高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP1蛋白重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫抑制作

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP1蛋白重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫抑制作 ,,,,,中 图 分 类 号 文 献 标 志 码 文 章 编 号 ,,,,,,,,,, , ,,,,,,,,,:,,,,,,,,:,,, , 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 蛋 白 重 组 :,,, 腺病毒的构建及其对小鼠的免疫抑制作用 ，,,,,,,，，，平 周 业 飞李 玉 峰王 先 炜姜 ,，,，南 京 农 业 大 学 动 物 医 学 院 江 苏 南 京 南 京 晓 庄 学 院 生 命 科 学 系 江 苏 南 京 ,,,,::,,,,,,,,, ,, ,,,摘 要 利 用 扩增获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 株 非 结 构 蛋 白 基 因,,,:, ,,,,,,,:,:,, ，，将 其 克 隆 至 穿 梭 载 体 经 线 性 化 后 在 大肠杆 菌内与腺病毒骨架 载 ，,,,,～～,,,;:,,,,,,，,,,, ,,? 体 ，，，同 源 重 组 获 得 重 组 腺 病 毒 载 体 再 经 线性化后转染至 细 胞 获 得 重 组 腺 ,,，,,,,,,，，，,,,, ,!,? , 病 ，。，毒 和 鉴定结果证明其可以 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达 将 该 重 组 腺 病 毒 次 接 种小 鼠 每 次 间 隔 ，,, ,;,,;,,,,:,，,,,, ，:, , , ，，，周 于 免疫后不 同时间取 脾 淋巴细胞进行体外培养 用 于 淋巴细胞增殖试验 并 用 检 测和，，，,, ，,，，，, ,γ 。，,,，水 平 结 果 显 示 与 野 生 型 腺 病 毒 或 对 照 组 相 比 重 组 腺 病 毒 组 淋 巴 细 ,:,,,,,,，, ,,,，,,, , ,胞 ,,，,,。，增 殖 指 数 和水 平 显 著 降 低 水 平 明 显 增 高 结 果 表 明 高 致 病 性 ,,,,,:,,,,,,,:,:,:,,,:,,,,,,,,:,,,,:,,,,,,,,:,,,,,,, ,,，,，,:,:,:,,,,,, ，,,，，,γ ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,, ,,,,。蛋 白 具 有 明 显 的 免 疫 抑 制 作 用 ,,,,,, ,,,,关 键 词 高 致 病 性猪繁殖与呼吸综合征病毒 重 组 腺 病 毒 ，,,,，,，, γ ，,,,,,，，，,，:, ,;,;,，，,～,;,,,，, ,,,,,;,，，,，, ,,,,,,,, ,，，，,,,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,::,,,,,,,,,, ,,,,,, ，，，,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,～;,:,,,,～:,～,,,,:,;,,,，,,,;,;:,,～;～,～,,,～:;,,:,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,,!,, ，,,,,,,,,,;,,,,,:, ,,,:,:,;,,,,:,～～,,,;:,, ,,,,,,,,,::,,,,,;,,,:, ,,,,;～;,:,! ,,,,! ,; ,,,,,,,,,～;,;::,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,;,,,,,,,,,,:,,;,,,,:,,,:,,,，,,,,,,,,,,,:;,～;,,,,～!,, ，,,;,:,,,～,,,:，,:,;,;:,:,,,，,,,,,,,;,,;,,,,,;,,,,;, ,,,～ ,,,,～;,;::,,,,,,,,,;,:,,,～,,!,?, ,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,;,,;,,,,: ，，，,,,,:;,,,,,,,～;,;::,,,,,,,,,;,:,,,～,,,,，,,, ,,,,,,,, :,,,,,;,,,～;,;,～,,,:,,;,,;,,,,:,,,,，,,,～:,;,,～,,,～;，,,,::～,,,;;,,;,,;,,,,,,:;,,,,,,;,, ,,,;:,;,,,,～,～;,;::,,,,,,,,,;,:,,,～,,,:,,,,,;，:, ,,:;,;,;,,::～,,,;,,,,～,,,，,,,,～,:～,,,;!,,, ，:～,,,,,:;,,,,;;，,,,,,,,,,,,,,;:,,,::;,,,;,,,,;,,,～,;,;,:,,;,,;,;,;,;:,;,,,,,!,,,,,!!, ～::,;,:,,,;,,,,:,,,,,,,,，，，,,,:,，,，,,,，，,:,,～;,;,～,,,,～:,;,,～,,,～; ,,:;,,::～,,,;,,!,!,,γ ，,,,～,,,，,,,～,,,,,,,,:,,,,,:,;,,;,;,,:,,,～::,;,:,,,;,,,,:,,,,，,，,～,～,,:,,,:～,,!,,!!,!,,γ ～,～;,,;,;,,:,，，,:::,,,;,,,,～,～;::,,,:,,:～,,::～,,,;,,,,～,,,,,;,,;,:,,,～,:,,;,,～,,,,,,,!,, ,:,;,，,,,,,:,,;,,～,,，,,,:,～,～,,,～:;,,:,,,,,::～,,,,～,,,,,～;,,,～,,,,,,,:;,,!,,! ,,,,,,,:,,,～,～,,～:;,,:,,,,,，,,,,;::,,,,,,,,,;,:,,,～,，,，,,,,,γ 收 稿 日 期 ,,修 回 日 期 ,,:,,:,,:,:,,,,,,,,,, ,,,,,,,基 金 项 目 国家自然科学基金项目 国 家 重大转基因专项 农 业部公益性行业专项子项 ,:,,,,,,,::,,,:,::,,,,,, ,,,,,目 国家生猪产业体系建设专项 ,:,::,:,::,:,,,,,,, ,,,，，，，，。 ，,作 者 简 介 周 业 飞 男 江 苏 沭 阳 人 讲 师 博 士 生 研究方向为动物传染 病 防 制 通 讯 作 者 ,,,,, ,;,:,,, , ，,,,,,,,:,，,,,,,,,,,,,,,,,～,;,～,:, ,猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒 。引物由上海英 骏 生物 技 术 有 限公司合成 :,:,,;,;,:,～:,,, ，,可 引蛋 白 基 因 特 异 片 段 的 扩 增 与 克 隆,,, :,,,,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,,,,,,,!! ，起 怀 孕 母 猪 繁 殖 障碍和仔猪呼 吸 道症状 已 给 我 国 用 毒 株 感 染 细 ,,, ,,,,, ,,:,:, ,,,:, 。，养 猪 业 带 来 了 极 大 的 经 济 损 失 属 动 脉 炎 胞 ,,,,, ，，，当 细 胞 病 变 达 时 收 毒 冻 融 次 后 离 ,,, ,, :，，病 毒 科 成 员 基 因 组 为 单 股 正 链 大 小 约 ,，,,, 心 ，,,，含 有 个 开 放 阅 读 框 其 中 ，,, :,,,:,,,:，。 