四逆散冻干粉改善睡眠作用的药效物质基础

四逆散冻干粉改善睡眠作用的药效物质基础 ? 1 8 ? 中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志 2 0 1 3 年 2 月 第 2 7 卷 第 1 期 C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l , V o l 2 7 , N o 1 , F e b 2 0 1 3 四 逆 散 冻 干 粉 改 善 睡 眠 作 用 的 药 效 物 质 基 础 1 , 2 2 1 3 李 越 峰 , 苏 云 明 , 严 兴 科 , 李 廷 利 ( 1 . 甘 肃 中 医 学 院 药 学 系 , 甘 肃 兰 州 7 3 0 0 0 0 ; 黑 龙 江 中 医 药 大 学 2 . 博 士 后 流 动 站 , 3 . 药 学 院 , 黑 龙 江 哈 尔 滨 1 5 0 0 4 0 ) 摘 要 : 目 的 探 讨 四 逆 散 改 善 睡 眠 作 用 的 药 效 物 质 基 础 , 为 阐 明 其 改 善 睡 眠 的 作 用 机 制 提 供 依 据 。 - 1 - 1 - 1 方 法 W i s t a r 大 鼠 随 机 分 为 正 常 对 照 、 四 逆 散 冻 干 粉 1 2 g ? k g 、 芍 药 苷 8 7 m g ? k g 、 甘 草 次 酸 3 9 m g ? k g 、 - 1 - 1 昔 奈 福 林 3 8 m g ? k g 、 柴 胡 皂 苷 C 4 2 m g ? k g 、 血 清 移 行 成 分 配 伍 ( 昔 奈 福 林 ? 芍 药 苷 ? 柴 胡 皂 苷 C ? 甘 草 次 - 1 酸 = 8 . 5 ? 1 ? 1 . 5 ? 6 . 5 ) 2 0 6 m g ? k g 组 , 给 药 组 i g 给 药 , 每 天 1 次 , 连 续 7 d , 于 末 次 给 药 后 5 h 制 备 血 清 或 抽 取 脑 脊 液 , 用 H P L C 测 定 血 清 和 脑 脊 液 中 四 逆 散 移 行 成 分 ; 或 者 连 续 i g 给 药 7 d 后 , i p 给 予 戊 巴 比 妥 钠 - 1 5 0 m g ? k g , 用 翻 正 反 射 法 测 定 小 鼠 睡 眠 时 间 。 结 果 ? 四 逆 散 冻 干 粉 连 续 给 药 7 d 后 血 清 样 品 中 有 1 4 种 移 行 成 分 , 经 来 源 认 定 研 究 认 为 , 其 中 2 号 成 分 为 昔 奈 福 林 , 4 号 成 分 为 芍 药 苷 , 1 2 号 成 分 为 柴 胡 皂 苷 C , 1 4 号 成 分 为 甘 草 次 酸 。 四 逆 散 冻 干 粉 、 芍 药 苷 、 甘 草 次 酸 、 昔 奈 福 林 和 柴 胡 皂 苷 C 均 可 以 使 脑 脊 液 中 内 源 性 ? 物 质 峰 面 积 增 加 , 其 中 四 逆 散 冻 干 粉 组 是 正 常 脑 脊 液 峰 面 积 的 1 2 . 5 倍 ; 血 清 移 行 成 分 配 伍 组 脑 脊 液 中 内 源 性 物 质 峰 面 积 高 于 四 逆 散 冻 干 粉 组 , 是 四 逆 散 冻 干 粉 组 的 3 . 2 倍 。 ? 昔 奈 福 林 、 芍 药 苷 、 柴 胡 皂 苷 C 和 甘 草 次 酸 单 用 对 戊 巴 比 妥 钠 所致 小 鼠 睡 眠 时 间 无 明 显 影 响 , 四 逆 散 冻 干 粉 和 血 清 移 行 成 分 配 伍 均 延 长 小 鼠 睡 眠 时 间 ( P < 0 . 0 1 ) , 且 血 清 移 行 成 分 配 伍 组 优 于 四 逆 散 冻 干 粉 组 ( P < 0 . 0 1 ) 。 结 论 芍 药 苷 、 甘 草 次 酸 、 昔 奈 福 林 和 柴 胡 皂 苷 C 是 四 逆 散 冻 干 粉 给 药 后 血 清 主 要 移 行 成 分 , 可 能 是 四 逆 散 改 善 睡 眠 作 用 的 物 质 基 础 。 关 键 词 : 四 逆 散 ; 血 清 ; 脑 脊 液 ; 睡 眠 ; 有 效 成 分 中 图 分 类 号 : R 9 6 5 文 献 标 志 码 : A 文 章 编 号 : 1 0 0 0 ? 3 0 0 2 ( 2 0 1 3 ) 0 1 ? 0 0 1 8 ? 0 5 D O I : 1 0 . 3 8 6 7 / j . i s s n . 