贵州都匀牛带绦虫实验感染家猪研究

贵州都匀牛带绦虫实验感染家猪研究 贵州都匀牛带绦虫实验感染家猪研究 第13卷第2期 2006年6月 寄生虫与医学昆虫 ActaParasito1.Med.Entomo1.Sin. Vo1.13.No.2 Jun.,2006 贵州都匀牛带绦虫实验感染家猪研究* 朱武军"令狐艳包怀恩"李建华 (贵阳医学院寄生虫学教研室,贵州贵阳550004) 摘要通过都匀牛带绦虫感染家猪,了解贵州省都匀是否存在牛带绦虫亚洲亚种.对都匀地区绦虫病患者 进行驱虫,从孕节分离虫卵感染家猪,收集囊尾蚴并观察其特征.都匀牛带绦虫可以在家猪体内发育为囊 尾蚴,感染率为87.5%.囊尾蚴回收率为0.266%,囊尾蚴只分布在肝脏,并以肝实质为多见.未成熟囊尾 蚴最早在感染后10天发现.成熟囊尾蚴大小为(23624-621)tan×(16354-489)tan,外壁上有小的疣状 形成物,头节上可见吸盘,顶突和两圈逗点样结构,未发现有明显小钩.家猪可以作为贵州都匀牛带绦虫 的实验中间宿主,该地区可能存在牛带绦虫亚洲亚种局部流行. 关键词牛带绦虫;中间宿主;发育;形态 近30年来人们在台湾,韩国,印度尼西亚 等东亚地区及东南亚诸国的一些山区及沿海岛屿 发现一种新的带绦虫,其成虫外形近似于牛带绦 虫;其囊尾蚴却似猪带绦虫,头节上具有发育不 良的小钩,人因生吃或食未熟的猪内脏而被感 染.有学者进行rDNA研究(Zarlengaeta1., 1991)及细胞遗传学研究(BowlesandMcManus, 1994)结果显示该绦虫和传统牛带绦虫在进化上 有着近缘关系.目前,人们从流行病学调查,形 态学,动物及人体实验,遗传学等进行了深入研 究,大多数学者认为该绦虫与牛带绦虫相似,应 该属于牛带绦虫的一个亚种,称为牛带绦虫亚洲 亚种(Taeniasaginataasiatica).我国大陆首次报 道了云南省的病例(张莉莉等,1999).多年来, 人们一直认为贵州都匀地区流行牛带绦虫病.但 最近的流行病学调查表明,该地区居民很少吃牛 肉,但有生吃猪和野生动物内脏的习惯,因而该 绦虫的流行模式与传统的牛带绦虫有所不同,其 中间宿主一直不清楚(陈艳等,2002).也有人 用分子生物学方法对该地区牛带绦虫的细胞色素 氧化酶I(CO1)基因进行了序列测定,发现贵 州都匀虫种的CO1基因序列与台湾牛带绦虫亚洲 亚种已知序列完全一致(王正蓉和包怀恩, 2003).本实验试图探索该绦虫囊尾蚴在家猪体 收稿Et期:2005.1O-O9 *基金项目:国家自然科学基金资助项目(30260102) **通讯作者:E-nlail:bhe@gmc.edu.cn ***现工作单位:贵阳市第六人民医院 内的发育情况和形态特征,为贵州都匀存在牛带 绦虫亚洲亚种提供形态学证据. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1标本来源:在贵州都匀牛带绦虫流行地 区的绦虫感染者体内以槟榔.南瓜子法驱出虫体, 取虫体末端6—10个孕节分离虫卵备用. 1.1.2实验动物:三元杂交猪(Duroc.Yorkshire. LandraceDYL)10头(图版I,封3),日龄20 天,体健,未进生食.其中实验组8头,对照组 2头. 1.2方法 1.2.1感染方法:实验组每头小猪经胃管灌入 1200oo+虫卵/mL悬液1mL,对照组不感染. 整个实验过程中严格圈养,防止自然感染. 1.2.2囊尾蚴的观察:实验小猪分别于感染后4 — 80天宰杀,仔细解剖,检查肝脏以及心,肺 组织和全身肌肉组织有无囊尾蚴寄生以及囊尾蚴 的分布,大小及成熟情况.同时对成熟囊尾蚴进 行胆汁孵化,在显微镜下观察囊尾蚴的孵化情 况,将孵出的囊尾蚴压片后镜下观察,拍照. ? 81? 寄生虫与医学昆虫第13卷第2期 2结果 2.1都匀牛带绦虫 成虫呈带状,淡黄色,长为0.61m,4.19m (平均2.68m),节片数为232,828(平均为 546),头节呈方形,有4个杯状吸盘,未见顶突 和小钩,成节卵黄腺分2叶,孕节子宫每侧分支 为l7,28支,侧枝有较多的再分支.