宫颈病变中人类染色体端粒酶基因与高危型人乳头瘤病毒感染相关性研究

宫颈病变中人类染色体端粒酶基因与高危型人乳头瘤病毒感染相关性研究 宫颈病变中人类染色体端粒酶基因与高危 型人乳头瘤病毒感染相关性研究 《:黢 宙 ? 3347? ? 论着? 颈病变中人类染色体端粒酶基因与高危型人乳头瘤病毒 感染相关性研究 贺昕红 【摘要】目的应用荧光原位杂交技术(FISH)探讨宫颈病变中人类染色体端粒酶(hTERC)基因的异常扩增 情况及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染在宫颈病变中的关系.方法对H5例宫颈疾病患者,以病理检查为"金标 准",根据宫颈活检病理诊断结果将其分为4组:对照组(包括宫颈组织正常及宫颈炎症),宫颈上皮内瘤样变(CIN) I组,CINlI,?组和宫颈浸润癌组,对患者宫颈分泌物分别进行HPV杂交捕获?代(HPV—HC2)检测,FISH检 测.结果(1)hTERC基因在对照组,CINI组,CIN?一?组和宫颈浸润癌中组的扩增率分别为21.1%,86.7%, 93.8%和100.0%.宫颈浸润癌组,CINI组和CIN11一?组hTERC基因扩增率与对照组比较,差异均有统计学意义 (P<0.05).(2)83例HPV阳性患者中,hTERC基因扩增率为91.6%(76/83),32例HPV阴性患者中,hTERC基因 扩增率为43.7%(14/32),差异有统计学意义(P<0.05).(3)hTERC基因扩增与HPV阳性率的相关系数为0.520, 两种检测方法有很好的一致性,hTERC基因检测总体评价高于HPV—HC2的检测. 结论hTERC基因的扩增与宫颈病 变程度及HPV感染呈正相关,其扩增提示CIN有恶性进展潜能,其扩增情况可作 为CIN病情进展的预测指标. 【关键词】宫颈上皮内瘤样变;人类染色体端粒酶;原位杂交,荧光;人乳头瘤病毒 【中图分类号】R7l1.74【文献标识码】A【文章编号11007—9572(2011)10—3347 —02 RelationshipbetweenhTERCGeneandHPVInfectioninCervicalDiseasesHEXin— hong.DepartmentofObstetricsand Gynecology,AffiliatedBeringFriendshipHospitalofCapitalMedicalUniversity,Be~iing100050,China 【Abstract】 ObjectiveToexploretheabnormalamplificationofhTERCgeneincervicaldiseasesbyforescenceinsitu hybridization(FISH)andtherelationshipbetweenhTERCgeneandHPVinfection.MethodsAtotalof115patientswithcer- vicaldiseasesweredividedintofourgroups(normalgroup,CINIgroup,CINII— Illgroupandcervicalcancergroup)accord— ingtoresultsfrompathologicalexaminations.FISHandHPV— HC2testswerecarriedoutoncervicalexcretions.ResultsPosi- tiveamplificationrateofhTERCwas21.1%inthenormalgroup,86.7%intheCINIgroup,93.8%intheCINI1—11Igroup and100.O%inthecervicalcancergroup.withstatisticallysignificantdifferencesbetweenthenormalgroupandeitheroftheoth? erthreegroups(P<0.05).AmplificationrateofhTERCgenewas91.6%(76/83)inthe83caseswithHPVinfectionandwas 43.7%(14/32)inthe32caseswithoutHPVinfectionwithsignificantdifferences(P<0.05).Thecorrelationcoefficientbe— tweenabnormalityofhTERCgeneandHPVinfectionwas0.520withFISHbetterthanHPV —HC2.ConclusionAmplification ofhTERCgene,degreesofcervicallesionsandHPVinfectionarepositivelycorrelated.High expressionlevelsofhTERCgene indicatethedevelopmentofthedisease.TheabnormalityofhTERCgeneincervicaldiseases detectedbyFISHcouldserveaspre— dietorforeervicalcancer. 【Keywords】 Cervicalintraepithelialneoplasia;HumantelomeraseRNAcomponent;Insituhybridizatio n,fluores— cence;Humanpapillomavirus 宫颈病变是妇女常见病,目前认为人乳头瘤病毒(HPV) 感染,基因和微环境方面的因素在宫颈病变的发生,发展中起 重要作用.HPV感染尤其是高危型HPV感染是宫颈癌的首要 病因,目前临床上HPV检测敏感性为84%一1o0%,特异性为 64%,95%.本研究采用荧光原位杂交技术(FISH)探讨人 类染色体端粒酶(hTERC)基因与高危型HPV感染的相关性. 科 作者单位:100050北京市,首都医科大学附属北京友谊医院妇产 1资料与方法 1.1研究对象选取2009年1月—2010年1月在北京友谊医 院妇科门诊就诊的患者共115例,年龄23—77岁,依据宫颈 活检病理诊断结果将其分为4组:对照组(包括宫颈组织正 常及宫颈炎症),宫颈上皮内瘤样变(CIN)I组,CINII,? 组和宫颈浸润癌组. 1.2研究方法对患者宫颈分泌物分别进行FISH检测,HPV 杂交捕获?代(HPV—HC2)检泓j. 1.2.1FISH用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补 的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可 被检测的杂交双链核酸.检测hTERC基因,被检测者hTERC 基因的检测值超过阈值(6.37?2.27)%为阳性.试剂药盒为 北京金菩嘉医疗科技有限公司生产. 1.2.2HPV—HC2标本经过裂解,杂交,捕获,结果判读 等 步骤 新产品开发流程的步骤课题研究的五个步骤成本核算步骤微型课题研究步骤数控铣床操作步骤 ,检测13种高危型HPV.结果判定:含量>1ps/ml即 RLU/CO值>1为阳性.试剂药盒为美国Digene公司生产. 1.3统计学方法采用SPSS13.0软件进行统计学 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 .两 组间率的比较用x检验,以P<0.05为差异有统计学意义. 对两种检测方法的评价用一致性检验. 2结果 2.1hTERC基因的扩增情况随着宫颈病变的进展,hTERC 基因扩增率逐渐增高,4组hTERC基因扩增率比较,差异有 统计学意义(X=44.665,P=0.000);4组HPV—HC2阳性 率比较,差异有统计学意义(X=30.313,P=0.000).其 中,CINI组,CIN?一?组和宫颈浸润癌组hTERC基因扩增 率和HPV—HC2阳性率与对照组比较,差异均有统计学意义 (值分别为30.103,28.352,9.079和22.289,22.518, 4.542,P<0.05);除对照组外,其余3组两两比较,差异均 无统计学意义(P>0.05,见表1). 2.2hTERC基因检测与HPV—HC2检测的比较83例HPV 阳性患者中,hTERC基因扩增率为91.6%(76/83),32例 HPV阴性患者中,hTERC基因扩增率为43.7%(14/32),差 异有统计学意义(P<O.05).hTERC基因扩增与HPV阳性率 的相关系数为0.520,kappa=0.513,两种检测方法有很好的 一 致性,hTERC基因检测总体评价高于HPV—HC2的检测 (见表2). 表1hTERC基因和HPV—HC2在宫颈脱落细胞中阳性率比较[n (%)] TabletComparisonofexpressionincervixcellsbetweenhTERCandHPV — HC2 表2hTERC基因检测与HPV—HC2检测对宫颈病变诊断价值的比较 Table2ComparisonofdetectionsbetweenFishandHPV—HC2 3讨论 官颈病变是妇女常见病,目前认为HPV感染是首要病 因"...