利福昔明乳房注入剂对干奶期奶牛临床性乳房炎预防效果的观察pdf

利福昔明乳房注入剂对干奶期奶牛临床性乳房炎预防效果的观察pdf 分类号 S858.23 学校代码 10129U D C 619 学 号 2011216043利福昔明乳房注入 剂对干奶期奶牛临床性乳房炎预防效果的观 察 Observation on Preventative Effects of Rifaximin Intramammary Infusion for Clinical Mastitis in Dairy Cows 申 请 人:郭 旭 学位类别:兽医硕士 指导教师:李培锋 教 授 李利平 研究员 论文提交日期: 二〇一三年六月 摘 要 目的:本研究旨在观察利福昔明乳房注入剂对奶牛临床型乳 房炎的预防效果。 方法:选择非临床型乳房炎的泌乳末期健康奶牛共计 75 头，随 机分成 5 组，每组 15 头:1 个空白对照组，即健康不给药对照组;1 个药物对照 组，即苄星氯唑西林乳房注入剂组;3 个受试药物组分别为利福昔明乳房注入剂高、 中、低三个剂量组。分别在干乳期、泌乳期观察了受试奶牛的临床症状及临床型乳 房炎发生情况;采用微生物学常规技术检测了给药前后牛乳中的致病菌数量;采用 CMT法和体细胞计数(SCC)法检测了牛乳中的体细胞计数;采用兽用全自动血液 细胞 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪检测牛血液常规;采用兽用血液生化分析仪检测奶牛肝肾功能;采用兽 用尿液分析仪检测奶牛尿常规;观察记录奶牛增重及饲料转化率。 结果:低剂量、 中剂量和高剂量的利福昔明乳房注入剂对试验奶牛乳区的保护率分别为 95.00， 96.67和 98.33，其中低剂量组显著高于空白对照组(Plt0.05)，中剂量组和高剂量 组均极显著高于空白对照组(Plt0.01);低剂量、中剂量、高剂量的利福昔明乳房 注入剂灌注试验奶牛乳区后，均能显著的降低乳中金黄色葡萄球菌、链球菌及大肠 杆菌的数量(Plt0.05);低剂量、中剂量及高剂量的利福昔明乳房注入剂均能显著 CMT 的数量(Plt0.05)。 结论:不同剂量的利降低泌乳后不同时间乳中 SCC 和 福昔明乳房注入剂对临床型奶牛乳房炎均有较好的预防效果，可显著降低奶牛乳房 炎的发生率。关键词:利福昔明;奶牛;干乳期;临床型乳房炎;预防效果 Observation on Preventative Effects of Rifaximin Intramammary Infusion for Clinical Mastitis in Dairy Cows Abstract Objective: this experiment was conducted to study the Prophylactic efficacy ofRifaximin intramammary infusion on clinical mastitis in dairy cows. Seventy-five latelactation cows with non-clinical mastitis were randomly assigned to five groups andfifteen cows each group: blank control group health control group positive controlgroup drug control group three treatment groups with high dose medium dose andlow dose. Methods: we respectively observed the incidence rate of the clinical symptom andthe clinical Mastitis in tested dairy cows at the dry period and lactation period，detected the numbers of the pathogenic bacteria before and after each dose by the wayof the microbiology technology，detected the cell mumbers in the milk adopting theCMT and SCC. The automatic blood cell analyzer of beasts was applied to determinethe blood routine of dairy cows. The blood biochemical analyzer of beasts wasapplied to determine the examination of liver and renal function of dairy cows. Therates of gain in body weight and the feed conversion rates were observed andrecorded. Results: the protective rate of low dose medium dose and high dose ofRifaximin Intramammary Infusion were 95.00 96.67 98.33 the low dosegroup was higher than the blank control Plt0.05 both the medium dose group andthe high dose group were significant higher than the blank control group Plt0.01after potting the udder of the tested dairy cows with Rifaximin IntramammaryInfusion we found that the low dose medium dose and high dose all can significantlydecreased the numbers of Staphylococcus Streptococcus pneumoniae and EscherichiacoliPlt0.05on the other aspect the low dose medium dose and high dose all cansignificantly decreased the numbers of SCC and CMT in the milk after different timeof lactationPlt0.05. Conclusion: the Rifaximin Intramammary Infusion of different dose all had wellprophylactic efficacy of clinical mastitis in dairy cows and could significantly reducethe incidence rate of dairy cow mastitis.Key words: Rifaximin Clinical mastitisProphylactic efficacyDirected by: Prof.LI Peifeng Prof.LI lipingApplicant for Master degree: GUO Xu (Veterinary Master) College of Veterinary medicineInner Mongolia Agricultural UniversityHohhot 010018 China 目 录1 引言............................................................. 1 1.1 防治奶牛乳房炎的研 究进展 ...................................... 1 1.2 利福昔明的研究概况 ............................................ 3 1.3 本研究的目的和意义 ............................................ 52 试验材 料......................................................... 6 2.1 试验动物 ...................................................... 6 2.2 药品与试剂 .................................................... 6 2.2.1 受试药物及来 源.............................................. 6 2.2.2 对照药物及来源.............................................. 6 2.2.3 主要试剂.................................................... 6 2.3 菌种及来 源 .................................................... 7 2.4 主要仪器设备 .................................................. 73 研究内容与方法................................................... 7 3.1 试验分 组 ...................................................... 7 3.2 试验动物的筛 选 ................................................ 8 3.3 临床型乳房炎诊断标 准 .......................................... 