(图版I一2 , 3). 2.2小猪对牛带绦虫的易感性,囊尾蚴的回收 率及分布 2头对照小猪30,60天宰杀未发现有囊尾 蚴寄生.8头实验小猪在感染后4,80天宰杀, 除感染4天的实验小猪未见有囊尾蚴寄生外,其 余感染时段的实验小猪全部发现有囊尾蚴寄生, 感染率为87.5%(7/8).共回收囊尾蚴2557个, 平均回收率为0.266%,全部囊尾蚴均分布在肝 脏,其中表面974个,占38.1%,肝实质1583 个,占61.9%,实质多于表面.肌肉及其他组 织中未见(表1). 表1都匀牛带绦虫感染家猪后囊尾蚴的回收率及分布 Tab.1CysticercuerecoveryanddistributioninDYL pigstoTaeniasaginata(Duyunstrah1) bydaysafterinfection. 4 10 20 40 50 60 70 8O 合计T0tal 0(0") 531(36.1) 79(39.5) 55(47.8) 3O(44.1) 75(38.5) 56(43.8) 148(387) 974(38.1) 0(0) 938(639) 121(60.5) 60(522) 38(55.9) 120(61.5) 72(562) 234(6l3) 1583(619) 注:*回收率:回收囊尾蚴数,感染虫卵量×100%. **该括号中数字表示囊尾蚴在肝脏实质和表面分布的百分 比. ***表示平均回收率. Note:*Therecoveryrateisthenumberofrecoverycysticerei/infected eggs×100%. **Thefigureinthebracketisthepercentagesofcysticerci distributioninparenthymaandOUsurfaceofthelivers. ***Meanrecoveryrate. ? 82? 2.3囊尾蚴的发育 感染后4天剖检,组织内肉眼观察不到囊尾 蚴.感染后l0天,肉眼即可看到在肝脏有弥漫 性分布的粟粒状囊尾蚴,40天后才发现有成熟 囊尾蚴,随着感染时间的延长,成熟囊尾蚴的比 例逐渐增多,50天成熟囊尾蚴所占比例最高达 58.4%,以后逐渐下降,感染后70天,68.8% 囊尾蚴退化或钙化.在感染后l0,80天,同一 肝脏组织均发现有退化或钙化的囊尾蚴存在,结 果见表2.囊尾蚴的大小与感染时间正相关,但 当囊尾蚴退化或钙化后又逐渐缩小.未成熟囊尾 蚴中心为浆液状物质;成熟囊尾蚴囊壁较薄,呈 半透明膜状(图版I一4);退化,钙化囊尾蚴囊壁 明显增厚,囊内容物呈条索状或豆渣样.未成熟 期,成熟期和退化/钙化期的大小分别为(747? 360),um×(565?273)m,(2363?621),um× (1635-I-489)ym,(1434?421)ym×(982? 389),um(图版I一5,7). 表2家猪感染都匀牛带绦虫后囊尾蚴的发育 Tab.2DevelopmentofcysticerciofTaeniasaginata (Duyunstrain)intheliversofDYL pigsbydayafterinfection. 感染 天数 Dsof lnfection 回收囊囊尾蚴发育情况 尾蝴教Developmentofcysticercus Noofcysteri未成熟NO(%)成熟NO.(%)退化,钙化NO.(%) .VeredImmatureMTeDege n.fcalc. 2.4囊尾蚴的特征 成熟囊尾蚴呈圆形或椭圆形,囊体透明,囊 内充满液体,肉眼隔囊壁即可见头节为白色小 点,囊尾蚴有阿米巴样运动.经胆汁孵化后,可 见囊尾蚴头节和囊泡构成,活体观察可见头节摆 动明显,4个杯状吸盘和顶突伸缩活跃,活动自 如,组织学切片也显示囊尾蚴有吸盘和顶突(图 版I一8,l0).