[doc] 穿透性角膜移植术后内皮创伤愈合的形态学...

[doc] 穿透性角膜移植术后内皮创伤愈合的形态学... 穿透性角膜移植术后内皮创伤愈合的形态 学... 第_I军腻大学 1992;13(61:508--511 AcadJSecMI]MedU血 穿透性角膜移植术后内皮创伤愈合的形态学定量研究 蒋华宋振英r济南军区总医院眼科,250031)R777- 林庆华?(浪潮电子计算机集团公司,济南250013) 提要20只家兔角膜分为正常,异体穿运性角膜移植术后2周,1,2,3个月各4只,共5组,用扫描电 镜观察拍摄伤口部位内皮细胞并利用电子计算机图象分析系统测得细胞面积周长密度,形状系 数,最大长径,面积变异系数等形态计量学指n250O31) AbstranTl】eendotl1eliumof20a船ofrabbitcomeaincludingthenoFmalandpostope~’ated0nes (2weeksandl,2,3monthsaf~l”penetratingkeratoplasty)we[eobservedbysc anmngelectronmi- croscope.Th0photographsoftheendothelinmingraft—hostjunctionwere 卸ysedbycomputer— assistedimageanal 【yssystemandthemorphometricindexesareasfollows:at’e;~tofthecells,per- imeters,density;figurecoefficient,longaxis,cnefficientofvariationofthearea,andothers.After operationthemorphologyandthedensityoftheendothelialcellsweredifferentfromthenormal onesobviously,butthecellschangedfromenlargementandirregularitytonormalprogressively.At thetimewhenthecolTleasreoperatedfor3months.$o111~differencesstillexisted. Keywordskemtoplasty,penetrating;cornealendotheliura;woundhealing;morphome~ry 角膜内皮愈合在角膜移植术后组织 修复中有着十分重要的意义,然而以往的 角膜内皮研究大都局限于通过点计数进行 密度定量或一般的形态学概念性描述.所 以眼科学界一直渴望能有一种方法既能测 量细胞密度,又能对每个细胞进行精细的形 态学定量描述.近几年来飞跃发展起来的 体视学与图象分析技术使这种希望变成了 现实.本试验用扫描电镜观察家兔穿透性 奉控兼职教授,硕士研究生导师 角膜移植术后内皮细胞愈合过程,将获得 的伤口部位内皮照片进行了计算机图象分 析,从而进一步了解了内皮愈合的机理 l材料与方法 1.1仪器,设备日立S-570型扫描电子 显微镜,日本产:剑桥Quantimet一970型图 象分析系统,英国产:IBM微型电子计算 机:角膜移植显微手术器械包. 1.2动物模型建立及角膜采取选用新西 第军医大学1992:13(6) 兰大白兔20只(山东医科大学提供),均为幼 年成免,雌雄各半,体重2,5,3kg,角膜 无外伤无感染,随机分为5组,A组为正 常对照:B,E组各随机配对为两对,进行交 互穿透性角膜移植术.植片直径为 6n-filL术后2周,l,2.3个月分别将B,E 组动物活杀,取出眼球,立即固定于2.5% pH7.4戊二醛中30mh然后在解剖镜下 取带有2,3m巩膜组织的角膜,以l nx,1/L磷酸缓冲液冲洗干净,再置人戊二 醛中固定. l-3扫描电镜动态观察将固定48h的角 膜扇形切开,展平,经锇酸后固定,逐级酒 精脱水,二氧化碳临界点干燥后,用导电 胶粘于样品台匕,IB一5型离子溅射仪喷金 (约10mTl厚),日立S一570型扫描电镜观 察植片一植床结合部位的内皮面. 1.4计算机图片分析在扫描电镜下获得 伤口部位角膜内皮照片,每个角膜3,5 张,放大倍数300,l000,在照片上选择 角膜内皮细胞,每只角膜5o,70个,利用 剑桥Quantimet一970型图象分析系统测得 每个细胞的如下指标:周长(蹦,面积 (Ak最大长径(U并计算出各个细胞的形 状系数FC(Fc=A艄,它反映细胞形 态it]求出每个角膜的上述指标平均值和细 胞面积变异系数cv(cv= 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差/面积),它 反映细胞的大小均匀程度日.再按照平均细 胞面积求得细胞密度(E最后将B,E组 分别与A组进行比较. 1.5统计学处理将各初级数据经IBM 计算机处理后得到各组的均值与标准差,f 检验或方差分析进行统计学处理. 2结果 2.1正常角膜内皮细胞的密度和形态距 角膜中央3mTn处的角膜内皮细胞各形态 计量学指标详见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf l. 表1伤口部位角膜内皮细胞密度.