1 0 0 0 ? 3 0 0 2 . 2 0 1 3 . 0 1 . 0 0 4 四 逆 散 为 东 汉 张 仲 景 《 伤 寒 论 》 首 载 , 由 柴 胡 、 白 1 材 料 与 方 法 芍 、 枳 实 和 甘 草 4 味 中 药 组 成 , 是 和 解 少 阳 、 调 和 肝 脾 1 . 1 实 验 动 物 的 基 础 方 剂 , 具 有 解 郁 透 热 、 疏 肝 理 脾 和 宣 散 气 血 郁 W i s t a r 大 鼠 , 雄 性 , 体 质 量 2 0 0 ~ 2 2 0 g ; 昆 明 种 滞 之 功 。 研 究 中 药 复 方 发 挥 药 效 作 用 的 物 质 基 础 有 小 鼠 , 雄 性 , 体 质 量 1 8 ~ 2 2 g ; 黑 龙 江 中 医 药 大 学 实 验 助 于 阐 明 其 药 理 作 用 机 制 。 中 药 指 纹 图 谱 技 术 如 色 动 物 中 心 提 供 , 许 可 证 号 : 黑 动 字 第 P 0 0 1 0 1 0 0 6 。 谱 法 和 光 谱 法 为 研 究 中 药 复 方 化 学 成 分 提 供 了 技 术 [ 1 - 4 ] 1 . 2 药 物 手 段 。 本 研 究 团 队 发 现 , 四 逆 散 冻 干 粉 具 有 改 善 [ 5 - 6 ] 柴 胡 为 伞 形 科 植 物 柴 胡 ( B u p l e u r u m c h i n e n s e 睡 眠 和 提 高 睡 眠 质 量 的 作 用 。 本 研 究 采 用 反 相 [ 7 ] D C . ) ( 北 柴 胡 ) , 购 于 河 北 省 安 国 市 康 信 义 药 材 行 ; H P L C 法 获 得 四 逆 散 冻 干 粉 指 纹 图 谱 , 通 过 四 逆 散 白 芍 为 毛 茛 科 植 物 芍 药 ( P a e o n i a l a c t i f l o r a P a l l . ) 冻 干 粉 血 中 移 行 成 分 分 析 、 脑 脊 液 中 移 行 成 分 分 析 并 的 干 燥 根 , 枳 实 ( 炙 ) 为 芸 香 科 常 绿 小 乔 木 植 物 酸 橙 观 察 四 逆 散 冻 干 粉 对 戊 巴 比 妥 钠 所 致 小 鼠 睡 眠 时 间 ( C i t r u s a u r a n t i u m L . ) 的 干 燥 幼 果 , 甘 草 ( 炙 ) 为 豆 的 影 响 , 初 步 探 讨 四 逆 散 改 善 睡 眠 作 用 的 物 质 基 础 , 科 植 物 甘 草 ( G l y c y r r h i z a u r a l e n s i s F i s c h . ) 、 胀 果 甘 为 阐 明 其 改 善 睡 眠 的 作 用 机 制 提 供 依 据 。 草 ( G l y c y r r h i z a i n f l a t a B a t . ) 或 光 果 甘 草 ( G l y c y r ? 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 ( 8 1 0 7 3 0 7 7 ) ; 教 育 部 科 r h i z a g l a b r a L . ) 的 干 燥 根 , 均 购 自 哈 尔 滨 市 世 一 堂 学 技 术 研 究 重 点 项 目 ( 2 1 2 1 8 6 ) ; 甘 肃 省 自 然 科 学 基 金 中 药 饮 片 厂 ; 以 上 药 材 均 经 本 单 位 生 药 学 教 研 室 都 ( 1 0 1 0 R J Z A 2 1 2 ) 晓 伟 教 授 鉴 定 。 作 者 简 介 : 李 越 峰 ( 1 9 7 6 - ) , 女 , 副 教 授 , 中 药 学 博 士 , 1 . 3 主 要 试 剂 和 仪 器 硕 士 生 导 师 , 主 要 从 事 中 药 及 复 方 药 效 物 质 基 础 和 作 用 机 制 戊 巴 比 妥 钠 , 中 国 医 药 集 团 上 海 化 学 试 剂 公 司 ; 研 究 ; 李 廷 利 ( 1 9 5 7 - ) , 男 , 教 授 , 博 士 研 究 生 导 师 , 主 要 从 甘 草 酸 单 铵 盐 、 柴 胡 皂 苷 C 和 昔 奈 福 林 ( H P L C 测 事 中 药 药 物 活 性 成 分 研 究 。 