沉 淀 细 胞 弃 上 清 沉 淀 的 细 胞 用 ,,，,:， ,;,，编 码 种 结 构 蛋 白 编 码 产 物 为 一 聚 , :,,,, , , ，合 蛋 白 可 被 裂 解 自 身 编 码 的 蛋 白 酶 切 割 成 个 非 ,:，试 剂 充 分 重 悬 然 后 参 照 该 试 剂 盒 说 明 书 进 ;,,,,,，结 构 蛋 白其 中 和 都被分别裂，,,，,,, ，,,, 行、、， 存 在 和 解成 ，,,,，,,,，,,,，,,, ，,,,αα ββ,,,,,，。 提 取 获 得 感 染 细 胞 总 按 照 较 多 。,,,:,,, ,，,,类 型 的 部 分 缺 失 现 象编码的聚合,:,,,, 蛋白 ，组 质 粒 利 用 与 双 酶 切 对 重 组 质 粒 进 行 鉴 ,,:, ，定 ,则 被 切 割 为 个 非 结 构 蛋 白 , ，,,, ,,鼠 源 反 转 录 酶 和 聚 合 酶 的 说 明 : 。,，, ,,,，, 送公 司 测 序 , ，,,,,,:;,, ,,,。书基 因 重 组 腺 病 毒 载 体 的 构 建 与 鉴 定 ,,, :,,, 。 进 行 利 用 小 量 胶 回 收 试 剂 盒 纯 化 用 公 司 的 质 粒 提 取 试 剂 盒 对 重 组 感 染 机 体 的 过 程 中 至 少 有 种 病 毒 蛋 白 ,,,:,,:,,，,,，， ,,,,, , , 。 粒 进 行 纯 化 纯 化 后 质 :,,，,,, ,～～,,,;,,,，，产 物 以 为 载 体 按 常 规 方 法 构 建 调,～～,,,;:,, ,, 的 质 粒 用 限 制 性 内 切 ,～～,,,;:,,，,,,,,,,,,? 重,、、节 机 体 固 有 的 免 疫 反 应 即 和 ，，,,,，,,, 酶 ，完 全 酶 切 线 性 化 经 凝 胶 回 收 试 剂 盒 回 ,，, ,，其中 可通过阻断和 干 扰 素 启 动，,,,,，,,,，,,, ，收 双 ，,。 蒸 水 溶 解 使质粒浓度约为 线 ,::,，,μ，,子活性在细 胞 核 内 降 解 :,，,::,,:,,,,;,:,,;!, 与 腺 病 毒 骨 架 载 体 ,～～,,,;:,,，,,,性 化 的 ,,,,,，结 合 蛋 白从 而 抑 制型 干 扰 素 分;,;,;,,,,,,,,,? ,,，,,!, ,,,。，泌分为 美 洲 型 和 欧 洲 型 个 血 清 型,,,,, , ，通过 电 转 化共转化大肠杆菌 于 含 ,,，,,,,,: , 美 ,，抗 性 平 板 上 培 养 提 取 质 粒 并 ，, ,， ，,,,μ，洲型 又存在多 个 基 因 亚 型其 致 病 作 用 存 在,,,,, 用 。，较大差异年 我 国 出 现 高 致 病 性 人 工,::, ,,,,, 质 粒 转 染 ,,,。酶 切 鉴 定 ,,,?,,,,,，感染猪死亡率超 过 其 致 病 机 制 尚 不 十 分 清,:,， 大 量 提 取 质 粒 经 酶 切 纯 ,,，,,, ,,,,,? 。，楚本研究采用腺病毒表达系统获得表达高致病性 ，化 按 试 剂 盒 说 明,,,,,,,,,,,,,,,;:,,:,,;,;,,, 材 料 与 方 法 ,,,，重 组 腺 病 毒 经 小 鼠 免 ,,,,, ，,,, ,,,，,,,,。 、,书 转 染 细 胞 于 ,，，，,,,, ,, ?,: ,，， :, 疫 ，。试验证实存在免疫抑制作用，,,, :、、，，。细 胞 毒 株 质 粒 和 菌 株 温 箱 培 养 待 出 现 细 胞 病 变 后 收 获 病 毒 ,,,,,,: 高 致 病 性 毒 株 由 笔 者 所 在 实 间 接 免 疫 荧 光 试 验 ,,,,, ,,:,:, ,,, ，按 常 规 方 法 在 一 长 满 细 胞 的 孔 板 上 接 ,,,,,。 、、验 室 分 离 保 存 细 胞 ,,,:,,, ,～～,,,;:,,,,, ，，种 重 组 腺 病 毒培 养 冷 丙 ,,,，,,,,,?,,,,～,:,和由 笔 者 所 在 实 验 室 保 存 , ,,，,,,，,,α ,! ,，,,酮丙 酮 双 蒸 水固 定 室 温 干 ,:,,:,,? ,:,,,细 胞 和 细 菌 购 自 ，，，,,,, ,，,,,, ,,,:;,; ,,，燥 后 加 入稀 释 的 抗 小 鼠 ,,:,,,,, ，,,,?