浅论反相高效液相色谱法同时检测人血浆利多卡因和罗哌卡因

浅论反相高效液相色谱法同时检测人血浆利多卡因和罗哌卡因 浅论反相高效液相色谱法同时检测人血浆利多卡因和罗哌卡因 作者:陈丽梅，徐旭仲，刘乐，王权光，胡国新【摘要】 目的:建立 人血浆利多卡因和罗哌卡因的高效液相色谱 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 方法。方法 :高效 液相色谱仪为Agilent 1100系列;血浆碱化后经乙酸乙酯萃取浓缩， 以ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5μm，Agilent，USA) 为色谱柱;以乙腈?0.02 mol?L-1 KH2PO4(16?84，V/V)为流动 相，流速为1.0 ml?min-1;检测波长为210 nm;内标为布比卡因。 结果:利多卡因和罗哌卡因浓度在0.05,10 mg?L-1范围内线性关 系良好(r =0.999);最低检测限为0.05 mg?L-1;两种药物高、中、 低3个浓度的平均相对回收率分别为(99.79?2.94)%和 (100.32?2.95)%;平均绝对回收率分别为(68.36?4.63)%和 (70.87?4.88)%;日内精密度变异系数分别为(0.86?0.43)%和 (1.36?0.77)%，日间精密度变异系数分别为(2.07?1.45)%和 (1.43?0.23)%. 结论:本方法快速、简便、灵敏、准确可靠，适 用于血浆利多卡因和罗哌卡因的同时测定及其临床药代动力学研究。 【关键词】 利多卡因;罗哌卡因;反相高效液相色谱法;人血浆; 药代动力学 Abstract: Objective: To develop a high performance liquid chromatography method for the simulta-neous determination of Lidocaine and Ropivacaine in human plasma. Methods: High performance liquid chromatography was equipped with Agilent 1100 series. Lidocaine and Ropivacaine were extracted from plasma with acetic ether after alkalization. The analytical column was packed with ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm，5μm，Agilent，USA). The mobile phase was consisted of acetonitrile-potassium phosphate buffer (0.02) (16:84， V/V) and the flow rate was 1ml?min-1. The UV detection wavelength was 210 nm. The internal standard was Bupivacaine. Results: Excellent linear relationship was obtained from the range of 0.05 mg?L-1 to 10 mg?L-1(r =0.999). The limit determination of Lidocaine and Ropivacaine was 0.05 mg?L-1 and the average relative recovery were (99.79?2.94)% and (100.32?2.95)%，respectively. The average absolute recovery were (68.36?4.63)% and (70.87?4.88)%，respectively. The intra-day precision RSD were(0.86?0.42)% and(1.36?0.77)%，respectively ;the inter-day precision RSD was (2.07?1.45)% and (1.43?0.23)%，respectively. Conclusion:The method is simple，rapid，and accurate. It can be used to determine the Lidocaine and Ropivacaine concentration simultaneously in human plasma and for studying of their pharmacokinetics. Key words: lidocane;ropivacaine;high performance liquid chromatography;human plasma;pharmacokinetics 利多卡因和罗 哌卡因分别为中效和长效酰胺类局麻药，临床上为了达到更短的起效 时间和合理的持续时间，往往将这两种局麻药联合用于神经阻滞 [1-3]。已有高效液相色谱法单独检测利多卡因和罗哌卡因的报道， 但是腰丛-坐骨神经阻滞中同时测定两药浓度尚未见报道。