定 纯 度 均 > 9 8 % ) , 成 都 思 科 华 生 物 技 术 有 限 公 司 ; 通 讯 作 者 : 李 廷 利 , T e l : ( 0 4 5 1 ) 8 2 1 9 6 2 9 4 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 书 书中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志 2 0 1 3 年 2 月 第 2 7 卷 第 1 期 C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l , V o l 2 7 , N o 1 , F e b 2 0 1 3 ? 1 9 ? 高 氯 酸 ( 分 析 纯 ) , 天 津 市 东 方 化 工 厂 ; 胰 蛋 白 酶 , 上 样 1 0 μ l 进 行 移 行 成 分 分 析 。 海 伯 奥 生 物 科 技 有 限 公 司 ; 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 1 . 6 四 逆 散 冻 干 粉 及 其 主 要 血 清 移 行 成 分 昔 奈 福 ( T r i s , 分 析 纯 ) , 上 海 山 浦 化 工 有 限 公 司 ; 甲 醇 林 、 芍 药 苷 、 柴 胡 皂 苷 C 和 甘 草 次 酸 给 药 后 大 鼠 脑 ( H P L C 级 ) 和 乙 腈 ( H P L C 级 ) , 美 国 迪 马 试 剂 公 脊 液 样 品 的 制 备 司 ; 甘 草 次 酸 、 芍 药 苷 、 柚 皮 苷 和 橙 皮 苷 , 中 国 药 品 生 取 W i s t a r 大 鼠 7 0 只 , 平 均 分 为 7 组 , 分 别 为 正 - 1 物 制 品 检 定 所 , H P L C 测 定 其 纯 度 均 > 9 8 % 。 S H I ? 常 对 照 组 、 四 逆 散 冻 干 粉 1 2 g ? k g 组 、 血 清 移 行 成 - 1 - 1 M A D Z U 岛 津 2 0 1 0 ? A 高 效 液 相 色 谱 仪 、 K r o m a s i l 色 分 昔 奈 福 林 3 8 m g ? k g 、 芍 药 苷 8 7 m g ? k g 、 柴 胡 - 1 - 1 谱 柱 和 C ( 4 . 6 m m × 2 5 0 m m , 5 μ m ) 保 护 柱 , 购 皂 苷 C 4 2 m g ? k g 和 甘 草 次 酸 3 9 m g ? k g 组 及 其 1 8 自 大 连 依 利 特 分 析 仪 器 有 限 公 司 ; 微 孔 纯 水 制 备 系 配 伍 ( 昔 奈 福 林 ? 芍 药 苷 ? 柴 胡 皂 苷 C ? 甘 草 次 酸 = 统 和 超 级 恒 温 器 , 重 庆 实 验 设 备 厂 ; K D C ? 4 0 低 速 离 8 . 5 ? 1 ? 1 . 5 ? 6 . 5 ) ( 各 成 分 在 血 清 移 行 成 分 中 的 质 量 - 1 心 机 , 科 大 创 新 股 份 有 限 公 司 中 佳 分 公 司 ; S K ? 1 型 比 ) 2 0 6 m g ? k g 组 。 称 取 冻 干 粉 2 0 g , 加 水 溶 解 - 1 快 速 混 匀 器 , 江 苏 医 疗 仪 器 厂 ; B 3 2 0 0 S ? T 超 声 震 荡 配 成 5 0 0 g ? L 溶 液 , i g 给 药 , 正 常 对 照 组 给 予 等 体 仪 , 必 能 信 超 声 上 海 有 限 公 司 ; 翻 正 反 射 测 定 仪 积 蒸 馏 水 。 每 天 1 次 , 连 续 7 d 。 于 末 次 给 药 后 5 h - 1 自 制 。 i p 给 予 大 鼠 1 % 戊 巴 比 妥 钠 溶 液 4 m l ? k g 麻 醉 , 1 . 4 四 逆 散 冻 干 粉 的 制 备 5 m i n 后 用 1 m l 注 射 器 于 枕 骨 大 孔 抽 取 脑 脊 液 , 并 精 密 称 取 药 材 适 量 , 加 入 1 0 倍 体 积 水 , 煎 煮 将 1 0 只 大 鼠 脑 脊 液 合 并 , 加 入 甲 醇 5 m l 快 速 混 匀 , 2 次 , 每 次 1 h , 过 滤 , 合 并 滤 液 , 减 压 浓 缩 至 稠 膏 状 , 密 闭 超 声 提 取 1 0 m i n , 9 9 9 × g 离 心 1 0 m i n , 取 上 清 - 1 并 于 7 0 ? 水 浴 浓 缩 至 0 . 