公 血 清 ,司 提 取 试 剂 盒 购 自 ,，, ,,，,:， ,;;,,, ，,,,用 原 核 表 达 产物免疫小鼠制备 的 多 ,,,,, ，,,, ,，,，克 隆 抗 体 笔 者 所 在 实 验 室 保 存 温 育 ,, ? , : ,公 司 反 转 录 酶 购 自 ,,,,:;,,,，, ,,:,;, ,洗 涤 后 加 入 稀 释 的 羊 抗 鼠 ,,,,,,,?,:: ,，,:，,, ，公,，。温 育 于 荧 光 显 微 镜 下 观 察 ,,?,:,,, ,、、司 聚 合 酶 购 自 大 连 宝 生分 析,,,，, ,,,,,,?? ,,,,,,,,,,,:,,:, , ,物 工 程 有 限 公 司 质粒提取及凝胶 回收试剂盒购自 原 核 重 组 蛋 白 经 引 物 的 设 计 与 合 成 ,,,,, ，,,, ,,,,,,， ,,,,根 据 高 致 病 性 毒 株 基 因 序 列 ,、 上 海 生 工 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司 ,,,,, ,,:,:, ,,,,,,电? ，、设 计 了 对 针 对 基因的特异性 引 物 在 上 下 ,，,,,。购 自 公 司 ，，,,:,,,,泳 后 转 印 至 膜 上 以免 疫 小 鼠 血 ? ，: ,,,，,,, ,， 游 引 物 上 分 别 添 加 了 和 酶 切 位 点 ,,,,,,,? ? 清 ,,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,，,,,,,′,，为 一 抗 羊 抗 鼠为 二 抗 进的 行 测 定 蛋白重组腺病毒 ,,,，,,，, ,;,,;,,,,::,,, ,,,,,,,:,，,,,:,,,,,,，,,,,,,,,,,,′′, ,,用 维 持 液 将做倍 梯 度 稀 ,,，, ,,,，,,,,:,,下 划 ,:,,,::,,,::,:,,,,,,:,,,′, , ，释 分 别 接 种 于 长 满 细 胞 单 层 的 孔 细 胞 培 养 ,,,,,线 处 分 别 为 和 ,,,，，。,? 酶 切 位 点 预 期 扩 增 分 析 同 时 设 空 载 体 菌 液 作 为 对 照 ,,,,,，,,,,?,,, ，，。板 每个稀释度 接 种 孔每 孔 接 种 同 时 , ,::，μ。片 段 长 度 为 ,,,,,,设 ，。、,重 组 穿 梭 载 体 经 定加入 维 持 液 的 空 白 对 照:,,，,,, ,,:,,,～～,,,;,, ?,:,，，::,,,,, 培，,,，双 酶 切 鉴 定 结 果 见 图 显 示 获 得 ，,,,,,,?? ，，。养逐日观察病变按 法计算 ,;;,,～;,:～,:，,，。 ,一 约 的 片 段 与预期片段大小相符 测 序小 鼠 免 疫 试 验 ,: ,,,,,,,,, ，将 只 雌 性 小 鼠 随 机 分 为 组 每 组 ,, ，:, , ,，。结 果 证 明 克隆入 的 外 源基 因完全符合阅读框规则 。，, 只 第 组 接 种 重 组 腺 病 毒 第 组 ,,,,，,,,, ,与 腺 病 毒 骨 架 载 体 ,～～,,,;:,,，,,, ,,, ,,，种 野 生 型 腺 病 毒 第 组 接 种 营 养 接 ,,,,, ，在 大 肠 杆 菌 内 重 组 获 得 重 组 腺 病 毒 质,,，,,,,!, ，，液 作 为 对 照 组 每 组 背 部 皮 下 注 射 ,,，, ，,，粒 大 小 约 经 酶 切 鉴 定 出,,，,,,,:，,,,,,,? ,，只 首 免 后 第 周 再 按相同剂量加强 免 疫 :,, ,，,,,。现 和 个 条 带见 图 ,,，,,,:，,,,, ， 、次 于 首 免 后 第 和 天采 集小鼠脾细胞, ,,,, ,, 用于淋 。