激光辅助法精子制动在睾丸精子卵母细胞内单精子注射中的应用

激光辅助法精子制动在睾丸精子卵母细胞内单精子注射中的应用 激光辅助法精子制动在睾丸精子卵母细胞 内单精子注射中的应用 《~>>2004年第25卷第2期LASERJOURNAL(Vo1. 25.N..2.2oo4)75 激光辅助法精子制动在睾丸精子卵母细胞内单精子注射中的应用 李培旭,李尚为,彭芝兰,李蕾,马黔红,黄仲英,唐宗蓉,韩字研 (四川大学华西第二医院妇产科,成都610041) ..号.目:比较堡用激光和机械两种 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 制动睾丸精子后行卵母细胞内单精子注射的受精率,卵裂率和优质胚胎形成率的异『司,探索激塑子'制动在睾丸精子卵母细胞内单精 子注射中应用的可能性.方法:16对外周血染色体正常,无体外受精一胚胎移植禁忌症的无 于窭夫妇,女方用GnR/-l/Gonal—F/HCG长 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 超数排卵,将每对夫妇获得的卵用透明质酸酶去除颗粒细胞后随机均分为2组;女方采卵当日丈夫睾丸取精处理后分别用激光 法和机械法制动精子并行卵母细胞内单精子注射,24小时观察受精卵数目,48/J,时观察卵裂受精卵的数目和优 质胚胎的数目并计算出两组各自的受精率,卵裂率和优质胚胎形成率进行比较研究.结果:16对夫妇16个周期共获得Mn期卵母细胞189 枚.激光制动组(95枚)的受精率为71.6%(68/95),卵裂率为60.O%(57/95),优质胚胎形成率为53. 7%(51/95);机械制动组(94枚的受精率为 70?2%(66/94),卵裂率为61.7%(58/94),优质胚胎形成率为52l%(49/94).两组相比受精率,卵裂率和优质胚胎彤成率均无统计学蒡异(p> 0.05):结论:激光辅助法精子制动可以应用于睾丸精子卵母细胞内单精子注射. 关键词:睾丸精子;激光辅助法精子制动;机械法精子制动 中圈分类号:R153.2文献标识码:A文章编号:02.53—2743{2004)02—0075一I)2 111eapplicationoflaserassistedimmobilizationbeforeintracytoplamficsperm injeel:ionoftesticularspermatozoainhuman UPei一?,I3Shang—wei,PENG办lan.IJl】,MAQian—hong,HL^BGZhong— ying,TANGZong—tonE.HANZi一, (Depm'nnentofObsteb-ics&【,?ecDJ.,Sec~dAffiliatedHospital,WestChina ClinicalCollegeofMedicalScience,SichuanUniversity,Chengdu610041,China) Abstract:Objec~ve:Tomrethedifferenceinrates{fertilization,clea'~age,andgoodqualityemb~osbetweenlaserassistealimmobilizationandmechan. icalimmobilir~tion,forthepurposeofdemonstratingthepoc.~ibilit?,ofusinglaserassistedirrar~bilizationbeforeintraeytoplasmicsperminle~tif,n?rthods:This studyincludesin16coupleswithnormalchrom~w,omekaryob3sofperiphericlymphocyte.andwithouteon~'adictsignstoICSI—El'C,nRH/G~maJ—r/HCGplot0. colaleperformedforoncytescollectioninWOITIC~,totall89MI】 ~x'ytesin16cyclesaredividedintogroupsequallyatrandom:t~tieularbiopsi~-forsperms 8IedoneinandthespermscollectedweimmobilizedlaserassistedoYmec.hanicalmeshedbeforeintraeytoplasmic. sperminjectionAfter24h.ZShthenum. betsoffertility. ,cleavageandgoodquali~emb~'osrecorded;andratfarecalculatedandanaJineachgrouprespee~vely.Results:hhas小Jwn,Itherates offertility,cleavage,andg00dq~ityemb~os,ale71. 