8 k g ( 生 药 ) ? L , 采 用 先 液 在 4 0 ? 恒 温 条 件 下 减 压 回 收 至 干 , 残 渣 以 甲 醇 煎 煮 后 冷 冻 干 燥 的 工 艺 制 备 四 逆 散 冻 干 粉 。 工 艺 如 1 m l 溶 解 , 0 . 4 5 m 滤 膜 过 滤 , 取 1 0 l 进 样 进 行 移 μ μ 下 : - 4 0 ? 制 冷 , - 2 0 ? 保 冻 2 h , - 1 0 ? 保 冻 行 成 分 分 析 。 1 6 h , 2 0 ? 干 燥 5 h , 3 5 ? 二 次 干 燥 2 h 。 此 工 艺 条 1 . 7 大 鼠 血 清 和 脑 脊 液 中 移 行 成 分 分 析 件 下 , 获 得 的 四 逆 散 冻 干 粉 冻 型 饱 满 , 复 水 性 好 , 呈 淡 取 1 0 μ l 上 述 制 备 的 血 清 和 脑 脊 液 样 品 用 黄 色 , 网 状 疏 松 , 水 分 < 1 % 。 采 用 H P L C 法 测 定 其 H P L C 法 进 行 移 行 成 分 分 析 。 色 谱 柱 : K r o m a s i l C 1 8 中 芍 药 苷 2 . 7 4 % , 柴 胡 皂 苷 A 2 . 3 2 % , 柚 皮 苷 柱 ( 4 . 6 m m × 2 5 0 m m , 5 m ) ; 流 动 相 : 乙 腈 ? 0 . 0 5 % ? ? ? μ 3 . 3 1 % , 甘 草 次 酸 ? 2 . 7 0 % 。 精 密 称 取 四 逆 散 冻 干 磷 酸 水 溶 液 , 梯 度 见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1 ; 检 测 波 长 : 2 1 0 n m , - 1 粉 0 . 5 g 置 容 量 瓶 中 , 精 密 加 入 7 0 % 甲 醇 2 0 m l , 超 2 4 0 n m ; 流 速 : 1 . 0 m ? l m i n ; 柱 温 : 3 0 ? 。 声 提 取 4 0 m i n , 冷 却 , 摇 匀 , 滤 过 , 再 用 0 . 4 5 m 滤 1 . 8 戊 巴 比 妥 钠 所 致 小 鼠 睡 眠 时 间 的 测 定 μ 膜 过 滤 , H P L C分 析 , 进 样 量 1 0 μ l 。 取 小 鼠 1 4 0 只 , 置 实 验 室 1 周 , 使 之 适 应 环 境 。 1 . 5 四 逆 散 冻 干 粉 给 药 后 大 鼠 血 清 样 品 的 制 备 实 验 分 组 同 1 . 6 , 每 组 2 0 只 。 每 天 给 药 1 次 , 连 续 称 取 四 逆 散 冻 干 粉 2 0 g , 加 水 溶 解 配 成 7 d 。 于 末 次 给 药 前 8 h 禁 食 , 给 药 6 0 m i n 后 i p 给 - 1 - 1 - 1 5 0 0 g ? L 溶 液 , i g 给 予 大 鼠 , 剂 量 为 5 . 0 g ? k g , 予 戊 巴 比 妥 钠 5 0 m g ? k g , 室 内 温 度 保 持 在 2 0 ? , 每 天 1 次 , 连 续 7 d 。 于 末 次 给 药 后 5 h i p 给 予 大 鼠 湿 度 4 0 % 。 用 翻 正 反 射 测 定 仪 测 定 小 鼠 睡 眠 时 间 , - 1 1 % 戊 巴 比 妥 钠 溶 液 4 m ? l k g 麻 醉 , 5 m i n 后 肝 门 以 翻 正 反 射 消 失 达 1 m i n 以 上 者 即 为 入 睡 , 观 察 并 静 脉 取 血 , 每 只 5 m l , 9 9 9 × g 离 心 1 0m i n , 取 血 清 记 录 翻 正 反 射 消 失 和 恢 复 时 间 。 翻 正 反 射 消 失 至 恢 2 . 0 m l 。 随 机 将 2 只 大 鼠 血 清 合 并 , 加 入 甲 醇 1 0 m l 复 时 间 为 睡 眠 时 间 。 快 速 混 匀 , 密 闭 超 声 提 取 1 0 m i n , 9 9 9 × g 离 心 1 . 9 统 计 学 分 析 1 0 m i n , 取 上 清 液 在 4 0 ? 恒 温 条 件 下 减 压 回 收 至 实 验 结 果 数 据 采 用 x ? s 表 示 , 数 据 经 S P S S 1 3 . 0 干 , 残 渣 以 甲 醇 1 m l 溶 解 , 0 . 