非特异性酯酶染色
非特异性酯酶染色检查的
标准
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操作程序(SOP)
实验室名称 项 目 编 号 制定日期
非特异性酯酶染色检查 细胞室 **** ****年**月**日 【目的】
指导非特异性酯酶染色检查。
【该SOP变动程序】
本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、质控主管、科主任。
【染色原理】
作用于短链脂肪酸的酶,称为“非特异性酯酶”。此酶将乙酸α,萘酚水解,产生萘酚,萘酚再与重氮盐偶联,形成不溶性的有色沉淀物,定位于酶活性存在处。 【用途】
急性白血病的鉴别,急性单核白血病阳性,亦称“单核细胞酯酶”。 【试剂配置】
1)固定液,10,甲醛生理盐水。
2) 0.05mol/L磷酸缓冲液
0.067mol/L磷酸氢二钠 44ml
0.067mol/L磷酸二氢钾 12ml
3)作用液
40ml0.05mol/L磷酸缓冲液
1%乙酸α,萘酯(以丙酮做溶剂)0.4ml振荡。溶解后加蒸馏水0.4ml
坚牢蓝B,40mgrj溶解,过滤
4)1%甲绿水溶液。
【染色
步骤
新产品开发流程的步骤课题研究的五个步骤成本核算步骤微型课题研究步骤数控铣床操作步骤
】
1(固定:新鲜血或骨髓涂片,置10%甲醛生理盐水中10分钟。 2(水洗:自来水冲洗5分钟。
3(孵育:放入作用液1小时。
4(水洗:自来水冲洗5分钟。
5(复染:1%甲绿染5分钟。
6(水洗:晾干,镜检。
【对照标本】
染色步骤同上,作用液中减去乙酸α,萘酚。
【结果判断】阳性反应为棕黑色片块状沉淀,定位于胞浆中。计数
方法
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如下:
0 胞浆呈原色。
+ 胞浆呈棕灰色,无颗粒。
++ 胞浆呈棕黑色,云絮状。
+++ 胞浆呈黑棕色,云絮状。
++++ 胞浆呈深黑色,云絮状。
【临床意义】
在中性PH值,用乙酸α,萘酚做底物时,单核细胞呈阳性反应,其强度随细胞发育成熟而逐渐增加。巨噬细胞、巨核细胞、血小板与淋巴细胞也偶见,其他血细胞则呈阴性或弱阳性反应。
【注意事项】
1.涂片宜新鲜,不超过两天为宜。
2.重氮盐的选择,以坚牢蓝B,坚牢蓝RR和坚牢蓝黑B重氮盐为好,使酶反
应产物呈颗粒状,定位清楚。
操作人员 部门主管 质量负责人 姓名 王烈 日期 04年07月15日