宫颈癌患者中90%以上可检测出HPV感染,而HPV 阳性的宫颈病变患者中有一部分并不发展成为宫颈癌,这其 中,基因和微环境方面的因素在宫颈病变的发生和进展中起着 重要的作用. 国外研究表明,宫颈细胞由非典型性改变向宫颈癌转变的 过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增.J.其中,涉及的最 重要的基因可能是hTERC基因.该基因的扩增可阻断细胞凋 亡,导致肿瘤产生.端粒酶的激活使细胞具有无限增生的能 力,是恶性肿瘤的主要特征之一.有研究报道90%的恶性肿 瘤及永生化细胞中可检测到hTERC基因的活性.本研究 中宫颈浸润癌患者的hTERC基因扩增率为100.0%.吕雯 等…发现从正常宫颈,宫颈炎,CIN到宫颈癌,HPV和端粒 酶的协同表达及表达强度依次增加,与本研究的结果一致.本 研究显示随着宫颈病变的进展,hTERC基因扩增率逐渐增高, hTERC基因在CINI组,CINlI,11I组和宫颈浸润癌组的表达 明显高于对照组,表明TERC基因的扩增可能促进了肿瘤的发 展,与病变程度呈正相关.另外,本研究显示CINI组与CIN ?一?组,CINII—m组与宫颈浸润癌组两两比较,hTERC基 因扩增率没有显着差别,与国内外学者的研究结果不符,可能 是试验样本量不够,需要扩大样本进一步研究. 魏力等研究表明,HPV在癌前病变早期有较多感染, 而端粒酶则在癌前病变中晚期激活,说明癌变发生初期,高危 型HPV感染尚未伴端粒酶激活,随细胞恶性程度加重,两者 渐趋一致.二者在癌变过程中的时序性为:HPV感染是启动 因子,导致端粒酶的重新激活,使细胞获得无限增殖能力,但 端粒酶激活是否是HPV的直接作用还有待进一步探讨. 目前对宫颈癌的筛查多采用"三阶梯"诊断程序:宫颈 细胞学检查,电子阴道镜检查和宫颈活检组织病理学检查.现 在临床上普遍应用HPV检测来协助预测宫颈病变的程度, HPV检测技术明显提高了CIN及宫颈癌的检出率,但是特异 性仅为44%一95%";电子阴道镜检查只能提供可疑病变部 位,而不能作为确定病变性质的诊断手段,因此通常需结合宫 颈活检组织病理学检查来确诊.组织病理学检查是诊断宫颈病 变的"金 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ",但宫颈活检技术是一种有创性的检查方法, 易导致出血,感染并且给患者带来一定的身体痛苦及心理创 伤,许多患者不愿接受.因此,从CIN早期,准确诊断的角 度出发,迫切需要其他指标或手段来协助以上检查,使筛查更 为准确,可靠,无创及更有预见性. hTERC基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低 度癌前发育异常,鉴别诊断的敏感性及特异性均在90%以上; 同时,这一扩增也能预测出52%,96%的癌前病变有恶变的 可能,而检测这,基因扩增的标准方法即为FISH.FISH是一 种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色 体上显示DNA序列位置的方法.目前,国内对FISH还在研究 阶段,对hTI~RC基因的研究文献报道较少.本研究显示应用 FISH检测hTERC基因的灵敏度,与诊断"金标准"的总符合 (下转3351页) 目前乙型肝炎疫苗和乙肝免疫球蛋白联合免疫对婴幼儿预 防乙型肝炎的临床效果已得到充分肯定,而宫内感染乙肝病毒 是导致出生后免疫接种失败的主要原因.朱启镕等随访16 例单纯乙型肝炎疫苗免疫的乙肝病毒宫内感染的新生儿,1年 后其HBsAg阳性率100%,而吴岷岷等对18例发生宫内感 染的婴幼儿施行乙型肝炎疫苗及乙肝免疫球蛋白联合免疫,1 年后其HBsAg阳性率为55.5%,说明单纯乙型肝炎疫苗免疫 对已发生宫内感染的婴幼儿无效,而双重免疫对已发生宫内感 染的婴幼儿具有一定疗效.因此对已发生宫内感染的婴幼儿, 也应该实施被动及主动全程联合免疫. 母乳是婴儿最佳的天然食品,含有多种免疫物质,能增加 婴儿的免疫力,减少呼吸道感染.母乳喂养有利于促进婴幼儿 心理与社会适应性的发育,并有利于促进母亲产后恢复,减少 乳腺癌,卵巢癌发病率. 参考文献 1崔风梅,曹淑玲,肖红杰,等.慢性乙型肝炎患者家庭功能与健 康状态的关系研究[J].