4 5 m 滤 膜 过 滤 , 进 软 件 进 行 方 差 分 析 。 P < 0 . 0 5 认 为 具 有 统 计 学 差 异 。 μ T a b . 1 G r a d i e n t p r o g r a m o f H P L C f o r a n a l y s i s o f c o n s t i t u e n t s i n s e r u m a n d c e r e b r o s p i n a l f l u i d o f r a t s P e r c e n t a g e / % S o l v e n t 0 1 0 3 0 3 5 4 0 4 2 6 2 7 0 7 5 8 0 8 5 9 5 1 0 5 1 2 5 1 3 0 1 4 0 1 4 5 1 5 0 ( m i n ) A c e t o n i t r i l e 1 0 1 0 1 5 1 8 1 8 2 0 2 8 2 8 3 0 3 3 3 3 5 0 5 0 5 3 7 0 7 0 7 1 9 0 0 . 0 5 % P h o s p h o r i c a c i d w a t e r 9 0 9 0 8 5 8 2 8 2 8 0 7 2 7 2 7 0 6 7 6 7 5 0 5 0 4 7 3 0 3 0 2 9 1 0? 2 0 ? 中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志 2 0 1 3 年 2 月 第 2 7 卷 第 1 期 C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l , V o l 2 7 , N o 1 , F e b 2 0 1 3 2 . 2 大 鼠 脑 脊 液 中 四 逆 散 冻 干 粉 移 行 成 分 2 结 果 经 过 综 合 分 析 , 脑 脊 液 中 除 戊 巴 比 妥 钠 成 分 2 . 1 大 鼠 血 清 中 四 逆 散 冻 干 粉 移 行 成 分 外 , 并 无 四 逆 散 冻 干 粉 血 清 移 行 成 分 。 如 图 2 所 示 , H P L C 法 测 定 结 果 ( 图 1 ) 表 明 , 四 逆 散 冻 干 粉 正 常 脑 脊 液 和 给 药 组 脑 脊 液 中 的 ? 号 成 分 保 留 时 间 每 天 1 次 , 连 续 给 药 7 d 后 大 鼠 血 清 样 品 中 有 1 4 种 及 紫 外 吸 收 光 谱 一 致 为 同 一 物 质 , 表 明 是 内 源 性 物 移 行 成 分 , 经 来 源 认 定 研 究 认 为 , 其 中 2 号 峰 为 昔 奈 质 。 分 析 各 峰 面 积 比 值 ( 图 3 ) , 四 逆 散 冻 干 粉 、 芍 药 福 林 , 4 号 为 芍 药 苷 , 1 2 号 为 柴 胡 皂 苷 C , 1 4 号 为 甘 苷 、 甘 草 次 酸 、 昔 奈 福 林 和 柴 胡 皂 苷 C 均 可 以 使 脑 草 次 酸 。 脊 液 中 内 源 性 物 质 峰 面 积 增 加 , 其 中 四 逆 散 冻 干 粉 F i g . 1 A n a l y s i s o f t r a n s i t i o n a l c o m p o s i t i o n i n b l o o d s e r u m o f f r e e z e ? d r i e d S i n i p o w d e r ( S P ) . T h e r a t s w e r e i g g i v e n S P o n c e a d a y c o n s e c u t i v e l y f o r s e v e n d a y s . T h e s e r u m w a s p r e p a r e d 5 h a f t e r t h e l a s t d r u g a d m i n i s t r a t i o n . T r a n s i t i o n a l i n g r e d i e n t s o f S P i n b l o o d w e r e a n a l y z e d b y u s i n g H P L C m e t h o d . A : p e n t o b a r b i t a l ; B : m i x e d r e f e r e n c e s u b s t a n c e s ( a : p a e o n i f l o r i n ; b : n a r i n g i n ; c : h e s p e r ? i d i n ; d : m o n o p o t a s s i u m g l y c y r r h i z i n a t e ; g : g l y c y r r h e t i n i c a c i d ) ; C : n o r m a l s e r u m ; D : s e r u m i n S P g i v e n r a t s ; E : S P . F i g . 