HPLC法测定止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量

[检验技术] y HPLC法测定止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量 Determination of the content of naringin by using high performance liquid chromatography1 LIN yi- xing1 (Hainan Provincial Inst itute for Drug Inspection, Haikou 570216, Hainan, P1 R1 China) 林一星 摘要:目的 研究止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量测定方法。 方法 采用 HPLC 法以乙腈- 磷酸盐缓冲液 ( pH311)为流动相, 色谱柱为依利特 C18柱, 流速为 11 0ml/ min, 检测波长 283nm。 结果 线性范围为 01 162Lg ~ 11944Lg, r= 019999;加样回收率为 103174% , RSD= 0186% ( n = 6)。 结论 本法重现性好, 灵敏度高,分离度好。 关键词: 止咳橘红颗粒;柚皮苷; 高效液相色谱法;含量测定 中图分类号: R38411 文献标识码: B 文章编号: 1009- 9727( 2005) 07- 1529- 02 止咳橘红颗粒是治疗因痰热阻肺引起的咳嗽痰 多,胸满气短,咽干喉痒的常见病有效药物,化橘红为 君药,药性辛、苦、温,能理气化痰、健脾止咳。5别录6 载其/ 下气, 止呕咳0。5药性论6称其/ 能治上气咳 嗽0。其指标成分为柚皮苷, 原试行质量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 测定柚 皮苷含量方法采用高效液相色谱法测定,流动相为甲 醇- 水 ( 43: 57) , 其中水用醋酸调节 pH3, 检测波长 283nm,但重现性差,分离度达不到要求。现采用反相 HPLC法, 通过对流动相的改变,提高了含量测定的准 确率。具有方法简便、专属性强、分离度高、重现性好 的特点。 1 材料与方法 111 仪器 SHIMADZU LC- 10AT 高效液相色谱仪, SHIMADZU SPD- 10A 紫外检测器, SHIMADZU SIL- 10AD自动进样器, 浙大 2010 色谱工作站, METTLER AE240型电子天平。 112 色谱条件 色谱柱: 依利特 C18 柱 ( 416mm @ 200mm, 10Lm) , 流动相为乙腈 - 磷酸盐缓冲液 ( pH311) ( 20: 85) ,流速为 110ml/ min,检测波长 283nm。 磷酸盐缓冲液的配置:磷酸二氢钠 3810g,磷酸氢二钠 5104g,加水 1 000ml使溶解,用磷酸调 pH 值至 311。 113 对照品 柚皮苷对照品由中国药品生物制品检 定所提供( 722- 200006含量测定用)。 114 药品 止咳橘红颗粒 (批号: 010901、010806、 010501、010401)海南中瑞康芝制药有限公司提供。 115 试剂 乙腈为色谱纯, 磷酸二氢钠、磷酸氢二 钠、磷酸均为市售 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯。 116 供试品溶液及对照液的制备 ¹ 取止咳橘红颗 粒( 010901)研细, 精密称取 1g, 置于 250ml三角瓶中, 加入甲醇 50ml, 后精密称其重量, 然后置水浴加热回 流1h,放置至室温,再次精密称其重量,并用甲醇补足 损失的重量,以干燥滤器滤过。精密量取续滤液 5ml, 置10ml量瓶中,加甲醇至刻度, 摇匀, 微孔滤膜滤过, 作为供试品溶液。º 精密称取于 110 e 干燥至恒重的 柚皮苷对照品 20125mg, 置于 125ml的容量瓶中, 加甲 醇至刻度,摇匀,制成对照品储备液( 162Lg/ml)。精密 吸取 310ml于 10ml容量瓶中,配制成 4816Lg/ ml的溶 液作为对照品溶液。 2 结果 211 系统适用性试验 精密吸取对照品溶液和供试 品溶液各 20Ll进样,测得色谱图 1及色谱图2, 理论板 数以柚皮苷峰计不低于3 000,柚皮苷峰与相邻未知色 谱峰的分离度大于 2。 图 1 柚皮苷对照品 HPLC 色谱图 图 2 供试品的 HPLC 色谱图 1529中国热带医学 2005年第 5卷第 7期 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol15 No17 October 2005 y 作者单位: 海南省药品检验所,海南 海口 5702161 212 干扰实验 取缺少化橘红的阴性对照样品, 按 供试液制备方法制备阴性对照样品溶液, 进样 20Ll, 测得HPLCT 图(图略)表明阴性对照无干扰。 