菌丝形成的 抑制作用并不只在抑制前列腺素产物合成的环节. 此外,微缺氧诱导环境下,消炎痛亦能抑制菌丝的形 成.可见消炎痛抑制菌丝作用位点在EFG.和 CZF.下游的基因表达. 白假丝酵母菌在血清和微缺氧诱导条件下,通 过激活EFG通路和CZF.通路形成菌丝是应对宿 主环境变化增加侵袭能力的一种生长繁殖方式.而 妇女月经经血和阴道内菌群失调,厌氧菌增殖又易 形成激活这两条通路的环境.本实验结果证实,消 炎痛在这两种诱导环境下都显示出有效的抑制菌丝 形成的作用.表明消炎痛可能具有治疗外阴阴道炎 的作用.此外,白假丝酵母菌可刺激宿主细胞产生 PGE,PGE除能诱导白假丝酵母菌菌丝形成外,还 抑制宿主的局部免疫反应l5],有利于白假丝酵母菌 对阴道黏膜的侵袭.因而选用消炎痛治疗外阴阴道 炎具有双重作用:?抑制白假丝酵母菌菌丝形成,降 低致病性;?抑制宿主细胞的PGE生成,提高局部 免疫力增强其抗病能力. 参考文献 [1]I0HJ,KoHLERJR,DIDOMENICOB,eta1.Nonfila— mentousC.albicansmutantsareavirulent[J_.Cell,1997, 9O(5):939—949. r2]oDDSFC,WEBSTERCE,MAYURANATHANP,eta1. Candidac0ncentrati0nsinthevaginaandtheirassociationwith signsandsymptomsofvaginalcandidosisl-J].JMedVetMy— c0l,1988,26(5):277-283. r3]DEVAR,CICC0LIR,K0CKL,eta1.Involvementofaspi fin-sensitiveoxylipinsinvulvovaginalcandidiasisl-J].FEMS MicrobiolLett,2001,198(1):37-43. r4]NOVERRMC,PHARESM,TOEWSGB,eta1.Pathogen— iCyeastscryptococcusneoformansandCandidaalbicanspro— duceimmunomodulatoryprostaglandins[J].InfectImmun, 2001,69(5):2957-2963. [5]KAL0一KLEINA,wITKINsS.ProstaglandinEzenhances andgammainterferoninhibitsgermtubeformationinCandida albicans[j].InfectImmun,1990,58(1):260—262. r6]NOVERRMC,HUFFNAGLEGB.RegulationofCandida albicansm0rph0rgenesisbyfattyacidmetabolites[J].Infect Immun,2004,72(11):6206—6210. (2005—03—28收稿)