巴细 胞转 化试验和 细胞因子的 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 淋 巴 细 胞 增 殖 试 验 ,,,: 脾 淋 巴 细 胞 的 制 备 将试验小鼠摘除眼球 ,,,:,, ，，,放 血 后 颈 椎 脱 臼 处 死 浸 泡 于 酒 精 中 ,,:,，， , ,，无 菌 取 出 脾 将 脾 置 入 滤 布 缝 制 的,,,:,:,,,, ，,小 袋 中 研 磨 脾 制 成 单 细 胞 悬 液 取脾淋巴细胞悬液 ，小 心 沿 侧 壁 加 入 到 玻 璃 离 心 管 中 ,,，,: ,， ,,图 的 酶 切 鉴 定 和 阳 性 质 粒,,,,,,,:,,,,,,:,,, ,,,,, ，,淋 巴 细 胞 分 离 液 之 液 面 上 以 , ,， ,:::,,,, ,, 的 酶 切 鉴 定 ,离 心 ,,,, ,,,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,, ,,,,, 收 集 上 层 与 淋 巴 细 胞 分 离 液 下 层 ,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,? ,,,,,，两 相 界 面 上 的 细 胞 白 色 云 雾 层 放 入 新 的 ,:,， ,,,,、,双 酶 切 产 物 分 子 质 量 标 准 ,,,,,，, ，,,,,,,,,～～,,,;,, ,, ,,，,,的 酶 切 产 物 空 质 粒 对 照 玻 璃 离 心 管 以 离 心 吸 去 上 清 :,, ，,,,,,,,,,:::,,,, ,:,,,,,,,,,,,,，,:::,，, ,,,，;,,,,:，,,，, ,,,，;,,,,:,～:,,,:, ，，液 沉 淀 经 反 复 洗 涤 次 即 得 所 需 的 淋 巴 细 ,,, , ,, ，,,,,,;,,;,,,,～,,,,,,,,,,,,,? ? ,;::,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,:,～:,,,:,,,，,,,,,;,,;,,,,～,,,,，,,,,? 胞 细 胞 计 数 后 用 完 全 培 养 基 调 节 细 ,～～,,,;,,,，,,,: ,,,胞 密 度 至将 细 胞 悬 液 加 到孔 细 胞 板 ,×,:,，,,,,参 照 文 献 的 方 法淋 巴 细 胞 增 殖 试 验 ,,,,:,, ，,。中 孔 ,::， 。 对 其 稍 作 修 改 进 行 淋 巴 细 胞 增 殖 试 验 将 纯 化 重 组 腺 病 毒 的 鉴 定 μ ,,,的 ，将 重 组 质 粒 线 性 化 后 转 染 细 ，,,, ,,, ,,,,抗 原 用 完 全 培 养 基 调 节 至 ,,,,, ,,,，,,,: ,: ，，，胞 培 养 出 现 细 胞 病 变 将 收 获 的 重 组 腺 病 ,,,:,，，作 为 刺 激 抗 原 每 孔 加 入 对 照 孔 ，,， ,::,，，毒 命 名 为 鉴 定 结 果 表 明 该 腺 病 毒 μμ,,,，,,,，,, , ，入完全培养基各做个重复,,。 加 ,::，,,,，,,,:,能 够 正 确 表 达 蛋 白 见 图 将 该 ,,,,, ，,,, ,μ 。，孔病 毒 在 细胞连续传代到第 代 的 ,,, ,: ,,,，,,, ,,,:，，,。 培 养 然 后 每 孔 加 入 效 价 稳 定 平 均 为 将 原 核 表 达 ,, ? ,,～,: ,:，,,，， ,,,,:,: μ，的 蛋 白 转 印 至 膜 上 用 免 疫 ,，,,,，: ,,,，,,, ,,，。，,, 继 续 培 养 吸 弃 培 养 液每 ,,，,,? ,,～, ，，的 小鼠血清作为一抗 结 果 显 示 被 ,,,,, ，,,, ，，孔 加 入振荡溶解结晶测定 ,::，,,,:,,,:,, μ,,自 身裂解酶裂解成 大 小 分 别 为 和 ,:，～，,,,,, α,,,，刺激指数刺激孔 未刺激孔 ，,,,,,, 细 胞 因 子 的 测 定 值计 算 ,,:,,,,,,,,，条 特 异 性 条 带 而 空 对 照 则 没 ，～，,,,, ,,,, 。β, ,,:,, 、，按淋 巴细胞增 殖试验培养细胞 加 入 刺 激 抗 原 ,,。