8 3.4 给药 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 ...................................................... 9 3.5 观察时间和指标 ................................................ 9 3.5.1 观察时 间................................................... 10 3.5.2 临床症状观察............................................... 10 3.5.3 生理生化指标测定........................................... 11 3.5.4 增重和饲料转化情 况......................................... 11 3.5.5 计算发病率、保护率、死亡率................................. 11 3.5.6 病理解剖................................................... 114 结果判 断........................................................ 114.1 试验的可靠 性 .................................................. 114.2 预防效果评价 .................................................. 114.2.1 预防有效.................................................... 124.2.2 预防无 效.................................................... 125 数据处理........................................................ 126 结果............................................................ 12 6.1 利福昔明乳房注入剂给药前后乳中 致病菌的检测结果 .............. 12 6.2 利福昔明乳房注入剂给药前后乳中体细胞数的 检测结果 ............ 15 6.3 利福昔明乳房注入剂对干乳期奶牛临床型乳房炎的预防效 果 ........ 17 6.4 利福昔明乳房注入剂对干乳期奶牛生理生化指标的影响 ............ 19 6.5 利福昔明乳房注入剂对试验奶牛增重和饲料转化的影响 ............ 247 讨论与结 论...................................................... 24 7.1 讨论 ........................................................ 24 7.2 结论 ........................................................ 26 7.2.1 利福昔明乳房注入剂对细菌数 量的影响........................ 26 7.2.2 利福昔明乳房注入剂对奶牛乳中体细胞数的影 响................ 26 7.2.3 利福昔明乳房注入剂对奶牛临床型乳房炎的预防效果............ 26 7.2.4 利福昔明对生化指标的影响.................................. 26 7.2.5 利福昔明对奶牛 增重和饲料转化的影响........................ 26致 谢........................................................... 27参 考 文 献..................................................... 28作 者 简 介..................................................... 33 内蒙古农业大学硕士学位论文 11 引言1.1 防 治奶牛乳房炎的研究进展 奶牛乳房炎是由于乳房的局部血液循环障碍导致免疫功 能低下，无法完全抵御致病微生物的入侵和增殖而造成乳房组织及乳头发炎的一种 常见疾病，在临床上将奶牛乳房炎分为隐性乳房炎(亚临床型乳房炎)和临床型乳房炎。临床性乳房炎根据发病快慢又可分为急性乳房炎、亚急性乳房炎、慢性乳房炎;根据炎症性质还可分为浆液性乳房炎、纤维蛋白性乳房炎、卡他性乳房炎、坏疽性乳房炎化脓性乳房炎和出血性乳房炎。临床型乳房炎的患病奶牛主要 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现为:乳房出现红肿热痛，乳汁颜色发黄或发红，有凝块、絮片等异常变化，产奶量下降或无奶，触摸乳房有硬块，部分病牛出现精神沉郁，体温升高，食欲下降的全身症状。