囊尾蚴外囊壁表面有小的疣状形 成物,(图版I—II).将孵出的囊尾蚴压片,发 嘟 O?OO0O0OO o卿瑚醯跚 l2 朱武军等:贵州都匀牛带绦虫实验感染家猪研究 现囊尾蚴有4个杯状吸盘,未见到明显的小钩结 构,但在4个吸盘之间或之外有两圈逗点样结 构,其外圈较小,但数量较多,呈圆点状;内圈 较大,但数量较少,呈条索状(图版I一12). 3讨论 多年来人们一直认为寄生于人体的带绦虫只 有2种,即猪带绦虫和牛带绦虫,人是其唯一的 终宿主,其中间宿主分别为猪和牛.但近年来, 在东亚和东南亚诸国的一些山区和远海岛屿发现 一 种新的绦虫,生活史发育过程部分与牛带绦虫 相似,部分与猪带绦虫相似,但在形态学和虫体 发育上明显有别于猪带绦虫和牛带绦虫.过去人 们认为贵州都匀地区流行"牛带绦虫",但流行 病学调查表明,贵州都匀是一个少数民族聚居 区.又是一个农业区,牛主要用于耕地,当地居 民很少吃牛肉,但家猪饲养却非常普偏,当地居 民又有生吃猪和野生动物内脏的的习惯,这与传 统牛带绦虫的流行模式明显不同.染色体核型分 析表明,都匀"牛带绦虫"染色体核型与传统牛 带绦虫不同(戎聚全等,1991).分子生物学研 究表明贵州都匀"牛带绦虫"为牛带绦虫亚洲亚 种(王正容和包怀恩,2003).用都匀"带绦虫" 感染小牛,发现囊尾蚴只分布在肝脏,肌肉及其 他内脏组织未见,且囊尾蚴数较少,钙化早(莫 兴泽等,2005),其发育和分布与传统的牛带绦 虫明显不同.从而对当地流行的"牛带绦虫"及 其中间宿主提出质疑,认为家猪可能是该地区 "牛带绦虫"的中间宿主. 我们的研究结果表明,家猪可以作为都匀 "牛带绦虫"的实验中间宿主.在感染的早期 (1O天)在猪肝脏上发现大量死亡或钙化囊尾 蚴.有研究认为这可能是大量六钩蚴通过肠粘膜 随血液循环到达寄生部位的过程中,产生了大量 循环抗原,宿主机体组织可对此产生强烈的免疫 反应,从而杀死大量的六钩蚴,使部分六钩蚴未 能发育成熟就发生死亡或钙化(Faneta1., 1989).另外同一宿主同一部位可出现不同发育 阶段的囊尾蚴,这表明虫体同期感染但不同期发 育,即虫体发育存在滞育现象.可能是大量虫卵 产生的循环抗原,机体组织产生强大的免疫反应 使部分六钩蚴处于相对不发育状态.当宿主内环 境发生改变时,休眠状态的六钩蚴可继续发育成 囊尾蚴,因而大量感染虫卵可能会导致囊尾蚴发 育延迟.该绦虫囊尾蚴在家猪体内的成熟期为 40天左右,而且囊尾蚴只分布在肝脏,实质多 于表面,与文献报道的牛带绦虫亚洲亚种囊尾蚴 在猪体内的发育过程基本一致(Faneta1., 1995). 最近研究表明,牛带绦虫亚洲亚种囊尾蚴头 节上具有顶突和两圈发育不良的小钩,但不同地 理株囊尾蚴小钩的数量和形态存在差异,这可能 与不同的地理株有关(Fan,1988;Faneta1., 1990a;1990b).本实验发现从家猪体内获得的 囊尾蚴外壁上有小的疣状突起,头节上有4个吸 盘和顶突,但未见有退化的小钩,仅在头节上发 现有两圈逗点样结构,表明都匀牛带绦虫囊尾蚴 形态特征与范秉真等报道的牛带绦虫亚洲亚种也 不完全相同.结合流行病学调查,动物实验,形 态学和分子生物学研究,我们认为贵州都匀"牛 带绦虫"可能是牛带绦虫亚洲亚种的一个地理 株,或正好是传统牛带绦虫和牛带绦虫亚洲亚种 的过渡类型. 致谢:感谢贵阳医学院寄生虫学教研室牟容老 师,郎书源老师及其他老师的大力支持. 参考文献(Referenc~) 王正容,包怀恩.2003.用mtCOI技术测定云南和贵州四地的牛 带绦虫.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,21(1):2023. 戎聚全,杨承华,熊克州,等.1991.牛肉绦虫染色体核型的 研究.中国寄生虫病防治杂志,4(1):40,41. 陈艳,郎书源,裘学丽,等.2002.贵州省都匀地区亚洲牛带 绦虫病的流行病学调查.热带医学杂志,2(4):416417. 张莉莉,陶洪,张炳翔,等.1999.