骨髓涂片体会

　第 16 卷 　第 12 期 医 学 研 究 生 学 报 Vol. 16 　No. 12 　2003 年 12 月 Journal of Medical Postgraduates Dec. 2003 ·经验荟萃· 骨髓常规检验的新体会 李早荣1 , 　胡锡林1 , 　周巧慧1 , 　寿 　爽1 , 　王晓君1 , 　卢兴国2 (11 解放军第 117 医院检验科 ,浙江杭州 310013 ; 21 浙江大学医学院附属第二医院检验科 ,浙江杭州 310009) 关键词 : 　骨髓 ; 　抗凝 ; 　有核细胞计数 ; 　巨核细胞计数 中图分类号 : 　R446111 　　　文献标识码 : 　B 　　　文章编号 : 　100828199 (2003) 1220958201 　　骨髓检查是血液病及临床疑难病患者的重要检查项目之 一 ,对确诊血液病及判断疗效、预后和骨髓移植造血功能的恢复 具有重要意义。骨髓常规检验一般在骨髓凝固前快速涂片数张 送检。由于未作抗凝 ,常出现涂片数量不足或涂片中有凝块 ;室 间质量评价的开展更需要大批量符合质量 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 的骨髓涂片。此 外 ,随着对检验质量要求的不断提高 ,骨髓有核细胞和巨核细胞 的定量计数也被提到了重要的位置。作者根据多年的经验体 会 ,对上述有关问题从新的认识角度进行 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf ,以供同行借鉴。 1 　骨髓抗凝和涂片 111 　骨髓液抗凝的必要性　传统的做法是在抽取骨髓液后 ,在 没有凝固之前立即快速涂片 ,其难以避免的问题是 : ①骨髓液容 易凝固 ,涂片数量和质量难以保证 ; ②骨髓液未能充分混匀 ,各 涂片间细胞分布不均匀 ,造成分类结果不准确 ,甚至漏检某些重 要的异常细胞 ; ③无法对有核细胞及骨髓巨核细胞进行直接定 量计数 ; ④无法获得一定数量符合质量要求的骨髓涂片 ,影响室 间质量评价活动 ; ⑤急促操作不易得到符合质量的涂片。所以 , 对骨髓标本进行抗凝十分必要。 112 　抗凝剂的选择　本文作者采用肝素、EDTA2Na2、EDTA2K2 抗凝及脱纤维等 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ,依据抗凝效果、抗凝后细胞形态、染色效 果及标本保存时间、染色后涂片背景清晰程度等作为质量考核 指标 ,结果以 012 %～014 %的 EDTA2K2 为最好。经全军近 60 所医院 7 年间 56 份数千张骨髓涂片室间质量评价实践 ,完全可 以达到质量要求 ,与不抗凝直接涂片标本相一致。因此 ,建议骨 髓标本用 EDTA2K2 抗凝后送实验室 ,以避免临床涂片不佳、数 量不足及细胞分布不均匀等影响检验质量。 113 　采用定量骨髓涂液涂片 　骨髓细胞学检查所用涂片要求 类似于血涂片 ,能区分头、体和尾 ,玻片四周留有空隙 ,涂片中尽 可能包含骨髓小粒。为了对涂片中的巨核细胞进行定量计数 , 建议用 5μl 抗凝骨髓液涂成约 2 cm ×315 cm的薄片 ,这样通过 检查全片的巨核细胞 ,就可以定量报告每μl 巨核细胞的数量 ,较 传统的单位面积(115 cm×310 cm) 1 ,2 或不管涂片面积大小、厚 薄 , 以每张涂片内的巨核细胞数来评估其增生程度要准确可 靠。此外 ,如作为质控片 ,定量涂片可保证各涂片间的相对一致 性。 2 　骨髓涂片的染色 211 　常规染色中存在问题的解决办法　有时染色时间过长、着 色过深或背景有沉渣时 ,可在涂片上滴数滴甲醇或瑞2姬复合染 色液 ,立即用清水冲洗即可 ;如作脂类(SBB)等染色时 ,为避免沉 渣 ,可将涂片血膜朝下染色 ;大批量标本染色时 ,可用染色架在 染色缸内垂直染色 ,既能达到一批标本染色效果基本一致 ,又可 避免背景附着沉渣。 