6%(68/95),60O%(57/95)and537%(5l/95)inlaserassistedimmobilizatio~1gronp;and702%(66/ 94),61.7%(58/94)and52.1%(49/94)inmechanicalimmobilizati(mgroupcorrespondentlyandthoserateshavenosignificantdiM1cebetweeni3~-(,groups也一 usfieally(P>0.05J.Conclusions:L丑5盯assistedsperml砌 ln(1llzan0nisirr~letonm.nipulme.andeasytocontrolhisusefandeffectir{I1Illa刚a.~asted testicul~spermimmobilizationbeforeinmacgoplasmicsperminjection'andernbD'otPanscfer K眄w州s:tesficularsperms;laserassistedspermimn~ilization;mechanicalsperminunobilization 1引言体的配制 卵母细胞内单精子注射受精一胚胎移植(1ntPa—Cytoplasmi(Sperm InjectionandEmbryoTransfer:1CSI—El')【二终成为解决男性无精于症性 不育的重要手段,而被选睾丸精子简单快速,准确制动是简化ICSI 操作过程和获得成功受精的关键,传统的精子制动方法是咐微注 射针将精子尾部压到培养皿底部使其机械制动这种力法的优点 在于它无破坏染色体结构和功能的潜在危险性;而存在精制动时 的力度难以掌握,操作过程烦琐,耗时相对较长等不足一随着非接触 式激光技术在移植前胚胎辅助孵化中的成功应用,使得该激光技术 应用于卵母细胞内单精子注射删的睾丸精于非接触式制动成为可 能.但激光睾丸精子制动可能存在破坏精子染色体的潜在危险本 研究的目的在于通过比较睾丸精子的机械制动和激光制动后行卵母 细胞内单精子注射两种方法受精率,卵裂率和优质胚胎形成率的差 异,观察激光辅助制动精子卵母细胞内单精子注射时激光对精子受 精能力和早期胚胎发育的影响, 2材料和方法 21主要试剂和器材 聚烯吡酮(PVP,Sigma).透明质酸酶f",ignm).人血n蛋f{fHuman Serum~lbumin,lISA,Sigma),人类输卵管液rHutro.nTubuleFluid.卜rI下, Quin's),Percoll液;台式离心机(Heraeus).I,02培养箱fForma,_/Ia刀 激光辅助孵化系统(|~onlett,Germany).微固定针和沣刺}1(' 收稿日期:2O03—12—10 作者简介:李培旭,男,泌碌生殖跃学硕1.女{产咋殖医学博1研究 q.通汛作者:Fax:+86—28—8550321一Email:F;singl~px,,ah0? 在9mJHrI下培养液中加入lmllISA配制成10%的血自蛋白液, 再取此液3.2ml加透明质酸酶1mg(320单位/毫克)配制成IOOu/ml的 10%人血自蛋白透明质酸酶液备用.9mlPert,oil液1搬八1mlH仟液 配制成9O%Pereoll液,9O%Percoll液可用等量的fill-培养液稀释为 45%的Perc(~ll液,离心管内加入05ml的曙Percoll液后冉加入0 5ml的45%Pereoll液制成Percoll液梯度离心管09%乍理盐水用 超纯水等量稀释为0.45%的低渗盐水 23分离睾丸精子 睾丸发育,外周血染色体正常,无体外受精一胚胎移植禁忌症的 无精子症夫妇l6对一丈夫睾丸取出曲细精管组织少许.将其放人0. 45%的低渗盐水中于37?的CO:培养箱中培养l0,15rain待红细胞 完全破裂后取出,用37?10%的人血白蛋F1mT液冲洗两次.置人盛 有37?1O%的人血白蛋白l液的培养I丑中于37~C的c培养箱中 培养30rnin,再用两张消毒灭菌的经3710%的人血fj蛋白液冲 洗后的玻片碾磨"j随后用37?10%的人血l蛋j}fT下液将玻片上 的组织匀浆冲入培养皿,用巴氏吸管反复吹打悬液.去除大块曲细精 管组织.悬液置离心管离心去上清液,加入2ml3710%的入血白蛋 白m液悬浮离心,最后用100u/ml透明质酸酶10%的人血自蛋白 HTF'液0.6ml悬浮沉淀,置37~C的~O2培养箱1h后取出加人Per. eoll液梯度离心管离心(800r/rain×20111inj.去f清液,加入2ml的10% 的人血自蛋白l液悬浮沉淀后离心f1000r/finnxlOmin).反复数次 后留沉淀0.1lnl混匀卵母细胞内单精注射用 2.4卵子的获得 l6对无精子症夫妇女力用tmRH,t诅】一F/HCG长方案超数排 卵,阴道"B..型超声引导下采卵.将每刈矢妇获得的卵子用透明质酸 酶除支预粒细胞后随机均分为2组 2.5显微操作 76<激光杂志))2oo4年第25卷第2期LASERJOURNAL(Vo1.25.No.2.2004) 显徽受精时用激光辅助法和机械法制动精子.机械法精子制动 是用显徽注射针将精子尾部中后段压到培养皿底部使其机械制动; 激光辅助法则是用1480nm波长的非接触式激光照射精子尾部的中 后段1次,照射时长为lms.