中药肝复康治疗大鼠肝纤维化的实验研究

中药肝复康治疗大鼠肝纤维化的实验研究 大连医科大学 博士学位论文中药肝复康治疗大鼠肝纤维化的实验研究 姓名:车颖 申请学位级别:博士 专业:病理学与病理生理学 指导教师:贾玉杰 20040601 中药肝复康治疗大鼠肝纤维化的实验研究 博士研究生:车颖 指导教师:贾玉杰 教授 专业名称:病理学与病理生理学 摘 要 背景和目的 肝纤维化特别是肝硬化的发病奉和病死率都非常高。因此，发展适用于肝纤维化的抗纤维化 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 是非常迫切的，一肝纤维化的研究已成了世界医学攻关中的一个热点课题。肝纤维化及肝硬化主要是慢性肝病造成的，故肝纤维化的逆转是一个常见的世界性难题。随着有效的抗纤维化治疗的出现，病理上证实的肝纤维化改善及肝硬化降解的报道逐渐增多，临床上应用的抗肝纤维化西药如秋水仙碱等，多效果不明显，副作用大，目前尚无疗效满意的抗肝纤维化的西药。以往大量实验 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，中药具有保护肝细胞，改善肝功能，抑制肝星状细胞的活化增殖，抑制转化生长因子一,((,,,,,，)的分泌及其活性，促进细胞外基质(,,,)的降解等作用，在促进肝纤维化逆转方面显示了其较大的优势，倍受国内外专家、学者关注。本研究采用雌性,,,,,,,—,,,,,,(,,)大鼠，皮下注射四氯化碳诱发肝纤维化模型，分别以中药肝复康胶囊(高、中、低三种剂量)、秋水仙碱及肝脾康干预。光镜观察肝小叶结构、肝细胞变性及炎性浸润情况;电镜观察肝细胞超微结构改变;偏振光显微镜观察基质胶原纤维沉积情况及胶原成分 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ;血清检测酶学及肝脏功能以评估肝复康疗效。免疫组化检测细胞因子,,,,,(及层粘连蛋白(,,)的表达;,,—,,,测定基质金属蛋白酶(明胶酶,,,删,一,)和金属蛋白酶组织抑制剂(,，,,一,)的基因表达来探讨肝复康抗肝纤维化部分可能的机制。同时采用超声组织定征技术对正常及不同程度纤维化大鼠肝脏的背向散射积分进行测定，旨在探讨超声组织定征技术在肝纤维化中的应用价值。 方法 大连医科大学动物中心提供雌性,,大鼠,,只，体重,,,,一,,,克，室温,,?，自然昼夜，自由饮水摄食。利用四氯化碳皮下注射法(，,,,,,。，,,,,,,，每周两次，共,,周)制各肝纤维化模型，实验动物随机分为,组:正常组、模型组、肝复康高剂量组、中剂量组、低剂量组、秋水仙碱组、肝脾康组。药物治疗从造模,,天后开始，正常对照组与上述各组每日经口分别灌服生理盐水、生理盐水、高剂量肝复康(,(,,,,,,,)、中剂量肝复康(,(,,,,,,,,)、低剂量肝复康 ?,‘ (,(,,,,,,,,,)、秋水仙碱(,,,,,,)、肝牌康(,(,,,,,,)，药物的剂量根据体表面积的 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 进行换算，每干克体重用量为正常成人用量的,(,,倍。按,,,,,,,体重灌服，治疗时间为,,天。在最后,次给药,,小时后，经乙醚麻醉内眦采血检测各项指标，并取肝左叶作为检测标本。