RP-HPLC测定氢溴酸右美沙芬颗粒中的有关物质.doc
RP-HPLC测定氢溴酸右美沙芬颗粒中的有关物质
【摘要】 目的 建立RP-HPLC测定氢溴酸右美沙芬颗粒的有关物质。方法 采用Shim-pack VP-ODS C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm);乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸和三乙胺各5ml加水至1000ml，混匀)(35?65)为流动相;流速为0.8ml/min，检测波长为278nm。结果 氢溴酸右美沙芬与杂质能够有效分离;最低检测限为9ng。结论 本法简便、快捷、准确，适用于氢溴酸右美沙芬颗粒的有关物质测定。
【关键词】 氢溴酸右美沙芬颗粒;RP-HPLC;药物监测
氢溴酸右美沙芬(DH)为非麻醉性药物，是中枢性镇咳药，可用于以干咳或痉挛性咳嗽为主要症状的急性上呼吸道感染，急性或慢性支气管炎等呼吸系统疾病,1,2,。原质量
标准
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,3,尚未制定检查有关物质的内容。本研究采用自身对照法测定氢溴酸右美沙芬的有关物质，方法简单、可行。且方法中的色谱条件能达到较好分离主成分及其降解产物，可用于考察氢溴酸右美沙芬颗粒生产、贮藏过程中的杂质变化情况。
1 仪器与试药
1.1 仪器
SHIMADZU LC-20A高效液相色谱仪(配备LC-Solution工作站)，Shim-pack VP-ODS C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)。
1.2 试药
氢溴酸右美沙芬对照品(中国药品生物检定所，批号100201-199901，含量95.0%)，氢溴酸右美沙芬颗粒(广东和平制药厂提供，批号050613， 规格:7.5 mg)。
1.3 试剂
乙腈为色谱纯，磷酸、三乙胺等均为
分析
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纯。
2 方法与结果,3,4,
2.1 色谱条件与系统适用性试验 Shim-pack VP-ODS C18
色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，以乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸和三乙胺各5ml加水至1000ml，混匀)(35?65)为流动相，流速为0.8ml/min，检测波长为278nm。理论塔板数按氢溴酸右美沙芬计算应不低于1500，氢溴酸右美沙芬峰与相邻主杂质峰的分离度应不小于1.5。
2.2 测定方法
精密称取本品细粉(相当于氢溴酸右美沙芬25mg)，置50ml量瓶中，加水适量振摇使溶解，加水至刻度，摇匀，滤过;精密量
取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照溶液;量取对照液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成分色谱峰高约为满量程的25%，再量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。如有杂质峰，与对照溶液主峰面积比较，各杂质峰面积(除溶剂峰外)之和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%)。2.3 样品的破坏试验
2.3.1 酸破坏
取本品适量，加1mol/L盐酸溶液15ml振摇使溶解，于90?水浴3h，放冷，用1mol/L氢氧化钠溶液调节至中性，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=3.9，分离良好。见图1。
2.3.2 碱破坏
取本品适量，加1mol/L氢氧化钠溶液15ml振摇使溶解，于90?水浴3h，放冷，用1mol/L盐酸溶液调节至中性，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=12.6，分离良好。见图2。
2.3.3 氧化破坏
取本品适量，加30%的过氧化氢溶液20ml使溶解，于90?水浴3h，放冷，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=18.8，分离良好。见图3。
2.3.4 高温破坏
取本品适量于115?恒温烘箱中烘3 h，放冷，加水稀释成每1ml中含氢溴酸右美沙芬0.1 mg的溶液。空白辅料同法破坏。按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果主峰与降解产物杂质峰分离度R=3.0，分离良好。见图4。
2.4 空白辅料干扰性试验
精密称取处方量空白颗粒(不含主药)适量，加水振摇并稀释，按“2.2”项下配制供试液，滤过，取续滤液20μl注入液相色谱仪。结果分离度均大于2，
表
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明本品空白辅料对有关物质检查无干扰。
2.5 定量限和最低检出限的测定 配制不同浓度的氢溴酸右美沙芬对照品溶液，按“2.2”项下进样测定，以S/N?10作为定量限，以S/N?3作为最低检出限，测得氢溴酸右美沙芬的定量限为0.78μg，最低检出限为9ng。
2.6 重复性试验
精密称取同一批样品6份，分别加水，振摇使溶解并稀释制成每1 ml中约含0.1 mg的溶液，按“2.2”项下的方法测定，结果主峰面积RSD为1.0%，表明重复性良好。
2.7 稳定性试验 精密量取2.6项下的溶液，置室温下放置，分别于0、2、4、8、12、24 h时取样测定，结果未检出杂质，表明本品溶液在室温下放置24 h稳定，不产生降解产物。
3 讨论
3.1 采用高效液相色谱法测定氢溴酸右美沙芬颗粒的有关物质，空白辅料对测定结果无干扰，灵敏度高，专属性强，具有快速、简便、可靠的特点，可作为该制剂生产、贮藏过程中因条件不当而引起杂质变化的控制检测方法。
3.2 因无法获得杂质对照品，故采用不加校正因子的主成分自身对照法。此法亦是国内目前使用最多的杂质测定方法,5,。采用该法来测定氢溴酸右美沙芬颗粒的有关物质，实验表明样品与杂质能达到较好的分离(分离度R均>2);试验表明，此方法灵敏度高，专属性、重复性、稳定性均较好。
3.3 实验中采用各种破坏手段是为了使试验进程加速进行，以便在短时间内达到试验效果并在短时间内完成评价工作。
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