[word格式] 骨瓜提取物注射液细菌内毒素检查方法探讨

[word格式] 骨瓜提取物注射液细菌内毒素检查方法探讨 骨瓜提取物注射液细菌内毒素检查方法探 讨 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2007Dec;11(12)?1091? 骨瓜提取物注射液细菌内毒素检查方法探讨 谢冬梅,邢蓉,陈小珍 (蚌埠医学院第一附属医院药剂科,安徽蚌埠233004) 摘要:目的对骨瓜提取物注射液进行鲎试剂检查法实验,以替代热原 检查,建立骨瓜提取物注射液细菌内毒素检查法.方法 参照《中国药典)2005版(二部)附录XIE实验方法,通过于扰实验来 确定骨瓜提取物注射液的有效稀释浓度和细菌内毒素 检查限值.结果骨瓜提取物注射液的4(】倍稀释溶液无干扰作用,其 内毒素限值符合规定.结论骨瓜提取物注射液可以通 过细菌内素检查法来控制细菌内毒素含量 关键词:骨瓜提取物注射液;细菌内毒素;鲎试剂 Establishmentofbacterialendotoxin testmethodoftheextractionofbone.meloninjection XIEDong.mei.XINGRong.CHENXiao.zhen (DepartmenofPharmacy,TheFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCo llege,Bengbu,AnhuiProvince,233004,China) Abstract_.AinlToestablishbacterialendotoxintestmethodoftheextractiono fbone—meloninjection.MethodThetestwascarriedoutac— cordingtotheguidelineofinterferingtestandproeudurespecifiedinChineseP harmacopeia2005.ResultTheinjechondidnotinterferewith limukusagentin40dilutedconcentration.ConclusionBacterialendotoxinte stcanbeusedfortheextractionofbone—meloninjection. Keywords:extractionofbone—meloninjection;bacterialendotoxin;limulusagent 骨瓜提取物注射液为复方制剂,其组份为:新鲜或冷冻的 猪四肢骨和甜瓜的干燥成熟种子,经分别提取后制成的灭菌 水溶液.它具调节骨代谢,刺激成骨细胞增殖,促进新骨形 成,以及调节钙,磷代谢,增加骨钙沉积,防止骨质疏松,具有 抗炎,镇痛作用.控制其细菌内毒素限量对于药品的安全至 关重要,我们参照2005版《中国药典》(二部)细菌内毒素检 查法实验基本原理和细菌内毒素检查干扰实验,建立其内毒 素检查方法,报道如下. 1仪器与试药 骨瓜提取物注射液(哈尔滨圣泰制药股份有限公司,规 格2ml:10mg批号070106,070114,070522).鲎试剂(TAL) (湛江安度斯生物有限公司,规格0.1mE/支,灵敏度入=0.25 Eu?ml,,批号0608152;福州新北生化工业有限公司,规格 0.1ml/支,入=0.25Eu?ml,,批号0512300).细菌内毒素 工作 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品(中国药品生物制品检定所,规格120Eu/支,批 号2005-3)细菌内毒素检查用水(BET水)(湛江安度斯生物 2.10回收率试验取已知含量样品6份,每份约0.75g, 分别精密加入浓度为0.5156g?L的盐酸麻黄碱对照品溶 液3ml,按2.4项下的方法制备,测得峰面积并计算含量,结 果显示平均回收率为99.9%,RSD:0.8%(a=6),见表1. 表1回收率试验结果 2.11样品测定按正文方法测定10批样品,含量分别为每粒 10.82,0.71,0.84,0.82,0.83,1.14,1.35,1.47,1.47,1.14mg. 3讨论 本文利用碱化后麻黄碱的挥发性,采用水蒸气蒸馏法提 取,并在收集瓶中和盐酸溶液反应生成水溶性的盐酸麻黄碱, 进行液相测定.因此加入碱液后,应马上进行水蒸气蒸馏,以 免生成的麻黄碱逃逸,造成测定误差.提取方法比较:曾采用 甲醇,水超声,和用20%,30%氢氧化钠溶液蒸馏的方法,经 试验,结果超声法杂质较多,盐酸麻黄碱峰不易分离,而以 20%氢氧化钠溶液130ml作为提取溶液,收集蒸馏液100ml 即可提取完全,故正式的提取方法采用20%氢氧化钠溶液 130ml为溶剂.胶囊内容物为药材提取的浸膏,蒸馏时易黏 结于蒸馏瓶底,蒸馏结束后仍有少量不溶,影响盐酸麻黄碱的 提取,故在加碱液前加乙醇5ml步骤,已避免内容物的黏结. 盐酸麻黄碱极性较大,本实验采用反相C柱,以乙腈一磷酸二 氢钾(磷酸调pH值3.0)(5:95)这样低有机相,高水相系统 进行分离,为使盐酸麻黄碱峰后的杂质峰较快出峰,从27min 起乙腈比例调到40%,保留25min,缩短了整个分析时间. 参考文献: [1]中国药典委员会.中国药典(一部)【s],北京:化学工业出版 社.2005:223. [2]林洁.