奶牛乳房炎的病因主要有细菌因素、营养因素、环境因素以及管理体制、挤奶方式、泌乳阶段和遗传因素等。 该病是危害奶牛业发展的四大疾病之一。奶牛乳房炎给奶牛业带来了巨大的经济损失，据统计，在估计患乳房炎的奶牛损失比例中，奶牛隐性乳房炎占801，经治疗以后的患病奶牛很难恢复到之前的产奶水平。 奶牛乳房炎的治疗原则，即改善奶牛全身状况，消灭病原菌，减轻或消除炎症，控制感染。目前国内外预防奶牛乳房炎的方法很多，例如中药治疗、挤奶前后乳头药浴、改善环境卫生、干奶期及泌乳期药物治疗等2-4。开发研制奶牛乳房炎疫苗用来进行奶牛乳房炎的预防是国内外的研究热点，国外在 1930 年已经开始了对奶牛乳房炎疫苗的研制 56 ，我国科研人员在对奶牛乳房炎的预防研究上也已经有 20 多年的历史，并获得了很大成就。但是由于乳房炎的病原微生物具有很强的季节性和地域差异性，疫苗对其的保护效果不是很理想，同时佐剂也会影响到疫苗的免疫效果7。 张志英对包头地区奶牛乳房炎发病率进行调查显示该地区乳房炎平均发病率为 59.7，研究表明隐形乳房炎的发病与乳区环境有关，搞好乳房的保健可以减少乳房炎的发生，另外干奶期用药也可以显著价格低乳房炎的发生率8。 李宏胜等9对奶牛乳房炎的治疗方法归纳为以下几种:抗菌药物治疗，中西兽医结合法治疗，纯中药治疗和生物疗法。但是抗生素疗法导致耐药菌株增多使得疗效下降，尤其是对金黄色葡萄球菌的疗效较低。中药用乳房消肿散 250g，早晚各灌服一次(3d 为一个疗程)，配合西药特效米先在颈部肌肉注射(3d 一次为一个疗程)，这种方法对奶牛临床型乳房炎的治愈率为 85.610。纯中药疗法对乳房炎的治愈率也较高，与化学药物相比，毒副作用较小。中医理论上讲“痛则不通，通则不痛”。郭梦尧等11从中医的角度对预防奶牛乳房炎的方法进行了阐述，认为乳炎康12、封胶合剂乳炎散、乳房炎肖王13、消炎增乳散14、公英瓜2 利福昔明乳房注入剂对干奶期奶牛临床性乳房炎预防效果的观察蒌汤等中药组方都从奶牛乳房炎的发病机制入手，均能够调节乳房血液循环，抑菌消炎提高免疫力达到治愈的目的。曹志等15从奶牛乳房炎干奶期预防着手进行了阐述，认为由于在干奶初期乳腺细胞变性导致对感染的抵抗力下降，容易被病原菌侵入，因此对干奶期乳房炎的预防尤为重要。方维焕等16对 PG805(内含普鲁卡因青霉素和邻氯青霉素)和 TA125含长效青霉素和邻氯青霉素两种抗生素对奶牛干奶初期乳房炎的疗效进行比较，结果显示二者均能有效消除感染，降低发病率。李瑞斌等17用乳炎康对 50 头怀胎奶牛实施干奶表明该制剂对临床型乳房炎的保护率为 84，对产后奶牛乳区保护率为 91。方福红18总结了奶牛乳房炎的治疗方法包括抗生素疗法、中草药疗法、生物疗法、微生态制剂疗法和细胞因子疗法。其中生物疗法效果显著，用水蛭素对奶牛隐性乳房炎进行治疗，治愈率高达 100。黄庆飞等19在奶牛精料中添加有效生物群(EM)，并将其活菌剂稀释液对牛体及牛舍进行喷洒，结果表明能够显著降低奶牛乳房炎额发生率。Fekadu Regassa 等20研究了使君子对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的抑制作用，结果表明使君子的茎叶乙 醇提取物具有抗菌活性。且茎提取物的抗菌活性会随着提取时间的延长而降低。叶提取物对分离到的耐抗生素葡萄球菌和链球菌有抑制作用。 头孢喹肟是由德国赫斯特公司开发于 1993 年上市的动物专用兽药，它的抗菌活性强，抗菌谱广，临床上常用其进行乳房灌注或者肌肉注射来防治奶牛乳房炎或猪呼吸道疾病2122。在我国该药于 2008 年被批准注册为国家二类新兽药。曹斌等23等用硫酸头孢喹肟混悬注射剂对奶牛大肠杆菌性乳房炎进行了治疗试验，结果表明硫酸头孢喹肟的混悬注射剂对大肠杆菌引起的泌乳奶牛临床显性乳房炎疗效良好，它的细菌治愈率可达到 80以上，临床治愈率可达到 90以上，且在产奶量和病程的控制方面要优于注射用氨苄西林钠。Reza Kasravi 等24对头孢喹肟乳房注入剂的常规剂量和加大剂量对奶牛隐性乳房炎的治疗效果进行对比结果表明头孢喹肟乳房注入剂常规剂量能够有效治疗隐形乳房炎，常规剂量组与加大剂量组的治疗效果差异不显著。 郭犁25复方盐酸头孢噻呋注射液的药效学进行了研究，结果显示该注射液对无乳链球菌的最小抑菌浓度为 0.025μg/ml，对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.25μg/ml，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 1.00μg/ml，其抑菌浓度要优于盐酸头孢噻呋无菌粉，而且研究表明复方盐酸头孢噻呋注射液的临床治愈率要比盐酸头孢噻呋混悬液的治愈率高 20以上，证明该制剂可以用于奶牛临床乳房炎的治疗。 刘安刚26 研究了氟苯尼考纳米乳对奶牛乳房炎的治疗效果，结果显示氟苯尼考纳米乳在对奶牛乳房炎的疗效上要显著好于氟苯尼考注射剂。 内蒙古农业大学硕士学位论文 3 杨雪峰27对复方阿莫西林纳米乳对临床性乳房炎的药效学进行了研究，结果显示高中剂量组的复方阿莫西林纳米乳的疗效要明显好于低剂量组和青链霉素(Plt0.05)，建议在临床上治疗奶牛临床性乳房炎的剂量为中剂量(200mg)。