白细胞分类计数和形态学检查
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白细胞分类计数和形态学检查
(一)目的
通过对血涂片进行形态学检查,为临床提供准确可靠的
检测
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结果,为疾病的治疗和疗效监测提供可靠的实验室检测数据。
(二)检测原理
瑞氏染液进行染色,良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。外周血可见多种有核细胞。常见的有:中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。 (三)试剂与器材
1 试剂
1.1 瑞氏染液、磷酸盐缓冲液及香柏油等。
1.2 瑞氏染液贮存:
1.2.1保存于2,25?,标签注明配制日期。
1.2.2 使用时避免污染,当试剂有浊度时,
表
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明有污染,不能继续使用。 2 器材
2.1 光学显微镜及载玻片等。
(四)标本
要求
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1 标本类型
EDTA-K2抗凝全血,标本无凝块,不能溶血。
2 标本稳定性
使用EDTA,K2抗凝血液样本时,应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前,样本应充分混匀。注意,样本不能冷藏。
(五)操作步骤
1 血涂片显微镜检查
1.1 首先在低倍镜下(10倍,40倍)进行浏览,观察有无异常细胞和细胞分布情况。然后,在100倍油镜下,观察细胞浆内的颗粒和核分叶情况。 1.2 检查从约50,的红细胞互相重叠区域开始,向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较薄的区域,呈羽毛状,为“血片边缘”。
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1.3 中性粒细胞,单核细胞和淋巴细胞分布均匀的区域为血涂片分类“可接受”区域。当白细胞总数正常时,在血涂片尾部和边缘,每油镜视野所见的白细胞数量不超过血涂片体部的2,3倍。
1.4 除某些病理情况(如慢性淋巴细胞白血病)外,破碎细胞或不能识别细胞的数量不超过白细胞总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别(如破碎的嗜酸性粒细胞)应包括在分类计数中。在结果报告中,应设其他栏,以备填写破碎细胞或不能识别细胞,并作适当描述。
2 计数
方法
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2.1 采用“城垛式”方法检查血涂片。每个明确识别的细胞必须归入下列分类中:中性分叶核粒细胞;中性杆状核粒细胞;淋巴细胞;异型淋巴细胞;单核细胞;嗜酸性粒细胞;嗜碱性粒细胞;其他有核细胞(除有核红细胞外)。能明确识别的破碎细胞,应恰当分类。
2.2 每张血涂片应计数200个白细胞,若样本中白细胞数量减少,应增加检查血涂片的数量。
2.3 白细胞分类结果以百分率和绝对值表示。
2.4计数所有的有核红细胞,结果以每100个白细胞计数中见到几个表示。 (六)影响因素
1 血膜厚度与血滴大小、推片角度和速度有关,血滴大,角度大,速度快则血膜厚,反之则薄。
2 分类时应从血膜体尾交界处边缘向中央依次上下迂回“城垛式”移动,计数时不能重复和遗漏。
3 分类见有核红细胞,不计入100个白细胞内,以分类100个白细胞所见有核红细胞报告。
4 分类中应注意各类细胞形态,当形态有异常时应同时报告。
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