高效液相色谱法同时测定滴鼻剂中盐酸麻黄素和氢化 可的松的含量[J].中国医院药学杂志,2002,22(8):4741. [3]朱春健.RP—HPLC法测定镇咳合剂中盐酸麻黄碱的含量[J].药 学与I临床研究,2007,11(2):161. [4]倪晓霓,杨燕飞.RP—HPLC法测定氨酚伪麻片中对乙酰氨基酚 和盐酸伪麻黄碱含量[J].江苏药学与临床研究,2006,14(6): 391. [5]陈英,黄雪梅,姜平川.反相高效液相色谱法测定复方白氟膜 剂中盐酸麻黄碱的含量[J].中国药房,2005,16(1):62. (收稿日期:2007—09—14) ? 1092?安徽医药 AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2007Dec;11(12) 有限公司,规格5ml/支,批号0703130).电热恒温水浴锅 (江苏省医疗器械厂,型号HH.214),旋涡混合器(上海医科 大学仪器厂,型号XW一80A),其它除无热原吸头外,均经 250’E干燥1h. 2方法与结果 2.1鲎试剂灵敏度复核…按2005版《中国药典》(二部) 细菌内毒素检查法进行,结果所用鲎试剂灵敏度均符合规定. 2.2供试品细菌内毒素限值(L)确定具体操作参照 2005版《中国药典》(二部)细菌内毒素检查法.每小时人体 可以接受的最大内毒素剂量5Eu?k9一?h’.×60=300Eu ? h(人平均体重按60kg计算),而骨瓜提取物注射液成人 每日最大剂量为20m1,即100mg溶于生理盐水滴注,而生理 盐水的内毒素限量为0.5Eu?ml’.,生理盐水注射液按每小 时200ml的输入速度计算,则生理盐水注射液带入的内毒素 最大量为100Eu.ml一,故骨瓜提取物注射液允许带入的内 毒素最大量为300—100=200Eu?h,因为骨瓜提取物注射 液每小时注入人体最大量为20ml,所以骨瓜提取物注射液内 毒素限量L为200Eu?h?20ml?h=10Eu?ml,. 2.3样品最大有效稀释倍数MVD…以鲎试剂灵敏度 为0,25Eu?ml为基准,且骨瓜提取物注射液的热原检查浓 度C为1g?L得MVD=CL/h=40,用BET水以样品20倍 稀释为起点往下倍比稀释即20,40,60,80倍,得样品系列浓 度溶液,记为供阴性对照(NPC)系列,将样品稀释成与上NPC 相同浓度系列,但在稀释过程中每一浓度的样品都含2的内 毒素,作为供试品阳性对照(PPC)系列.让灵敏度为0.25Eu ?ml’.的TAL分别NPC与PPC和两个系列的样品反应(37 ?1cc,60?2rain),同是用BET水制备阴性对照管(NC)和阳 性对照管(PC),结果见表1,样品存在干扰,为抑制于扰作 用,经40倍稀释后可消除干扰,所以选用4O倍稀释样品进行 干扰实验 表1供试品干扰预实验结果 2.4供试品干扰试验选择4O倍稀释即0.125g?L为样 品的实验浓度即内毒素限值2,0Eu?kg×0.125g?L,= 0.25Eu?ml用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2. Oh,1.Oh,0.5h,0.25h的内毒素系列溶液.用0.125g?L 的样品溶液将同一支细菌内毒素工作标准品稀释成2.0k,1. Oh,0.5,0,25h的供试品系列溶液.让灵敏度为0.25Eu? m1的两个不同批号的TAL与上述两个系列的内毒素溶液 反应.结果见表2,E在0,5h一2,Oh之间,E.在0.5Es一2.0 Es之间,说明样品在0.125g?L时,对细菌内毒素检查无 干扰作用.因此对本品用细菌内毒素法代替家兔法是可行. 表2骨瓜提取物注射液干扰实验结果 2.5供试品细菌内毒素检查试验取3批热原检查合格的 骨瓜提取物注射液按2005(中国药典》(二部)要求,考察其内 毒素限值,拟定骨瓜提取物注射液的内毒素限值为2.0Eu? 结果见表3.3批供试品的内毒素含量均小于2Eu? , ., 表3供试品细菌内毒素检查结果 3讨论 本文考虑到氯化钠注射液巾热原的加和性,故文中确定 的供试品的细菌内毒素限值安全,可靠.通过初筛实验确定 供试品的有效稀释浓度,从而减少干扰实验的盲目性,避免浪 费试剂并且节省时问,且鲎试剂要求的pH值范围和其他因 素可以通过稀释来排除干扰.采用家兔法控制注射液的 细菌内毒素操作复杂,影响因素多,费时,而鲎试剂法与家兔 法相比则具有简便,迅速,重现性好,灵敏度高等优点. 参考文献: [1]国家药典委员会.中国药典(二部)[s].北京:化学工业出版 社,2005:附录85—9. [2]施震,尹银嘉,李华.注射用头孢替唑中细菌内毒素的检测 [J].中国药学杂志,2003,38(5):377—378. [3]宋瑜丽,马俊,颜稚宏,等.奥沙利铂注射液细菌内毒素检查 方法的研究[J].中国药业,2005,14(6):38—9. [4]王志斌,邵燕,周建平.注射用硝普钠中细菌内毒素的检查 [J].药物分析杂志,2000,20(1):5O一6o. [5]石庆平,丁峰,郭辉.复方维生素注射液细菌内毒素检查方 法的建立J].安徽医药,2006,10(1):64—5. [6]MaNyJones.BacterialEndotoxinsandPyrogens[J].Intemational JoumalofPharmaceufic~Compounding,2001,5(4):259. (收稿日期:2007—07—12)