白虎羚退热散抑菌作用探究
(1,南阳市中心医院药剂科,河南南阳473000,2,河南中医学院,河南郑州450008)
摘要,目的,观察白虎羚退热散的抑菌作用。
方法
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,通过平皿法和试管内药液稀释法观察白虎羚退热散的抑菌作用。结果,白虎羚退热散对肺炎双球菌及金黄色葡萄球菌最敏感,对乙型链球菌敏感,对大肠杆菌不敏感。结论,白虎羚退热散对其敏感的细菌有明显的抑菌作用。
关键词,白虎羚退热散,抑菌作用
中图分类号,R285.5 文献标识码,A 文章编号,1673-7717(2007)05-1016-02
白虎羚退热散是由仲景白虎汤去梗米加羚羊角粉制成,临床用于治疗阳明经热盛或温热邪在气分等症取得了较好疗效,为验证其药效,本实验研究了其抑菌作用。
1材料与方法
1.1药物
白虎羚退热散,由河南中医学院中心实验室提供,批号000405,白石清热冲剂,沈阳飞龙制药有限公司生产,批号000205。
1.2培养基
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肉汤培养基,余姚微生物培养基厂生产,营养琼脂培养基,中国药品生物制品检定所生产,血琼脂培养基(供乙型链球菌、肺炎双球菌用)。
1.3菌种
肺炎双球菌(31001)、乙型链球菌(32204)、金黄色葡萄球菌(25923)、大肠杆菌(25922),均由河南省防疫站提供(冷冻
标准
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菌株)。
2实验方法与结果
2.1 药物抑菌实验平皿法
2.1.1药物制备 称取白虎退热散15g,加蒸馏水至30mL,溶解混悬后作倍比稀释,共4个稀释度,使浓度为500、250、125、62.5mg/mL的供试液。稀释后105?灭菌30min,备用,白石清热冲剂药液的制备同白虎羚退热散。
2.1.2培养基制备 肉汤培养基,称取肉汤培养基5g,加蒸馏水稀释至500mL,116?灭菌20min。
2.1.3菌液制备 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌接种于营养琼脂平皿,37?培养24h,乙型链球菌、肺炎双球菌接种于血琼脂平皿,37?培养24h。挑选2个典型单个菌落接种于2mL肉汤培养基中,37?培养18h(乙型链球菌、肺炎双球菌加入无菌羊血0.15mL)。上述菌悬液用肉汤培养基稀释至10-5。
2.1.4接种 分别将4个稀释度的供试液及对照液2mL与
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18mL营养琼脂培养基加入编号为1,4的无菌平皿中,乙型链球菌及肺炎双球菌培养基中加入无菌羊血1.0mL,摇匀并冷却,培养基内药液浓度分别为1:20、1:40、1:80、1:160。没皿中加入10-3试验菌液0.05mL,用L棒涂匀,37?培养24h,计算。每种药物每个稀释度做2个培养基。同上法再接种3个不含药物的培养基做阴性对照。
2.1.5使用菌液细菌计数 取实验用10-5菌悬液(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、乙型链球菌)0.05mL均匀琼脂平皿上,每种作2个平皿,置37?培养24h,计算菌落数。
2.1.6观察方法 阳性对照平皿中细菌生长良好,阴性对照平皿中无细菌生长,含药平皿中菌落形态与阳性对照平皿相同,不同者为杂菌污染,以培养基中无细菌生长者为该受试中药的最低抑菌浓度(MIC)。各平皿均无杂菌污染,阳性对照平皿中各种菌均生长。
2.2药物抑菌实验试管内药液稀释法
2.2.1材料与制备 同平皿法。
2.2.2药物抑菌实验 白石清热冲剂药物肉汤培养基的制备,秤取白石清热冲剂20g,加肉汤培养基至40mL。另取13mm×100mm试管9支(编号1,9),于第1管中加入上述白石清热冲剂药物培养基4.0mL,其余每管中各加入肉汤培养基2.0mL加入第3支管中,以此类推,直到第7管取出
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2.0mL弃去。使管中药物为500、250、……7.6mg/mL。第8管不加药物作为对照,以观察培养基是否适合于细菌生常。第9管中加白石清热冲剂药物2.0mL,混合后取出2.0mL,不加菌液,以观察受试药物是否有污染。试管加棉塞,105?灭菌30min,备用。
白虎羚退热散药物肉汤培养基的制备同白石清热冲剂。将肉汤培养6,8h的实验菌液,用无菌肉汤稀释成10-3,取0.1mL分别加入上述1,8管中,混合后一起放入37?培养箱中培养24h,每种菌平行作2支试管,若肉汤混浊,表示细菌生长,若肉汤完全清亮,表示无菌生长,按上述试管培养法分别取0.5mL划线接种于营养琼脂平皿中(乙型链球菌、肺炎双球菌的培养基内加1.0mL无菌羊血)。37?培养18h观察结果。菌落生长数?10个的药物浓度是受试中药的最低杀菌浓度(MBC)。各管均无杂菌污染,阳性对照平皿中各种菌均生长。
3讨论
白虎羚退热散是由仲景白虎汤方加减而成,主要成分为石膏、知母、羚羊角粉、甘草等,方中石膏性大寒,善能清热,以制阳明(气分)内盛之热,并能止渴除烦,知母性寒质润,寒助石膏以清热,润助石膏以生津,羚羊角粉性大寒,诸药配伍共成清热生津,止渴除烦,定惊之剂。临床用于治疗阳明经热盛或温热邪在气分等症取得了较好疗效。本实验
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所采用的平皿法与试管法结果提示,白虎羚及白石清热冲剂均对肺炎双球菌及金黄色葡萄球菌最敏感。白虎羚退热散对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型链球菌的MIC和MBC分别为,12.5、31.3、12.5、31.3、50、125mg/mL。白石清热冲剂对金黄色葡萄球菌及肺炎双球菌的MIC和MBC分别为25、125、25、62.5mg/mL,对乙型链球菌的MBC为500mg/mL,结果表明白虎羚退热散的抗菌效果优于白石清热冲剂,但二者对大肠杆菌均不敏感。本研究在一定程度上为其临床治疗阳明经热盛或温热邪在气分等症提供了理论依据。
注,本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。
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