赖氏法测定血清谷丙转氨酶(,,,)及谷草转氨酶(,,,)活性，采用溴甲酚绿比色法和考马斯亮蓝比色法测定血清白蛋白、总蛋白及自球蛋白比，比色法测定血清羟脯氨酸(,,,)及血清唾液酸(,,、，消化法测定肝组织羟脯氨酸，免疫组化方法检测肝组织,,、,,,—,。表达，光镜观察肝小叶结构、肝细胞变性及炎性浸润情况，电镜观察肝细胞超微结构改变，苦味酸一天狼猩红染色在偏振光显微镜观察基质胶原纤维沉积情况及，,,,,—,,,图像分析系统分析，、，，，型胶原面积及其比值情况，,,,,,,测定基质金属蛋自酶 (,,,一,)和金属蛋白酶抑制剂(,，,,一,)的基因表达。采用,,,,,,型彩超仪，,，超宽变频相控阵探头，探头频率,—,姐,进行大鼠肝脏的背向散射积分定量 分析。 数据以平均值? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差表示，用,,,,,,(,软件进行单因素方差分析、单因素相关分析及成组设计秩和检验(等级资料)，以,,,(,,为显著性检验界限。 结果 一(肝脏组织形态学变化: ,(肉眼观察正常组大鼠肝脏质地柔软，表面光滑。模型组大鼠肝脏质地坚韧，表面粗糙，颜色晦暗，有些可见颗粒状的小结节。药物治疗组大鼠肝表砥较模型组光滑，质地较柔软。 ,(光镜观察正常组大鼠肝小叶结构完整清晰，肝板以中央静脉为中心呈条索状向四周放射状排列，板间有不规则肝窦，仅于汇管区和中央静脉有少许胶原纤维存在。模型组多数正常小叶结构破坏或消失，由汇管区和中央静脉伸出粗大胶原纤维条索分割、包绕肝小叶，肝细胞索排列紊乱，肝细胞浊肿明显，脂肪变性广泛，部分有坏死。纤维隔内有大量单核细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及成纤维细胞等细胞浸润。与模型组比较，各药物治疗组肝小叶结构破坏明显减轻，肝脏胶原纤维增生亦明显减轻，纤维条索疏松变窄。肝细胞水肿好转，变性情况明显改善，炎细胞浸润减少。其中肝复康高、中剂量组及肝脾康组肝脏结构改善较为明显。 ,(电镜观察正常肝细胞呈多面体，细胞核为圆形或椭圆形，核膜清晰。胞浆内有散布的核蛋白体和有规律分布的内质网，线粒体呈圆形或椭圆形。模型组大鼠肝细胞明显萎缩，细胞核固缩，内质网扩张呈太囊泡，核蛋白体有明显脱落现象，糖原减少甚或消失，线粒体肿胀呈球形，邻近纤维隔的肝细胞表面微绒毛减少或消失，纤维隔多宽大且致密，边缘平直，狄氏间隙明显扩张，内可见多量 。,‘的胶原纤维及成纤维细胞增生。肝复康治疗组肝细胞及细胞核略有固缩，内质网明显减少，线粒体稍有肿胀，糖原丰富，纤维隔周围肝细胞微绒毛比较丰富并深入到纤维隔中，纤维隔细而不连续，狄氏间隙内仅见少量胶原束。 ,(偏振光显微镜下观察，、，，，型胶原肝组织经苦味酸一天狼猩红染色后偏振光镜下观察，在暗视野下，型胶原呈桔红色，有较强的双折光，纤维直径越粗，红色越明亮。，，，型胶原呈绿色，沿肝窦呈纤细的网格状分布。正常组大鼠肝组织，、，?型胶原均分布于汇管区的结缔组织及血管壁、胆管壁。模型组，、，，,型胶原增生明显，汇管区扩大，在肝实质内可见粗大间隔，以红色的，型胶原为主，肝复康治疗组可见，、?，型胶原由汇管区向肝实质有少量纤维呈细丝状，放散延伸，红色的，型胶原较模型组减少，以绿色的,，型胶原为主。秋水仙碱组及肝脾康组可见，、，，，型胶原由汇管区向肝实质延伸，间隔仍较粗，以红色为主。 ,(，,,,,—,,,计算机图像分析软件分析，、，,型胶原的面积 模型组，型与，,型胶原丽积较正常组显著增加(,,,(,,)，药物治疗组，、，，,型胶原面积降低，明显低于模型组(,,,(,,)。