2 C o n t r a s t a n a l y s i s o n t r a n s i t i o n a l c o n s t i t u e n t s i n s e r u m a n d c e r e b r o s p i n a l f l u i d o f S P . T h e r a t s w e r e i g g i v e n t h e c o r ? r e s p o n d i n g d r u g o n c e a d a y c o n s e c u t i v e l y f o r s e v e n d a y s . T h e b l o o d a n d c e r e b r o s p i n a l f l u i d w e r e p r e p a r e d 5 h a f t e r t h e l a s t d r u g a d m i n i s t r a t i o n . T h e t r a n s i t i o n a l i n g r e d i e n t s o f S P i n b l o o d a n d c e r e b r o s p i n a l f l u i d w e r e a n a l y z e d b y u s i n g H P L C m e t h o d . 1 : p e n t o b a r b i t a l ; 2 : m i x e d r e f e r e n c e s u b s t a n c e s ( a : p a e o n i f l o r i n ; b : n a r i n g i n ; c : h e s p e r i d i n ; d : m o n o p o t a s s i u m g l y c y r r h i z i n a t e ; g : g l y c y r r h e t i n i c a c i d ) ; 3 : n o r m a l s e r u m ; 4 : s e r u m i n - 1 - 1 - 1 S P 1 2 g ? k g g i v e n r a t s ; 5 - 1 1 : c e r e b r o s p i n a l f l u i d , i n w h i c h 5 : n o r m a l ; 6 : S P 1 2 g ? k g ; 7 : p a e o n i f l o r i n 8 7 m g ? k g ; 8 : s y n e p h r i n e - 1 - 1 - 1 3 8 m g ? k g ; 9 : s a i k o s a p o n i n C 4 2 m g ? k g ; 1 0 : g l y c y r r h e t i n i c a c i d 3 9 m g ? k g ; 1 1 : p r e s c r i p t i o n o f S P s e r u m t r a n s i t i o n a l i n g r e d i e n t s ( P S T I ) - 1 ( s y n e p h r i n e ? p a e o n i f l o r i n ? s a i k o s a p o n i n C ? g l y c y r r h e t i n i c a c i d = 8 . 5 ? 1 ? 1 . 5 ? 6 . 5 ) ( m a s s r a t i o ) 2 0 6 m g ? k g . ? : e n d o g e n o u s s u b s t a n c e .