亚洲无钩绦虫感染者在云 南首次发现.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,17(2):95 , 96. 莫兴泽,包怀恩,戎聚全,等.2005.都匀亚洲带绦虫与从江 带绦虫实验感染牛和猪的比较研究.中国寄生虫病防治杂 志,18(2):120—123. Bowles,J.andD.P.McManus1994Geneticcharacterizeation0fthe AsianTaenia,anewlydeseryibedtaeniidcestndeofhuman.Am. J.Trop.Med.Hyg.,50(1):33,44. Fan,P.C.1988TheKoreanTaeniaandTaeniasis.Yonsei.Rep. Trop.Med.,19:19,24. Fan,P.C.,W.C.Chung,C.Y."neta1.1989Experimental studiesonKoteaTaenia(Chejustrain)infectionindomestic animals.Ann.Tro.Med.Parasito1., 83:395403. Fan,P.C.,M.L.Kosman,E.Kosineta1.1990aIndonesia TaeniaandTaeniasis.Yonsei.Rep.Trop.Med..2l:33— 37. Fan,P.C.,W.C.Chung,C.Y."neta1.1990bThepigas - 83? 寄生虫与医学昆虫第l3卷第2期 anintermediatehostforTaiwanTaen/ainfection.Helmiml~logy, 64:223—231. Fan,P.C.,C.Y.Un,C.C.Cheneg.1995Morphological descriptionofTaenia88gin8taasiatica(Cyelophyllidea:Taeniidae) fromnlaninAsia.J.Helmintho1.,69:299,303. Zarlenga,D.S.,D.P.McManus,J.H.Crosseta/.1991 CharacterizationanddetectionofanewdescribedAsiantaeniid岫iIlg clonedribosomalDNAfragmentsandsequenceamplifyieationby polymerscchainreaction.Exp.Parasito1.,72:174. MENrrALS删OFTAENIAGI?A(DUYUNSTRA, GUIZHOU)INFECTIONINDOMESTICPIGS ZHUWu..JunLINGHu..YanBAOHuai..EnLIJian..Hua (DepartmentofP伽.GuiyangMedicalCollege,GuizhouGuiyang550004) AbstractToconfirmwhethertherewasTaeniasaginataasiaticainDuyun,Guihzhouprovince,adultwormofT.saginata asiaticawerecollectedfromthepatientsinDuyun,andthentheeggswereharvestedfromtheadultwormsandattemptedtoinfect laboratorydomesticpigstoobservetheirinfectivityandmorphologicalcharacters.Taeniasq~taobtainedintheregionCan developintocysticerciinthepigs.einfectionratesofthepigsWas87.5%.themeanrecoveryratesofcysticemswere 