本实验建 立了碱化萃取后进样同时测定人血浆利多卡因和罗哌卡因的高效液 相色谱检测方法，具有操作简便、测定速度快等优点，便于推广使用。 1 材料和方法 1.1 仪器 高效液相色谱仪为Agilent 1100系列 (Agilent，Germany)，包括:G1311A四元泵，G1322A 在线脱气机， G1316A柱温箱，G1315B二极管阵列检测器，G1313A自动进样器， Agilent化学工作站(Rev A.08.03.[847])。 电子分析天平(AB204-A， 梅特勒-托利多上海仪器公司，灵敏度0.1 mg);漩涡混合器(XW-80， 上海医科大学仪器厂);高速离心机(TGL-16G，上海安亭科学仪器厂) 1.2 试剂和药品 甲醇(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司产 品，061115101)，乙腈(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司产 品，070226101)，乙酸乙酯(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公 司产品，060822101)，氢氧化钠(分析纯，天津市化学试剂三厂， 200416)，磷酸二氢钾(分析纯，汕头市金砂化工有限公司，20060301)， 磷酸(分析纯，宜兴市第二化学试剂厂，060301)，三乙胺(分析纯， 上海三爱思试剂有限公司，060830)，实验用水均为超纯水。 利多卡 因化学对照品(含量为93.5%，中国药品生物制品检定所提供)，罗 哌卡因化学对照品(含量为99.8%，由阿斯利康制药有限公司提供)，布比卡因化学对照品(含量为99.5%，山东华鲁制药有限公司提供)。 1.3 溶液的配制 1.3.1 利多卡因和罗哌卡因标准品溶液的配制:用灵敏度为0.1 mg的电子分析天平准确称取利多卡因标准品25 mg于50 ml容量瓶中，用超纯水溶解并定容，得浓度为0.5 g?L-1的利多卡因标准储备液。然后稀释成50，5，0.5 mg?L-1的标准应用液。以同样方法配制罗哌卡因标准储备液及标准应用液，贮存于4 ?备用。 1.3.2 布比卡因标准品溶液的配制:布比卡因标准品于干燥器干燥至恒重。用灵敏度为0.1 mg的电子天平准确称取布比卡因标准品50 mg，用超纯水溶解，于50 ml容量瓶内定容，最终浓度为0.5 g?L-1布比卡因标准储备液。然后稀释成浓度为50 mg?L-1的标准(内标)应用液，贮存于4 ?备用。 1.3.3 0.02 mol?L-1 KH2PO4溶液:准确称取KH2PO4?2H2O 2.7218 g，加入三乙胺1 ml，用磷酸调节pH=4.0，用超纯水溶解后于1 000 ml容量瓶内定容。 1.3.4 5 mol?L-1 NaOH溶液:准确称取NaOH 10 g，用超纯水溶解后于50 ml容量瓶内定容。 1.4 色谱条件 色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4.6 mm×150 mm，5μm，Agilent，USA)，流动相:乙腈:0.02 mol?L-1 KH2PO4=16:84(V/V)，pH=4.0，流速:1 ml?min-1，检测波长为210 nm，参比波长380 nm，柱温:35 ?。 1.5 血浆样品的处理 准确吸取待测血浆样品1.0 ml于10 ml具塞试管中，加入50 mg?L-1布比卡因内标工作液30μl，混匀后加入5 mol?L-1 NaOH 溶液40μL。再加入乙酸乙酯4.0 ml，漩涡混匀1 min后2 500 r?min-1离心10 min。转移上层有机相于另一刻度离心管中，37 ?水浴条件下氮气流吹干。用150μl流动相复溶，取上清液100μl于自动进样器的样品瓶中，设定20.0μl进样检测。 2 实验结果 2.1 HPLC图谱 利多卡因和罗哌卡因纯标准品、空白血浆、利多卡因和罗哌卡因血浆标准以及病人血浆样品，经HPLC分析测定得到的色谱图见图1。由图可见在本实验条件下，利多卡因和罗哌卡因的色谱峰能完全分离，没有明显的内生杂质峰干扰。利多卡因的保留时间为4.5 min，罗哌卡因的保留时间为9.7 min，内标的保留时间为19.5 min。可见本方法具有较高的专属性。 2.2 标准曲线的制备及线性范围 取8只10 ml具塞 试管，依次加入不同浓度不同体积的利多卡因和布比卡因标准工作溶液，再加入空白血浆1.0 ml，配成浓度相当于0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 mg?L-1的血浆样品，再按“1.5项”血浆样品处理方法处理后，进行分析得色谱图。以测得的利多卡因峰面积与内标布比卡因峰面积之比(Y)对血浆药物浓度(C)进行线性回归，得利多卡因的标准曲线回归方程(n=8): C=0.731Y+0.015(r=0.9995)。同样的方法得罗哌卡因的标准曲线回归方程(n=8): C=0.928Y+0.052(r=0.9992)，表明在血药浓度0.05,10μg?ml-1范围内利多卡因与罗哌卡因均呈良好的线性关系。最低检测浓度为0.05μg?ml-1。 2.3 精密度实验 配制浓度0.1，0.5，5 mg?L-1的利多卡因和罗哌卡因血浆标准品溶液，平行5组。按“1.5项”处理后于同一日内测定，计算日内精密度;连续5 d内测定，计算日间精密度(结果见表1)。