中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志 2 0 1 3 年 2 月 第 2 7 卷 第 1 期 C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l , V o l 2 7 , N o 1 , F e b 2 0 1 3 ? 2 1 ? 3 讨 论 通 过 四 逆 散 冻 干 粉 血 清 中 移 行 成 分 分 析 , 四 逆 散 冻 干 粉 连 续 给 药 7d 后 血 清 样 品 中 有 1 4 种 移 行 成 分 , 经 来 源 认 定 研 究 认 为 , 其 中 2 号 成 分 为 昔 奈 福 林 , 4 号 成 分 为 芍 药 苷 , 1 2 号 成 分 为 柴 胡 皂 苷 C , 1 4 号 成 分 峰 为 甘 草 次 酸 。 经 过 综 合 分 析 , 脑 脊 液 中 除 戊 巴 比 妥 钠 成 分 外 , 并 无 血 中 移 行 成 分 的 进 入 , 正 常 脑 脊 液 和 给 药 组 脑 脊 液 中 的 ? 号 成 分 保 留 时 间 及 紫 外 吸 收 光 谱 一 致 为 同 一 物 质 , 说 明 是 内 源 性 物 质 。 从 峰 面 积 比 值 来 看 , 给 予 四 逆 散 冻 干 粉 后 脑 脊 液 中 内 源 性 物 质 峰 面 积 约 是 正 常 脑 脊 液 峰 面 积 的 1 2 . 5 倍 。 血 清 中 四 逆 散 冻 干 粉 的 移 行 成 分 昔 奈 福 林 、 芍 药 苷 、 柴 胡 皂 苷 C 和 甘 草 次 酸 均 可 以 使 脑 脊 液 中 该 内 源 性 物 质 峰 面 积 高 于 正 常 脑 脊 液 峰 面 F i g . 3 C h r o m a t o g r a m s o f c o n s t i t u e n t s i n c e r e b r o s p i ? 积 , 但 不 及 四 逆 散 冻 干 粉 整 方 作 用 , 且 血 清 移 行 成 分 配 n a l f l u i d a f t e r r a t s w e r e i g g i v e n S Pa n d i t s f o u r s e r u m 伍 组 脑 脊 液 中 内 源 性 物 质 峰 面 积 是 四 逆 散 冻 干 粉 组 的 - 1 t r a n s i t i o n a l c o m p o n e n t s . A : n o r m a l ; B : S P 1 2 g ? k g ; C : - 1 - 1 3 . 2 倍 。 综 上 所 述 , 血 清 移 行 成 分 昔 奈 福 林 、 芍 药 苷 、 柴 p a e o n i f l o r i n 8 7 m g ? k g ; D : s y n e p h r i n e 3 8 m g ? k g ; E : s a i k o ? - 1 - 1 s a p o n i n C 4 2 m g ? k g ; F : g l y c y r r h e t i n i c a c i d 3 9 m g ? k g ; G : 胡 皂 苷 C 和 甘 草 次 酸 可 能 是 四 逆 散 冻 干 粉 改 善 睡 眠 作 - 1 P S T I 2 0 6 m g ? k g . ? : e n d o g e n o u s s u b s t a n c e . 用 的 药 效 物 质 基 础 。 给 药 后 脑 脊液 中 的 成 分 含 量 明 显 高 于 正 常 脑 脊 组 是 正 常 脑 脊 液 峰 面 积 的 1 2 . 5 倍 ; 血 清 移 行 成 分 液 含 量 , 说 明 连 续 给 药 后 大 鼠 脑 脊 液 中 的 内 源 性 物 质 配 伍 组 脑 脊 液 中 内 源 性 物 质 峰 面 积 高 于 四 逆 散 冻 干 增 多 , 至 于 该 成 分 为 何 种 物 质 有 待 进 一 步 研 究 。 在 对 粉 组 , 是 四 逆 散 冻 干 粉 组 的 3 . 2 倍 。 脑 脊 液 成 分 分 析 的 研 究 中 发 现 , 四 逆 散 冻 干 粉 发 挥 改 2 . 