0.266%.AUcysticerciwerefoundonlyinthelivers,moreintheparenchymathanonthesurface.Immaturecysticerciwerefirst observedonday10afterinfection.thesizeofmaturecysticerciwas2362?621ttm× 1635.4-489pm.Moreover.wart-like formationsonthebladdersurface,arestellumandtworoWSdotstructurewerefoundonthescolexofsysticerci,buthookletwere notfound.DomesticpigCanbeasthelaboratoryintermediatehostofTaeniasaginata(Duyunstrain).Theremaybelocation prevalenceofTaen/as口n8as/at/cainGuizhouprovince. KeywordsTaen/asaginata;Intermediatehost;Development;Morphological ? 84? 朱武军等:贵州都匀牛带绦虫实验感染家猪研究图版l ZHUWu一.1unel? t:ExperimenlalstadiesofTaeniasaginata(Duyunstrain.Guizhou)infectionindlomesticpigs Platel ' _ Il1 . ' 图版l1~12实验中间宿主,或虫特征,感染后的肝脏,囊尾蝴发育和或熟囊尾蚴特征 Plate1卜12Experimentalintermediatehost,the~haracterislie.~ofadultworn~.infectedliver.develo pmentand morphologicalpatterninthematurecystcerci. h骑rt问宿JY:I)YL堵c20无):2:部匀牛带绦虫jl霓虫的央节『s由吸盘.酸性flAx40):3:粕匀牛昔绦虫成虫的孕佰l擞醢复红 染包):4:卧脏表面乳阿色的_曩尾坳l赌染压50无)5:来成熟囊尾蝴l感所10又)6:成熟摧尾蜘l感懿50五l,7钙化建蝴{感 染后70灭1=8:且口汁孵化的囊尾蝴9:胆汁孵化囊尾蝴的头{为斑.R对丁?"~.y320110:战熟盛尾蚴片(为哑盘I{灯瓜蜜1 (14E340):lhl鬟尾蚴囊疃为谴校彤战物1oo';】2:成熟囊磋蛹头片为啦盘,ID/OD内外棚瞽逗蕾样结抽1(31001 I.Expenmenla]intemmdlate1pf20daysold):2:A0f‰-?s~natalDuvull~lrain). - kijfu~'hinlain×4013: AgmvidI)mg10【lT~nian*'~a{Duyurls1rain)Icarb~l^Jrhsinstain~;4:…u^I[ny一inl—milk)r(一?tk:erei删th…rl~. ce0ftllP li~erofaDYLpig(50daysnldklm~atureeysfieerc[(10dd【i1:6~atttreym…-1(50dd1:7.Cal?r,7O(jalIh 8:Tl!}sLiol~Ix:iewlgjnatedwlllIbile:9T1-olexofcysticer~iwithbile~~aginatedIs=sucker R…【eIlum)(3201:J0:ciill…【… ti~ewiiS~uekerR=mstellum)lil[Eslain340);l1:Bladder1)r4;:'siicetei…n— likelbrmations)13103):1-.2:nlllex?ficerci presaedHIhgI?slifles(S=suekeriD/OD=irlner/olfl;erdoil3oo)