肝复康组尤其中剂量组明显减低，优于秋水仙碱及肝脾康组(,,,(,,)，其中肝复康治疗组，型胶原面积降低明显，中剂量组，型胶原的降低优于肝脾康组(,,,(,,)及秋水仙碱组(,,,(,,)。肝复康三个剂量组以中剂量组，型胶原的降低最明显，优于低剂量组(,,,(,,)，和高剂量组相比较无明显差异。肝复康三个剂量组之间，，，型胶原面积无显著差异。，型与?型胶原面积及，、，?胶原面积比与肝组织,,,含量有显著正相关(,(,(,,)，相关系数分别为,(,,，,(,,，,(,,。 二(肝功能、血清唾液酸、血清及肝组织羟脯氨酸的变化: ,(血清,,,及,,,的交化与正常组比较，模型组血清,,,及,,,的活性明显升高(,,,(,,)。与模型组比较，肝复康治疗后可明显减少,,,及,,,的释放 (,,,(,,)，血清,,,,、,,,的降低以肝复康高、中 剂量组最明显，可达到正常水平，优于秋水仙碱组(,,,(,,)。肝复康各剂量组之间比较，高荆量组与中剂量组优于低剂量组(,,,(,,)。肝脾康组的降低转氨酶的作用也较明显，优于秋水仙碱组。 ,(血清白蛋白、球蛋白及白,球蛋白比的变化与正常组比较，模型组血清白蛋白含量明显降低，球蛋白含量升高，白蛋白与球蛋白的比值减小(,(,(,,)。与模型组比较，肝复康高、中剂量及肝脾康治疗组可升高血清白蛋白，降低血清球蛋白，升高白球蛋白比例(,,,(,,)。以肝复康中、高剂量组效果最好，与正常组无显著差异(,,,(,,)，优于秋水仙碱组(,,,(,,)。 ,(血清,,的变化模型组血清,,含量明显高于正常对照组(,,,(,,)，与模型组相比较，肝复康中剂量治疗组可使血清,,降低(,,,(,,)，与正常组比较 ?,’无显著差异(,,,(,,)。肝复康中剂量组血清,,的水平明显低于肝脾康组及秋水仙碱组(,,,(,,)。肝复康三个剂量组之间比较，中剂量组血清,,水平低于高和低剂量组(,,,(,,)。血清,,与肝组织,,,含量相关性分析示两者有显著的正相关，相关系数为,(,,。 ,(血清,,,的变化模型组血清,,,的含量较正常组明显升高(,,,(,,)，药物治疗后血清,,,降低，其中肝复康高、中剂量组血清,,,的含量达到正常水平。肝复康中剂量组血清,,,的含量低于肝脾康组(,,,(,,)和秋水仙碱组 (,,,，,,)。肝复康三个剂量组比较，高、中剂量组血清,,,含量明显低于低剂量组(,,,(,,)。血清,,,水平与肝组织,,,呈显著正相关，,,,(,,。 ,(肝组织,,,含量的变化 模型组肝组织,,,含量较正常组明显升高 (,,,(,,)。与模型组比较，肝复康高、中剂量组、肝脾康组肝组织,,,的含量降低(,,,(,,)，肝复康中剂量组降低肝组织,,,的作用优于肝脾康组(,,,(,,)及秋水仙碱组(,,,(,,)。肝复康三个剂量组比较，高、中剂量组肝组织,,,含量明显低于低剂量组(,,,(,,)。 三(,,,—,。与睬的表达: ,，肝组织,,表达正常肝组织,,在中央静脉及汇管区的血管壁与胆管壁呈阳性染色，模型组除分布于上述区域外，,,阳性染色还呈条索状分布在纤维间隔区域，在肝窦周围的狄氏腔，可见细丝状不连续阳性染色。药物治疗组,,阳性染色的纤维条索变细，肝窦周围的狄氏腔染色明显减少。图像分析测定,,阳性染色区域的面积，模型组?面积较正常组明显增加(,(,(,,)，药物治疗组可减少,,阳性染色区域的面积(,,,(,,)，肝复康中剂量组优于秋水仙碱组(,,,(,,)及肝脾康组(,,,(,,)。肝复康三个剂量组比较，高、中剂量组优于低剂量组(,(,(,,)。