212 　批量涂片染色液的配制及染色方法　批量染色液的配制 : 吉氏色素粉( Giemsa Stain) 10 g ,瑞氏染料 1 g ,加至甲醇甘油混 合液(1∶1 混合) 500 ml 中 ,再加入吐温220 1 ml 和玻璃珠数粒 ,充 分振摇 10 min后放入 37 ℃水箱 ,每天振摇数次 ,数天后即可应 用。将上述染色液以蒸溜水(pH 710～712)作 20 倍稀释 ,将批量 标本垂直放置在染色架上 ,经甲醇固定 1 min ,置入上述稀释好 的染液内染色 15～20 min ,取出置水中充分冲洗即可。染色后 , 各涂片间结果基本一致、背景清晰、无沉渣 ,色泽鲜艳 ,效果好 , 细胞间对比度大 ,易于分析鉴别。 3 　骨髓有核细胞和巨核细胞定量计数 311 　骨髓有核细胞增生程度估计的传统方法 　骨髓有核细胞 的数量是判断骨髓增生程度的重要指标。以往采用间接的方 法 ,准确性和重复性都难以满意 ,目前尚无更正确的直接计数 法3 。 312 　骨髓有核细胞直接定量计数法 　将抽取的骨髓液立即置 入内含 20μl 15 %EDTA2K2 等渗液的塑料小试管内 ,充分混匀 , 吸取 20μl 上述抗凝骨髓液 ,加至 0138 ml 1 %盐酸溶液混匀后 , 按常规用高倍镜计数中央 1 个大方格或 5 个小方格内有核细 胞 ,换算成( ×012 或 1) ×109/ L ,根据实验高、中、低值结果 ,变异 系数( CV)分别可达到 611 %、611 %和 916 % ,准确性和重复性十 分理想。 313 　骨髓巨核细胞增生传统估计法　以往也采用间接方法 ,无 论单位面积法或每张涂片法 ,其重复性或准确性都难以满足临 床需要。而用定量计数的方法 ,则可以解决多年来没有解决的 问题。 314 　骨髓巨核细胞直接定量计数法　定量计数的具体方法是 : 取充分混匀的抗凝骨髓液 5μl ,置玻片涂成约 2 cm ×315 cm 大 小的薄片 ,染色后用低 - 高倍镜计数并分类 ,再换算成每微升骨 髓液内巨核细胞数 ,以两张涂片的均值作为报告参数。 4 　显微镜视野的面积高倍镜判断骨髓增生程度的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 411 　骨髓有核细胞增生程度的传统估计 　其方法是采用低 倍镜计数视野内的有核细胞数 ,然后作出判断 ,除了由于涂 片厚薄、细胞分布不均匀或有核细胞数量多时难以计数等因 素造成较大差异外 ,各种型号的显微镜视野面积也有较大差 异。例如 ,Nikon YS22Ⅱ型显微镜低倍视野 (10 ×10) 面积为 21662 mm2 ,而 OL PMPUS BX51 为 31801 mm2 ;高倍镜视野 (10 ×40)则分别为 01584 mm2 和 01238 mm2 ;此种差异以往 的资料从未提及。所以在采用此法时应充分注意到这一点。 412 　骨髓有核细胞增生程度的高倍镜判断标准 　根据我们 对 114 例骨髓标本有核细胞的观察分析 ,以 Nikon YS22Ⅱ型 显微镜高倍镜视野 (10 ×40/ HP) 有核细胞增生标准为 :增生 极度活跃 , > 150 个/ HP ;增生明显活跃 ,50～150 个/ HP ;增 生活跃 ,15～50/ HP 个 ;增生减低 ,5～15 个/ HP ;增生明显减 低 , < 5 个/ HP。此标准可作为直接定量计数法的补充。 参考文献 : 1 　叶应妩 ,王三毓主编. 全国临床检验操作规程 M . (第二版) . 南京 :东南大学出版社出版 ,1997. 70271. 2 　李家增 ,王鸿利 ,韩忠朝主编. 血液实验学 M . 上海 :上海科学 技术出版社 ,1997. 31236. 3 　王风计编著. 血液细胞学 M . 天津 :天津科学技术出版社 , 1991. 10236. (收稿日期 : 　2002208209) (责任编辑 　石 　东) ·859·