平均细胞面积和变异系数的变化? Tab11changesoftheD,AandCVoftheendo~cells’啪theincisionposilio~? P<0.05;”P<001aScomparedwithgroupA 2.2伤口部位细胞密度,平均细胞面积及 其变异系数的变化详见表L从中看 出:术后2周单层细胞层基本建立,但密 度较术前明显下降(P<0.Oll平均细胞面 积扩大(P<0.Oll细胞大小不均(P<0.01), 以后密度不断上升,3个月时仍小于术前 (P<0.o53,但大小变得均匀(p>0.05). 2l3细胞形状系数与其他形态参数的变化 手术后细胞由术前的近正六边形而拉长 ,尸<0.Ol单层细胞形成后又逐渐向正六边 形恢复(逐渐增大),但3个月时仍未恢复 手术前的正常形态(I<O.05)’同时周长和 最大直径也发生相应变化. 3讨论 3.1实验方法评价及其在本实验中的意义 510第二军医大学I992;13(6) 图1正常角膜内皮细胞,呈六边形单层细胞镶嵌结掏×1000 图2术后2周时的角膜内皮细胞X500 图3术后2月时的角膜内皮细胞×1000 F1Thenomlal伽幢?曲lendothelium:hexagonalmonolayerII106~C时mctIIreX1000 啦2?endotheliumwhenthe呻嗍WaSOl~’atedfor2weeksX500 Fig3Thecornealeadothelimawhefftthe?Iwasoperatedfor2monthsX1000 表2角膜内皮细胞的形状系数,周长和最大长径的变化? Tab2ThechangesoftheFC,PeandLoftheendothelialoells+-sJ P<0.05;’P<00lascompaxedwithgroupA 细胞密度与细胞形态是维持角膜内皮功能 的重要因素,很多学者利用角膜内皮镜对 植片内皮细胞密度变化进行了深入研究q Matsuda等[~1984年的研究结果表明:内皮 细胞和形态学分析对观察其术后微妙变化 更为敏感,l985年他们又将图象分析技术 应用于植片中央部位的内皮研究,并使形 态学观察定量化f】l.但由于角膜移植术后早 期角膜水肿,伤口部位混浊以及伤口部位 角膜铺片难度大等原因,对伤口部位内皮 第:军医大学199鸳l 愈合仍缺乏研究.本实验首次将扫描电镜 与图象分析技术联合应用于角膜移植术后 伤口部位内皮愈合的观察和分析,从而详 细观察了内皮细胞的愈合过程,并得以将 统计学处理引入形态学的描述与比较,使 形态学分析定量化,并使其变得更细致和 客观 3.2角膜移植术后内皮创伤愈合机理及其 意义目前对擦伤与冷冻伤后角膜内皮愈 合的机理已有较系统的认识,一般认为伤 后数小时内即发现细胞拉长,增大,移行进 入伤口,直径4n’ffrl的擦伤创面3d即可恢 复,其六边形单层细胞镶嵌结构可在3周 内得到重建,在愈合早期.可于伤面内见 到较多分裂细胞[31.曾有学者从几何学和生 理学角度分析认为:棋格状平面细胞组织 在排列为大小均匀的正六边形时是最稳定 的组合形式,并将之作为认识伤后内皮形 态恢复的理论依据,所以内皮细胞愈合 实际上包括了密度恢复和形态恢复两部 分』_u. 本实验研究结果从定量化的角度表明 了这种愈合趋势,并发现由于角膜移植术 中破坏了后弹力膜,所以愈合进程要比单 纯擦伤或冷冻伤耍慢得多 由于角膜移植术中内皮细胞的丢失和 破坏,加之角膜移植术后,伤面的内皮细 胞也有一个经历纺缍形,多角形等不同阶段 最终恢复为大小均匀,近正六边形单层细 胞镶嵌结构的过程,这将导致植片和植床 内皮细胞的变化所以,减轻手术创伤是加 速术后内皮创伤愈合和减少各种并发症的 关键 尽管家兔角膜内皮细胞与人有一定差 别,但研究它的愈合机理仍对人角膜的研 511 究具有十分重要的意义.尤其是考虑了兔 角膜内皮细胞具有分裂能力再来认识细胞 移行,细胞形态和密度恢复等机理和过程, 对进一步理解人的角膜植术后内皮创伤愈 合机理更具有重要的指导意义 参考文献 1MalaldaBroumwM—refillnx~phdqO~- dla噌intheetldotlxlilmaoftransplanted?n AtriaOphthaln~,1985;103:1343 王sc?Matmda~LYeeRW,etalCereal endoth~fldintype】andtypeIm 印htlmlmolSacUK,1974;94:863 &wari唱GOIILBotlrneWEdethauserdol The0DeendotlxlilmxNormalandpatho!ogic andftmaion印hthalmolo~1跚531 MatsudaMSudaMmabeRSefi~alterationsin mdothdNcellslopeandpatt~n船intmoalhrSuP I~’Y-AMJOphthah~t,le~4;%(3l3 &TamnmmAAnqumfitivea?asof?涮 mdothdNcetkFcliat?dJp121;321835 9HotldaHGectmficalmodelsforintissu~ ImRevqtol1123;81:191 10.BourneOTallon(Ia’oNcetldolhefialcell IntrarGNarred?l嫩2289 (1992—04—25收稿:199”2-08一修回)