肝组织,,染色面积与肝组织,,,氏灾 喙兀 颍剑希 叮础?,(,,,一?，表达正常肝组织未见,,,,,，阳性染色的细胞，模型组在汇管区及纤维间隔周围可见阳性染色的细胞，形态大多为梭形或不规则形，以巨噬细胞、成纤维细胞、肝星状细胞居多，每,,,倍视野阳性染色数平均,,个。各药物治疗组,,,一,,，阳性染色的细胞数目均较模型组减少(,,,(,,)，其中肝复康高剂量组降低,,,一,，阳性染色细胞数的作用最明显，优于肝膊康及秋水仙碱组(,,,(,,)，肝复康中剂量组优于秋水仙碱组(,,,(,,)。肝复康三个剂量组比较，高、中剂量组优于低剂量组(,,,(,,)。肝组织,,,—,:阳性细胞数与肝组织,,,含量有显著正相关，,,,(,,( 四(肝组织中,,,一,和,，,,—,表达 ,(肝组织中,，,,—,表达正常对照组的表达水平非常弱，在基 因电泳图上条带亮度极弱。模型组表达明显增强，在基因电泳图上条带亮度显著增强(, ?正?,,(,,)，肝复康治疗组表达较模型组明显减弱(,,,(,,)。 ,(肝组织中涮,一,表达正常对照组可见一定的表达，模型组表达较正常组有所增强，肝复康治疗组表达较模型组有所减弱(,,,(,,)，与正常组表达无差异(,,,(,,)。 五(大鼠肝脏背向散射积分平均值随肝纤维化程度由轻至重显示逐渐增高的趋势;正常组与肝纤维化各组闯均有显著差异(,,,(,,);,。级与,揍,、,一级闯及,，级与,;级间有显著差异(,,,(,,)。 结论 ，(四氯化碳造模后大鼠呈现较重程度的肝纤维化，肝功能严重受损。同时其他检测显示肝组织,,,,,。、,,及,,,一,和,，,,—,表达增强。 ,(肝复康干预后，肝组织形态学、肝功能及血清指标均说明肝复康对实验性肝纤维化有明确的治疗作用，其效果明显优于传统西药秋水仙碱和中药肝脾康。中剂量组对肝纤维化的治疗作用较为明显，是较为合理的用药剂量。 ,(肝复康抗肝纤维化机制可能为:保护肝细胞，减轻肝细胞损伤，从而减少肝纤维化发生发展的始动因素;改善肝功能;抑制,,,,,。分泌:减轻肝窦毛细血管化，改善肝脏的微循环;下调删,一,及,，,,一,基因表达，加强细胞外基质的降解。 ,，血清,,,及,,可以反映肝纤维化的严重程度，能否作为肝纤维化的诊断指标，还需进一步研究。 ,(背向散射积分随纤维化程度加重而增加，表明超声组织定征技术在肝纤维化中有重要诊断价值。关键词:肝纤维化肝复康,,,,,。 ,,,一, ,， ? ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,背向散射积分 ?, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,:,,, ,,,, ,,,,,,,,,,:,,, ,,,,, ,,,;,,,,,:,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,;, ,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,: ,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,; ,,,,,,,,，,,,,;,,,,, ,, ;,,,,,,,,，,,, ？,,,,,,曲(,,，,,’, ,,,, 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