中国全科医学,2010,13(11):3579. 2中华医学会传染病与寄生虫病学会肝病分会.病毒性肝炎防治方 案[J].中华肝脏病杂志,2000,8(4):324—329. 3林静吟,许岸高,袁建寰,等.乙肝病毒母婴传播的可能途径研 ? 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(收稿13期:2011—06—09;修回日期:2011一O9—19) (本文编辑:陈素芳) (上接3348页) 率,约登指数均高于HPV—HC2的检测,漏诊率低于HPV— HC2的检测,特异度及误诊率与HPV—HC2的检测基本相同. 在宫颈疾病诊断中,FISH检测总体评价高于HPv—HC2的检 测,对于区分宫颈病变的癌变趋势非常有效.目前FISH检测 的不足之处是费用较高,需要较完备的实验室条件,在临床广 泛应用尚需时日. 综上所述,hTERC基因的扩增率,高危型HPV感染阳性 率与宫颈病变程度均呈正相关,二者之间的因果关系有待进一 步研究.应用FISH检测hTERC基因的总体评价高于HPV— HC2的检测,在宫颈病变的临床诊断上是一种有效的辅助检 测方法. 参考文献 1张东红,林美珊.人乳头瘤病毒在国人宫颈病变中感染及型别分 布特征的Meta分析[J].中国全科医学,2010,13(4):1287. 2DomingoEJ,DyEchoAV.Epidemiology,preventionandtreatmentof cervicalcancerinthePhilippines[J].JGynecolOncol,2009,20 (1):11一l6. 3李淑敏,章文华,吴令英,等.人乳头瘤病毒负荷量与子宫颈癌 及癌前病变关系的初步研究[J].中华妇产科杂志,2004,34 (6):400—402. 4赵方辉,李楠,马俊飞,等.山西襄垣妇女HPV感染与宫颈癌的 研究[J].中华流行病学杂志,2001,22(5):375—378. 5RosaMI,MedeirosLR,BozzettiMC,eta1.Accuracyoftelomerasein cervicallesions:asystematicreview[J].IntJGyneeolCancer, 2007,17(6):1205—1214. 6AlamedF,EspinetB,Co=oC,eta1.3q26(hTERC)gainstudied byfluorescenceinsituhybridization98apersistence—-progressionindiea— t0rinlow—gradesquamousintraepitheliallesioncases[J].Human Pathology,2009,40(10):1474—14783. 7FanYB,WuX,FuZM,eta1.Amplificationofthehumantelomerase geneinliquid—basedpreparationsisassociatedwithcervicaldysplasia andcarcinoma[J].IntJGynecolPathol,2010,29(2):157— 164. 8苏晶,韩英,丁岩.hTERC基因表达在宫颈病变中的临床意义 [J].中国妇产科临床杂志,2010,11(4):281—284. 9刘东涌,魏力.宫颈脱落细胞hTERC基因表达及其在宫颈病变诊 断中的应用[J].现代肿瘤医学,2010,18(11):2239—2241. 10HopmanAH,TheelenW,Hommelbe~PP,etaJ.Genomicintegra— tionofoncogenieHPVandgainofthehumantelomemsegeneTERCat 3q26arestronglyassociatedeventsintheprogressionofuterinecervical dys—plasiatoinvasivecancer[J].JournalofPathology,2006,210 (4):412—419. 11吕雯,周建维,隋丽华.子宫颈病变HPV感染与端粒酶活性相关 性研究[J].实用肿瘤杂志,2004,19(1):43—45. 12魏力,刘冬涌,蒋宏颉.荧光原位杂交法检测宫颈脱落细胞端粒 酶基因及其与人乳头瘤病毒感染的相关性[J].中国实用妇科与 产科杂志,2010,26(5):368—370. (收稿日期:2011—04—05;修回日期:2011—09—15) (本文编辑:赵跃翠)