有见 图 , ，培 养 后 收 集 细 胞 上 清 采 用 鼠 及 ,:,,～，,，，，,γ , 小 鼠 免 疫 后 淋巴细胞增殖指数 的 测定 ,,, , ,,检 测 试 剂 盒 公 司 产 品 测 定，，，,, ，,,,,,:;, , ，免 疫 后 第 和 天 采 用 法 测 定 ,, ,, ,,, , 。及含 量 ，,，,:，，,γ , 淋 ，,,，巴 细 胞 增 殖 指 数 结 果 见 图 显 示 ,,,,，,,, , 数 据 处 理 与 统 计 分 析 ,,,,,,淋 巴 细 胞 增 殖 指 数 显 著 低 于 组 , ,,,,,, ，，应 用 软 件 对 数 据 统 计 分 析 进 行 方 差 ,,。,,,,组或 ,,，, ,:,:,, 分 ’，析 及 多 重 比 较 以判定各组之间的差,～,:,,,结 果 ,。异 淋 巴 细 胞 上 清 中和水 平 的 测 定 ,,,,,:,:,,,γ , 重 组 腺 病 毒 质 粒 的 构 建 与 鉴 定，， 免 疫 后 第 和 第 天 取脾淋巴细胞培养 经,,,,,:,,, ,,,,,, 将 扩 增 产 物 克 隆 入 穿 梭 载 体 ，抗 原 刺 激 采 用 测 定 培 养 上 清 ,:, ,～～,,;,,,,,, ，，，,, 和含 量 。 结 果 ,见 图 、,显 示 ，,,:,: ,,,,,，，,γ ,, 组 水 平 均 显 著 低 于 或 ，,,, ，,，,,,, ,,，,γ , ,,，组而 显 著 高 于 或 ,:,:,，，,: ,,,, ,,，,, , ,,。组,:,:,, 图 免疫小鼠淋巴细胞上清含 量 的 法 检 测,,,:,,,,, ,γ ,,,, ,:,,,,,,,,,:,,:,,,:,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,γ, ,,:,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,, ,,,,,,,,:,,,,,,, 图 重 组 腺 病 毒 的间接荧光试验鉴定 ,,,,:,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,:,:,,,,:,,,,,,,,,, 图 免疫小鼠淋巴细胞上清含 量 的 法 检 测,,,,:,,,,, , ,,,, ,:,,,,,,,,,:,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,, 的 分 析图 重 组 腺 病 毒 ,,,:,,,,,,,,,,,,:,, ,,,,:,,,,,,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,, , ,,,, ,,,,,,,,,,,,:,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,:, ,,, ,,,,,,,,:,,,,,,,, ,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,:。基 因 容 易 在 猪 体 持 续 感 染,,,,, ,,,,, 变 ，异 不 同 分 离 株 对 的 抑 制 作 用 也 有 所 ，,，,α 不非 结 构 蛋 白 可 显 著 抑 制 型 干 扰 素 的 分 ，,,, ? ,,,, ,,,,。泌 。，，同近 年 来 等发 现 美 洲 ，型 高 致 病 性 致 病 作 用 明 显 增 强 但 其 致 病 ,;～,, ,,,,, ,,,,, 机 。 ，制 尚 不 十 分 清 楚 本 研 究 采 用 重 组 腺 病 毒 技 术 获 ， 得 表 达 蛋 白的重组腺病毒 小 鼠 ，,,, ,,,，,,,, ，免 疫 试 验 证 实 能 显 著 抑 制 小 鼠 淋 巴 ,,,，,,, ,图 法检测小鼠淋巴细胞增殖应答反应 , ,,, ，细 胞 增 殖 反 应 和 的 分 泌 但 能 促 进 ,,,, ,,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,, ,:,,,,,,, ,,,,,，,，,: ，，,γ , ,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:,,,，的 分 泌 表 明组 细 胞 免 疫 水 平 明 显 降 ,,,，,,,,,,，,不同字母表示差异显著 相同字母表示差异不显著 ,:,:,,,,在 高 致 病 性 的感染致病中 ，低 提 示 ，,,,,,,,, ,，下 同:,:, 起 着 重 要 。