食品中肉毒杆菌检测--科标检测
肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的致病菌,全称肉毒梭状杆菌,在罐头食品及密封
腌渍食物中具有极强的生存能力,它在繁殖过程中所分泌的肉毒毒素具有极强的毒性,是
KCN毒性的一万倍。纯化结晶的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠,对人的致死剂量约0.1μg。
它通过阻断人体神经接头,导致全身麻痹、瘫痪,严重时能引起人呼吸肌麻痹,导致无法呼
吸,最终死亡。目前报道新西兰恒天然浓缩乳清蛋白粉大批量被肉毒杆菌污染,多家产品被
卷入其中,科标化工分析检测中心为了我国奶粉质量安全,现开展食品中肉毒杆菌检测。
科标化工分析检测中心可依照 ISO、ASTM、DIN、GB、SN等
标准
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完成食品、微生
物、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性
能、力学性能、电气性能等测试。中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格
评定国家认可委员会的二合一(CMA、CNAS)实验室认证认可,能出具权威的第三方检测
报告
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。
食品中肉毒杆菌检测(PCR 检测方法)
一、实验原理
科标化工分析检测中心结合国标 GB/T4789.12-2003食品中卫生微生物学检验肉毒杆
菌及内毒素检验和 SN/T 2525-2010食品中肉毒杆菌的 PCR 检测方法对食品中肉毒杆菌进
行检验。
将样品经增菌后划平板分离单菌落,挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤
(TPGY)培养基培养,对培养物用 DNA 提取试剂盒抽提 DNA,进行 PCR 扩增,用琼脂糖凝
胶电泳检验 PCR 产物中是否含有肉毒杆菌的的特征条带,从而对食品中是否污染肉毒杆菌
进行快速检测。
二、仪器和试剂
Heraeus Multifuge X1R 高速台式冷冻离心机,Bio-RAD ALS1296 PCR 仪器,Tanon-3500
凝胶成像分析系统,YQX-Ⅱ厌氧培养箱,恒温水浴锅。
三、试验方法
1、样品的增菌培养
取庖肉培养基2管和 TPGY培养基2管,煮沸10min~15min(为了排除溶解于培养基中的
氧,切勿摇动),迅速冷却。每15ml 培养基中接种1g~2g固体食品或1ml~2ml 液体食品(缓
慢地将接种物接入肉汤液面下)。将样品接种2管庖肉培养基(35±1℃下培养)和2管 TPGY
培养基(28±1℃下培养),均厌氧培养5天。观察培养物的浊度、产气、肉粒的消化和产生
的气味。若有生长继续以下操作,若无生长,则继续培养10天。
2、培养物分离
取2ml培养液置于无菌试管中,加入等量无菌无水乙醇,混匀,放置1h。用接种环取2
环经处理过的培养物接种到厌氧卵黄琼脂上,35±1℃下厌氧培养48h。挑取可疑菌落接种
到 TPGY培养基,35±1℃下厌氧培养24h。
3、DNA 提取、扩增
取1.4mlTPGY培养物转移到离心管中,13000r/min离心2min,弃去上清液。沉淀加入
500µl生理盐水,震荡重悬30s,13000r/min离心2min,弃去上清液。沉淀中直接加入50µlDNA
提取液充分混匀,沸水浴10min,13000r/min离心3min,取上清液4µl 进行 PCR 扩增。扩增
的 DNA 跑琼脂糖凝胶电泳,电泳结果用凝胶成像系统
记录
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。
四、结果判定
阴性对照和空白对照均未出现条带,阳性对照出现预期大小的扩增条带,待测样品出现
预期大小的扩增条带则判定为 PCR 结果阳性,科标化工分析检测中心报告“检出某型
(A,B,E,F)肉毒杆菌”。待测样品未出现预期大小的扩增条带则判定为 PCR 结果为阴性,科
标化工分析检测中心报告“未检出某型(A,B,E,F)肉毒杆菌”。
附图
1111、PCRPCRPCRPCR扩增仪
2、凝胶成像系统
3、厌氧培养箱
4、PCR 扩增图谱