3 四 逆 散 冻 干 粉 及 其 血 清 移 行 成 分 改 善 睡 眠 作 用 善 睡 眠 作 用 时 表 现 出 一 种 内 部 调 控 作 用 , 这 在 某 种 程 四 逆 散 冻干 粉 、 昔 奈 福 林 、 芍 药 苷 、 柴 胡 皂 苷 C 、 度 上 解 释 了 四 逆 散 冻 干 粉 在 改 善 睡 眠 作 用 方 面 所 具 甘 草 次 酸 及 其 配 伍 改善 睡 眠 作 用 的 比 较 结 果 见 表 2 。 有 的 独 特 的 药 理 作 用 , 与 化 学 合 成 药 物 相 比 具 有 较 大 与 正 常 对 照 组 比 较 , 芍 药 苷 、 甘 草 次 酸 、 昔 奈 福 林 和 [ 8 ] 的 优 势 。 另 外 , 本 研 究 结 果 表 明 , 昔 奈 福 林 、 芍 药 柴 胡 皂 苷 C 对 阈 剂 量 戊 巴 比 妥 钠 所 致 小 鼠 睡 眠 时 苷 、 柴 胡 皂 苷 C 和 甘 草 次 酸 4 种 成 分 及 其 配 伍 、 四 逆 间 无 明 显 影 响 , 四 逆 散 冻 干 粉 和 血 清 移 行 成 分 配 伍 散 冻 干 粉 整 方 均 能 使 脑 脊 液 中 内 源 性 物 质 峰 面 积 增 均 可 明 显 延 长 小 鼠 睡 眠 时 间 ( P < 0 . 0 1 ) , 血 清 移 行 高 , 血 清 移 行 成 分 配 伍 作 用 最 强 。 以 血 清 移 行 成 分 作 成 分 配 伍 组 优 于 四 逆 散 冻 干 粉 整 方 组 ( P < 0 . 0 1 ) 。 为 目 标 成 分 , 结 合 药 效 学 研 究 , 确 认 四 逆 散 冻 干 粉 改 善 睡 眠 作 用 的 主 要 药 效 物 质 基 础 , 为 四 逆 散 冻 干 粉 改 T a b . 2 E f f e c to f S P a n d P S T I o n r a t s l e e p t i m e 善 睡 眠 的 作 用 机 制 研 究 奠 定 了 基 础 。 i n d u c e d b y p e n t o b a r b i t a l s o d i u m 本 研 究 观 察 了 四 逆 散 冻 干 粉 及 其 血 清 移 行 成 分 G r o u p S l e e p t i m e / m i n 对 戊 巴 比 妥 钠 所 致 小 鼠 睡 眠 时 间 的 影 响 。 实 验 结 果 N o r m a l 1 0 0 ? 2 6 表 明 , 与 正 常 组 比 较 , 四 逆 散 冻 干 粉 可 明 显 延 长 戊 巴 - 1 ? ? S P 1 2 g ? k g 2 1 6 ? 9 5 比 妥 钠 所 致 小 鼠 睡 眠 时 间 , 血 清 移 行 成 分 配 伍 组 优 - 1 1 4 7 ? 9 3 于 四 逆 散 冻 干 粉 组 , 芍 药 苷 、 甘 草 次 酸 、 昔 奈 福 林 和 P a e o n i f l o r i n 8 7 m g ? k g - 1 柴 胡 皂 苷 C 单 用 具 有 延 长 小 鼠 睡 眠 时 间 的 趋 势 , 但 1 4 1 ? 5 2 G l y c y r r h e t i n i c a c i d 3 9 m g ? k g 无 统 计 学 意 义 。 - 1 1 3 0 ? 3 2 S y n e p h r i n e 3 8 m g ? k g 本 研 究 通 过 对 四 逆 散 冻 干 粉 血 中 移 行 成 分 分 析 、 - 1 1 4 0 ? 7 3 S a i k o s a p o n i n C 4 2 m g ? k g 脑 脊 液 中 移 行 成 分 分 析 及 四 逆 散 冻 干 粉 对 戊 巴 比 妥 - 1 ? ? # # P S T I 2 0 6 m g ? k g 2 3 5 ? 1 3 7 钠 所 致 小 鼠 睡 眠 时 间 影 响 的 药 效 研 究 , 初 步 确 认 四 逆 ? ? S e e F i g . 2 f o r t h e r a t t r e a t m e n t . x ? s , n = 2 0 . P < 0 . 0 1 , 散 冻 干 粉 的 主 要 药 效 物 质 基 础 可 能 是 其 血 清 中 移 行 # # c o m p a r e d w i t h n o r m a l g r o u p ; P < 0 . 0 1 , c o m p a r e d w i t h S P g r o u p . 成 分 昔 奈 福 林 、 芍 药 苷 、 柴 胡 皂 苷 C 及 甘 草 次 酸 。