213 线性关系[ 1] 取对照品储备液( 162Lg/ ml)分别 配制成 811Lg/ ml、1612Lg/ ml、3214Lg/ml、4816Lg/ml、 6418Lg/ ml、81Lg/ ml、9712Lg/ ml的系列对照品溶液,分 别进样 20Ll测定,以对照品浓度对峰面积进行线性回 归,柚皮苷在 01162Lg~ 11944Lg 范围内呈现良好的线 性关系,回归方程为 Y= 610784 @ 104X- 113033 @ 104, r= 019999。结果见表1。 214 精密度试验 取供试品溶液 20Ll注入液相色谱 仪,重复 5次,柚皮苷峰面积积分值的 RSD= 0121%。 见表 2。 215 重现性试验 取同一批样品( 010901) 5份, 分别 制成供试品溶液, 按含量测定法测定, 结果柚皮苷平 均含量为 01435% ( g/ g) , RSD= 1158%。见表 3。 表 1 柚皮苷对照品线性关系试验 No1 1 2 3 4 5 6 7 柚皮苷(Lg/ ml) 81 1 1612 3214 481 6 6418 81 9712 峰面积 484832 983983 1941753 2948183 3884601 4938112 5898423 表 2 精密度试验结果 No1 1 2 3 4 5 x RSD( % ) 柚皮苷峰面积 2552570 2546569 2551988 2539513 2546965 2547521 0121 表 3 重现性试验结果 样品 序号 取样量 ( g) 峰面积 柚皮苷含量% ( g) 平均值% ( g) RSD (% ) 1 11 0082 2581510 01434 2 11 0253 2670928 01442 3 11 0189 2656083 01442 01 435 11 58 4 11 0006 2550722 01432 5 11 0075 2528779 01426 216 稳定性试验 精密吸取新配制的供试品溶液 (010901) , 按样品含量测定法进样 20Ll 检验, 结果 RSD= 0171%, 表明样品溶液在 24h内保持稳定。结 果见表4。 217 加样回收率试验 精密称取于 110 e 干燥至恒重 的柚皮苷对照品 28175mg, 置于 25ml容量瓶中, 加甲 醇至刻度, 摇匀, 作为标准加样储备液。另精密称取 止咳橘红颗粒( 010901) 015g 6份, 分别加入上述标准 加样储备液210 ml及 310ml各 3份,按供试品溶液制 备方法制成加样回收样品液。取 20Ll进样,计算加样 回收率。结果见表 5。 表 4 稳定性试验结果 No1 0h 1h 2h 4h 8h 12h 24h RSD( % ) 峰面积 2541384 2563337 2571496 2553010 2564986 2586931 2593275 0171 表 5 加样回收率试验结果 样品序号 取样量( g) 样品量( mg) 加入量( mg) 测得量( mg) 回收率( % ) 平均回收率( % ) RSD(% ) 1 015061 21202 2130 41586 1031 65 2 015189 21257 2130 41652 1041 13 3 015255 21286 2130 41689 1041 48 103174 0186 4 015121 21228 3145 51838 1041 64 5 015048 21196 3145 51760 1031 30 6 015099 21218 3145 51745 1021 23 218 样品含量测定 取 4个批次的止咳橘红颗粒, 每 个批次平行4份,测定含量,结果见表 6。 表 6 样品测定结果 批号 测定结果( % ) ( g/ g ) 1 2 3 4 平均值 RSD% ( n = 4) 010401 01437 01432 01444 01431 01436 1136 010501 01389 01382 01374 01387 01383 1174 010806 01364 01359 01366 01369 01364 1115 010901 01434 01442 01432 01426 01434 1152 3 讨论 311 供试品溶液制备方法比较 本品供试品溶液原制 备方法为取样置于索氏提取器中, 先以石油醚 Ò回流 提取脂性成分并弃去,而后以甲醇回流提取至提取液 无色,提取液经滤过定容 50ml作为供试品溶液, 经试 验此方法提取率低[ 0133% (g/ g) ]。通过实验,未经石 油醚处理的样品溶液并无干扰, 故用甲醇直接提取 [ 0144% ( g/g) ]。 (下转第 1564页) 1530 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol15 No17 October 2005 中国热带医学 2005年第 5卷第 7期 2. 