血清溶血素含量的测定血清溶血素含量的测定
.血清溶血素含量的测定
1 血清溶血素含量的测定
仪器:离心机、37?恒温水浴、冰浴、扫描酶标分光光度仪、无菌过滤装置
试剂: 1. 20,压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液，
2.10,SRBC混悬液，生理盐水，
3.以生理盐水1:10稀释的豚鼠血清1 ml
4.都氏试剂(碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水1000 m1)3 m1
于给药第2天，每鼠腹腔注射20,压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液0.2 ml，连续给药5天，...
血清溶血素含量的测定
.血清溶血素含量的测定
1 血清溶血素含量的测定
仪器:离心机、37?恒温水浴、冰浴、扫描酶标分光光度仪、无菌过滤装置
试剂: 1. 20,压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液，
2.10,SRBC混悬液，生理盐水，
3.以生理盐水1:10稀释的豚鼠血清1 ml
4.都氏试剂(碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水1000 m1)3 m1
于给药第2天，每鼠腹腔注射20,压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液0.2 ml，连续给药5天，于最后一次给药后1 h，从小鼠眼眶静脉丛取血，离心分离血清，取血清用生理盐水稀释500倍，取稀释血清1 ml置试管中，加10,SRBC混悬液0.5 ml，置冰浴，再加入以生理盐水1:10稀释的豚鼠血清1 ml混合，另设不加血清的空白对照。移置37?恒温水浴保温10 min后，立即移冰浴终止反应。用2000r,min离心10 min，取上清1 ml，加都氏试剂(碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水1000 m1)3 m1，混匀放置10分钟，取上清液用96孔板于扫描酶标分光光度仪540 nm处比色，测吸光度值(OD)。另取10,SRBC混悬液0.25 ml加都氏试剂3.75 ml，同上测定OD值，作为半数溶血值。血清溶血素含量以半数溶血值(HC)50表示。按下式计算:HC=样品的OD值,SRBC半数溶血时的OD值50
×稀释倍数。
淋巴细胞转化
仪器
CO培养箱、离心机、显微镜、无菌过滤装置、组织培养箱。各种吸2
管
试剂
PHA溶液:称取PHA，用RPMI-1640培养液配成500-1000ug/ml. RPMI-1640培养液:无菌RPMI-1640培养液中加入20%小牛血清，青霉素(100U/ml)和链霉素(100ug/ml)用3.5%NaHCO调节PH7.2-7.4,3
无菌分装，4?备用
淋巴细胞分离液
抗凝用肝素纳溶液(50U/ml).
方法(详见实验指导P55)
6分离抗凝血中的淋巴细胞，将悬液(3×10/ml)注入含PHA的RPMI-1640培养液小瓶，使PHA最终浓度为50ug/ml,37?，5%CO培2养箱，72h;吸弃2/3上清液，取底层细胞悬液，移入试管，2000rpm，10min。弃上清，吹打，涂片，干后瑞氏染色，镜下观察，计算转化率。
结果
转化率=转化的淋巴细胞数(含过渡性)/每份标本淋巴总数*100%
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