1.2 利福昔明的研究概况 利福昔明(Rifaximin)是一种安莎霉素类抗菌药(利福平，利福霉素)经奈环修饰后的衍生物(化学结构见图 1)，分子量为 785.9，分子式为 C43H51N3O11，化学名称是 4-脱氧-4’-甲基吡啶1’.2’-12咪唑并54-环利福霉素 SV。主要作用于细菌内的 RNA 多聚酶从而抑制 RNA 的合成，产生抗菌作用。利福昔明的熔点不易测出，在 207?后会熔融变黑并分解，在乙醇、氯仿、丙酮等有机溶剂中的溶解度较大，单一溶剂很难对其进行重结晶，需选用乙醇:水为 7:3 的混合溶剂作为重结晶溶剂。目前在国内主要用于对人类肠道感染、腹泻等的治疗，剂型主要有肠溶胶囊剂、干混悬剂、胶囊剂和片剂28-30。 利福昔明的药代动力学研究证明该药口服后基本无系统吸收。大鼠在单次口服 25mg/Kg 利福昔明 72 小时后在尿中的回收率为 0.29，在粪便中的回收率为53.4，而在单次口服 100mg/Kg 后，仅在肝脏中存在 0.1μg/ml，在血清中存在0.2μg/ml。 利福昔明是人工半合成抗菌药31，其具有广谱杀菌作用，对革兰阳性菌(葡萄球菌，链球菌棒状杆菌)及革兰阴性菌(大肠杆菌，巴氏杆菌，假单胞菌，变形菌)具有良好的杀灭作用32。由于其与酶的结合是不可逆的，所以其活性为对敏感菌的杀菌活性。对利福昔明抗菌活性的研究显示，本品与利福霉素具有同样广泛的抗菌谱，对多数革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，包括需氧菌和厌氧菌的感染具有杀菌作用。 图 1 利福昔明化学结构 利福昔明最主要的特点是给药后几乎不被吸收，仅在给药局部达到极高的浓4 利福昔明乳房注入剂对干奶期奶牛临床性乳房炎预防效果的观察度，极少分布在其它器官中，因此发生全身不良反应的危险很低，并且很少会与其他药物发生相互反应。 利福昔明的抗菌原理主要是因为它能与 RNA 多聚酶β亚单位进行不可逆的结合，防止 DNA 与该酶连接，从而阻 碍细菌 RNA 的合成，阻断 RNA 转录，抑制蛋字实暮铣桑迪稚本男,,裘骺诜蟠蟛糠滞啾闩懦觯诟紊龇蔚仍嗥鞯姆植技伲琕enturini 等33给试验动物 Wistar 大鼠、狗等饲喂利福昔明，结果在血清中未检测到利福昔明，这证实了利福昔明口服给药极少被吸收。Descombe 等34以 18 名志愿者为对象对利福昔明的药代动力学进行研究表明，在人单次口服 400mg 利福昔明后 48h 内，大部分血浆中未检测出利福昔明的存在。 在人医临床上，利福昔明主要用于治疗急性慢性肠道感染夏季腹泻、小肠结肠炎等，还用于手术期的倡导预防用药，也可辅助治疗高氨血症。Dupont 等35在用利福昔明和环丙沙星对照用药显示显示二者在对疾病的缓解率上无显著差异，证明利福昔明是人急性肠道感染有效的治疗药物而且它是非吸收性抗生素，副作用比抗生素小。Mas 等36将利福昔明和乳山梨醇治疗肝硬化的效果进行了对比研究，结果显示乳山梨醇的治疗有效率为 80.4，利福昔明的治疗有效率为81.6，二者不存在统计学差异，但是在降低血氨水平方面利福昔明要显著好于乳山梨醇，在治疗中重度急性肝性脑病时，利福昔明可以替代乳山梨醇。 在兽医临床上，利福昔明主要用于干乳期奶牛乳房炎的预防及产后急性、亚急性子宫炎，子宫内膜炎的治疗，是安全、有效的药物，因此具有广阔的市场前景。目前利福昔明在我国人药治疗肠道疾病已得到广泛应用，在我国 2002 年利福昔明经 SFDA 批准就已用于临床研究，2003 年在我国上市，目前约有 15 家企业生产此制剂。但在畜牧业生产上的应用还未见报道。在奶牛干奶期，经乳房内注射利福昔明可有效的预防和治疗乳腺炎。利福昔明兽用制剂在国内临床应用资料极少，但国外早在上世纪 80 年代末已有利福昔明多种制剂应用于大动物感染性疾病的预防及治疗的报道。Avila T. S.等考察了利福昔明在干奶期内预防奶牛乳房炎的效果37，他们对 105 头经 C.M.T 试验诊断为临床型及亚临床型乳腺炎阴性的实验组奶牛，在分娩前 64 天进行乳房内利福昔明注射，分娩后再次利用C.M.T 试验调查分娩后受试奶牛群临床型及亚临床型乳腺炎发病率。与对照组相比，乳房内注射利福昔明可使隐性乳腺炎的发病率降低 20，并有效降低临床型乳腺炎的发病率。Savila 等38观察了利福昔明(100mg)对干奶期及产后奶牛乳腺炎的治疗效果。结果表明，利福昔明乳房注射剂可有效地降低亚临床型乳腺炎的发病率 ， (90)并有效降低乳中体细胞数。L.Bertocchi 等39用利福昔明(200mg)对金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎患牛进行了治疗效果的评价。结果显示，利福昔明对临床型乳房炎的治愈率达 76，并且使患牛体细胞数平均下降 15。 内蒙古农业大学硕士学位论文 5 由于利福昔明具有组织吸收水平低，且对厌氧菌具良好的杀灭效果，子宫内灌注利福昔明亦可治疗产后子宫炎。Parmigiani 等40对利福昔明治疗奶牛和母马急性及亚急性子宫炎的效果进行了研究。结果表明，利福昔明子宫灌注剂可.