精子制动后常规进行卵母细胞内单精子 注射. 2.6结果观察 24h观察受精卵(有两个原核和/或两个极体,图1)数目,48h观察 有卵裂(双细胞及以上,图2)的受精卵数目,并观察 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 优质胚胎(细 胞数?4个,无碎片或碎片少于10%.图3)的数.目.分别除以各组总 的卵子数计算出相应的受精率,卵裂率和优质胚胎形成率进行比较 2.7统计学 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 采用卡方检验(StatisticalPackageofSocialScience.简称SPSS软件 包)进行统计学分析, 3结果和讨论 采用激光辅助法和机械法制动精子后行卵母细胞内单精子注 射.两组相比受精率,卵裂率和优质胚胎形成率均无统计学差异(P> 0.05),见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf l一3 图i2原核的受精卵(×4oo)图22细胞胚胎(×200)图34细胞优质胚胎(×20O) 表1两组间的受精率比较 注:两组受薯i孽率比较无统计学差异(P>o.05) 表2两组间的卵裂率比较 注:两组卵裂率比较无统计学差异(P>0.05) 表3两组间的优质胚胎形成率比较 注:两组优质胚胎形成率比较无统计学差异(P>0.05) 临床资料显示睾丸发育和外周血染色体正常的男性无精于症患 者8o%以上可从睾丸曲细精管组织中分离出外形发育IE常的精于. 将这些精子用于卵母细胞内单精子滓射受精一胚胎移植(IC.~I一盯) 已经成为治疗男性无精于症性不育的重要而有效的方法"''目 前,卵母细胞内单精于注射受精一胚胎移植的关键步骤之一是被选 睾丸精子的简单,快速,准确,恰当制动因为ICSI后卵子要受精离 不开两个因素:即卵母细胞内ca一的释放和精子相关因子进八卵 母细胞浆内[7.8-9].ICS1本身的操作便可引起卵母细胞内ca一的释 放,但只有当精子能被快速,准确,恰地制动后.才会引起精子内部 的精子相关因子进人卵母细胞并激活卵母细胞.本研究将激光技术 应用于卵母细胞内单精于注射时睾丸精子的非接触式制动,与机械 法睾丸精子制动相比它的最大优点是操作简单准确,能量大小可调, 可控性能良好.尽管它为繁琐的卵母细胞内单精子注射受精带来j 很多方便,但同时也可能带来一些潜在的危险,如激光睾丸精于制动 可能存在因热效应而破坏精于染色体进而影响胚胎的进,步发育的 潜在危险[-. 本研究的结果显示睾丸精于的机械法制动和激光辅助法制动后 行卵母细胞内单精子注射的受精率,卵裂率和优质胚胎形成率均无 统计学差异(P>0.05).提示激光辅助法精子制动卵母细胞内单精子 注射时激光对精子的受精能力和早期胚胎发育能力无明显影响激 光辅助精子制动卵母细胞内单精子注射在小降低受精率,卵裂率和 优质胚胎形成率的同时.还为卵母细胞内单精子注射带来诸多方 便,简化了卵母细胞内单精子注射的过程和程序激光辅助精子制 动卵母细胞内单精子注射不需要使用PVP,需要直接接触精子,也 不需要在卵母细胞内单精子注射皿中定位精子就能将精子快速,准 确地制动,显然会大大缩短操作时间对于特定激光操作系统来说 其波长相似,发射功率和时间可调.操作过程中可据需要随时调整. 但激光用于辅助生殖技术的争议仍然存在,如何合理选择恰如 其分的激光能量用于卵母细胞内单精子注射过程中的睾丸精子制 动,以保证卵母细胞内单精子注射的安全有效仍有待进一步研究. Zona刀激光辅助孵化系统可用于卵母细胞内单精子注射过程中 的睾丸精子的制动,本研究发现激光法精子制动会因其热效应而 影响受精率,卵裂率和优质胚胎形成率,但其潜在的危险仍应考虑和 进一步研究. 参考文献 【ljF日Tn0G,JorisH.DevroeyP.etalPregnamci~'afterln廿acvt叩lc injectionsinglespermatozoonintoanooze'relJcet.1992.340 (8810):l7,l8. 【2GandinjL.LA.Lollnb~oF,elalImlT~turegermcel】seperatJon usingamodifieddiscontinuousPercoll胛dleIlttechniquei13humans mar1.【J]HumReprod.1999.14(4):lO22,lo27 l3j,~lamI,RobinsA,DowellK.elatlsolation.purificationanda8一 mentofviabilityofspermatogeniccellsfromtesticularbj0l】8ies0f azc日spem1icmetq.[J]HumReprod,1998,13(3):639,645 (4]AbuzeidMl,SasyMA,SalerflH,etat.Testicularspermextrac6onand inrtacytoolasmicS19elTnin3ection:asimplifiedmethodforn?a咖?, 0bs嘲ive?00a.[JFerdlSterl1.1997,68(2):328,333. 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