3 虽然有了 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 和 制度 关于办公室下班关闭电源制度矿山事故隐患举报和奖励制度制度下载人事管理制度doc盘点制度下载 , 但是没有专项报告经费, 导致经费投入严重不足, 公共卫生信息报告经费转嫁 给了各报告单位, 加重了报告单位的经济负担,特别 是基层医疗单位压力更大, 使整个公共卫生信息报告 网络建设滞后。 2. 4部门协作 机制 综治信访维稳工作机制反恐怖工作机制企业员工晋升机制公司员工晋升机制员工晋升机制图 不健全, 由于部门间缺乏协作机 制,系统内单位间责任和分工不明确, 一旦出现突发 公共卫生事件时,处置过程中没有形成协同作战的优 势。 3 对策 鉴于目前玉溪市突发公共卫生事件的多发现状, 各级党委、政府要切实加强对处置突发公共卫生事件 的领导,协调和解决处理突发公共卫生事件中存在的 困难和问题。各相关部门在处突工作中既要做到责 任明确,做到分工负责, 更要注重加强部门间相互协 作,形成合力, 才能高效有序的应对和处置突发公共 卫生事件, 确保群众的生命安全, 最大限度的降低危 害程度。 3. 1 加强领导,各级党委、政府要加强对突发公共卫 生事件处置的领导工作, 切实解决处理突发公共卫生 事件中存在的实际困难。 3. 2 有章可循、科学应对, 根据玉溪市实际, 应尽快 出台5玉溪市突发公共卫生事件应急预案6, 为切实可 行地应对和处置各种突发公共卫生事件提供科学依 据,保证突发公共卫生事件处置有章可循、科学有序、 迅速高效。此外, 应进一步完善玉溪市现行的5玉溪 市救灾防病预案65王溪市非典防治预案6、5玉溪市鼠 疫防治预案6、5玉溪市霍乱防治预案6、5玉溪市伤寒 防治预案6等技术性规范文本, 有针对性地开展各项 防控工作。 3. 3 健全应急队伍、提高人员素质,进一步完善处置 突发公共卫生事件队伍的建设工作, 不断充实队伍人 员,优化队伍的配置, 积极为队伍创造良好的政策环 境及工作条件, 只有建立健全反应灵敏、训练有数、配 置合理且有较强调查处理能力的应急组织和队伍,才 能高效有序的处置各种突发公共卫生事件。为适应不 断出现的新情况,尤其是针对当前国际上频繁发生的 生物、生化、放射恐怖事件, 要及时了解和掌握防范知 识,调查处理方法、技能和各种传染病诊断标准[ 2]。 3. 4 建立高效信息网络、保障信息畅通, 进一步完善 市、县、乡、村疫情网络功能, 充分利用国家疫情和公 共卫生信息系统, 规范事件的报告及管理工作,确保 信息畅通, 切实加强疫情网络村级质量体系建设,提 高信息系统监测灵敏性和特异性。 3. 5 强化实验室建设、增强快速反应能力,实验室监 测、检验检测技术能力的高低, 在很大程度上是制约 突发公共卫生事件能否成功处理的关键。因此, 必须 加强实验室建设, 一方面, 要加大应急现场采样和检 验设备的投入, 另一方面, 要深入研究, 开发和应用突 发公共卫生事件现场快速检验、检测方法, 提高实验 室检测的灵敏性和快速反应的时效性。此外, 还要配 备相应的防护、交通、通讯设备,提高快速反应能力。 3. 6 提高突发公共卫生事件报告质量, 明确责任报 告人的法律责任, 充分发挥义务报告人的主观能动 性,加快报告网络的建设工作, 避免迟报、盲报、漏报、 误报等现象的出现。规范突发公共卫生事件报告程 序,实行突发公共卫生事件对外发布准许制度[ 3]。 3. 7 积极开展突发公共卫生事件的预测、预报工作, 并不断加大科技含量, 建立科学合理的参数集合, 使 预测、预报工作更好地服务于社会。 参考文献: [ 1] 曹康泰1 突发公共卫生事件应急条例释义[M ]1 北京:中国法制出 版社, 2003. [ 2] 卫生部卫生监督中心卫生标准处 1 传染病诊断标准及相关法规汇 编[M]1 北京:中国标准出版社, 20031 [ 3] 张雅娟,李凤 1 学校内暴发疫情的防制对策 [ J]1 中华流行病学杂 志, 2002, 9(增刊) : 232. 收稿日期: 2005- 03- 01 (上接第 1530页) 312 测定波长的选择 通过查找资料[ 2]及参照原标 准规定,并用柚皮苷对照品的甲醇溶液, 按分光光度 法试验,在 200~ 800nm 波长范围进行扫描, 结果在波 长283nm处有最大吸收,故波长选择为 283nm。 313 流动相的选择 曾比较了下列几种流动相: ¹ 甲醇- 水; º 甲醇- 36%醋酸- 水; » 乙腈- 磷酸盐 缓冲液 ( pH311) ( 20: 85)。¼所得到的色谱图柚皮苷 与其他杂质峰, 在室温即能得到最佳分离( R> 2)。 4 小结 通过上述的试验研究可见,本文所建立的方法简 便、专属性强、重现性好, 适用于该制剂的质量控制。 参考文献: [ 1] 王宝琴 1 中成药质量标准与标准物质研究[M ]1 北京:中国医药科 技出版社, 1994, 28~ 291 [ 2] 陈发奎1 常用中草药有效成分含量测定[ M]1 北京: 人民卫生出版 社, 1997, 4791 收稿日期: 2005- 03- 10 1564 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol15 No17 October 2005 中国热带医学 2005年第 5卷第 7期