作 用 ,,，,,,,;,;,,,;,,;,,;,,,,,,,,,:,,,,,,,;,;,:;,:,:,,,,,～;,,,; ,,,,,,,,,,,:,,:;,:,:,,,～;,,,;,,,～;,;,:,,,, ;,,;,,;,,,,:,病毒非结构 蛋白 主 要 编 码相对保守病毒的 复 制 ，酶 复 合 物 是 刺 激 细 胞 免 疫 和 宿 主 先 天 性 免 疫 的 ,,,,。要 病 毒 组 分是 一 个 多 功 主 ,,,,, ，,,, 讨 论 ,,,,,，，能 蛋 白 其 结 构 不 一 细 胞 胞 内 的 浓 ,，,,，,,,。 于 其 他 非 结 构 蛋 白与 相 ，,, ，,,, ，度 要 高似 是 该 病 毒 复 制 过 程 中 第 一 个 产 生 ,,,,, ，,,,是 影 响 世 界 养 猪 业 的 重 要 病 原 之,,,,, ,,,,,的， 一但 感 染 致 病 机 制 仍 不 是 十 分 清 ,,,,, 。病 毒 蛋 白 该 蛋 白 包 含 个 木瓜蛋白样半胱氨 酸 蛋, ,，。白 酶 和 楚 ,,,,,,，; :,,;,,; ,:,;,,;,,:,,α,,!, ,,,,，,，大 量 研 究 报 道 证 明 感 染 猪 体 后 引 起 型和 一 个 锌 指 结 构其 大 小 分 别 为 ,:,,:，～,,,,, ? β ,,,，;,:,,,,,,,;,,,;,,,,,;, ,,:,,:;,,,,,;,,;,,:;,:,, ,,,,,,,。 和 本 研 究 克 隆 获 得 的 高，,,,,,，～，,,,α β ，,,,,,,,,～:,～,,,,:,;,,,:,, ，:,,～ ,,;,,:,,,,,,,, :,,, ，，致 病 性 基 因 序列测定结果表明 该,,,,, ，,,, ,,:,:,,;,;,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,，,,,,:,,,,!!, ，基 因 编 码 个 氨 基 酸 残 基 重组病毒感染的 ,,, ,,, ，，,,,:,::,,,,,,,:,,,,,,, 细 胞 中 表 达 的 也 可 以 形 成 个 不 同 大 小 的 蛋，,,,, ,, ，，，,，，,，, ,，，,，, ,，，,,,,,,,;::,,,,,,,,,;,:,,,～,;,, ，,,。白 其 大 小 与 和 相 似见 图 ，,,,，,,,,α ,;,,,,,,,,,,,,～,,:,,:,;,,,:,:,:,,;,;,:,～:,,,;,,,,,,,, β ,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,,,,～:;,:,～～～,:,,,,,,:;,,,;,,，,,,!! 最 近 的 研 究 表 明 用 和 刺 激 ,,,，, ,，,,α ,,,,;,,,,～,;,;,:,,;,,, ,,:;，,,,,,,,,,:,,,,,,:,, ，时 ，，,,,,,,,,:,,::,,,,,,,,,,,,:, 能 显 著 降 低 的 活 性 而 抑 ,,,,, ，,,,, ，, ,ακ,, ，，，,，，, ,,,，, , ，,,，, ,,,,,,，,;,;,:;:,,～,～,,, ! 制 ,,～:;,,::,:,,;,;,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,,,,,!!, ，，启 动 子 活 性 从 而 抑 制 的 分 泌 证 明, ,，， ，,， ，,，,,～,,,,～; ,,,，,,,;,,,;,:,:,:～,,,,,,， ,,,,: ,::, ,, β ,,,,,,,,,,,, 在 感 染 机体过 程 中起着重要的 免 疫，,,,,,,,, α ,,,, ，，，,,,:,，，,,,， , ，,，,,,, ,,,,:，,,,，,,，,,,,,, 。 ，调 节 作 用另 据 报 道 可 通 过 抑 制 ，,,,，,,, β,～;,,,;,,:,,:,:,:!,:,,,,,,:,，,,,,～,;,,,,～,～;,～:,;～, ，的 活 性 来 抑 制的 启 动 子 活 性 从 而 下 调，,，，,，,, β ,,，，,,,,,,,，,,,,,,,,,,::,,,,,,,, ，的 产 生 表 明 在调节 固有免疫应答中起到 ，,,, β β ,, ，，,,，，，, ,,:，:,,，,,，，，，，,:，，，,,,,,:,:,,;,;, ,,,,。，重 要 的 作 用此 外 在 宿 主监 视 系 统，,,, ，,， ,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,,,;,,,,:,,,;,,,,,;,,,!! ,,,,,,。 ，,,,,,,,,:,,,;,,;,:,～;,:,;,，,,,,,,,,,:,,,,,,:中 也 起 着 重 要 的 作 用本 研 究 结 果 表 明 ,,!, ，,,, ，，,,,,,,:,,::,,:,,,,,,,,,,, ，能 显 著 减 低 的 分 泌 但 和 在，,，，,,,，,,,,γ α β,,参 考 文 献 ,,,,,,,,,,,, ，，，,,,，,,, ， ，,,,，,,, ，，,:， ,,,,,,,:,:,,;,;,:,, 。机体 获得 性免疫应 答中的作用尚待进一步研究 ,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,,:,,,,～:,～,,,,:,;,,,!!, ,,，，，:，，，,，，,，:, , ,,:,，，, ,,:,, ,,,,,,，,,:;,,, ,,:,～,,,;,～:,,,,,,,;,,,～,;,;,:,,;,,,,,:,,,,,,!,, β ,,,,:,:,,;,;,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,,,,,,,!! ,,，，,,,，,,,,:,,,,,,:,，,:,,,:,,:,:,,,,,,,,,,,,, ,,～,;,,,,,,～;,,,,,,,;,,:,,～;,;,,:,,;:,,:,!,,,!,,,,!, ,, ，，，,,，，, , ,:,，,，,,，,:，,，, ， :,,,,,，,,;,,,:,, ,,，，,;,,::,,,,,,,:,～,,;,:,,:;,,;,,:;,，,:,,,:,,::,,,,,, ,,,,,,,,,,,!:,,:,;,,,,,,,,,,;,,;,,,,:,,,,:,,:,:,,;,;, ,,,,,,,:,,,,,, , ,,,,,,,, ， ,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～, ,,,,,!!，，，,, ,,,:,,，,,,,,,,:,::,:,,,,,,,,:,,,,:,:,,;,,,， !, , ,,,,,;,,,;::,,,;,,:;,,;,,:;,:,，,,,:,;,,:,,:～,,;,;,,,,,, ，，,,,,,,,,,,,::,,,,,,,:,,,,,, ,,,,,,:,:,:,,;,;,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,,:,;,,,～,,,,!! ,, ，,,,，，,, , ,,，，，,，, ，，,，～,,;,,,;,,,,,,,,～,,:,,,,～:,, ,,，，,,,,,,,,，,,,,,,,,,,::,,,,,,,:,, ，,～,,,,:,;,,,,,;,,;,,,,,,,:,:,,:,,,,,,,～,;,:,,: ,,,,, ,, ，，,，,，，,,，, ,,,,,，,, ，,,::,,;,;;,:,;,,,,,,,,,! ，，,,,,～;,,,,,,;,,:,,,,,～,～;:;,,～,,,,,,,,:,,,,:,::,,:!,,, :, ,,，,,,,,,:,,,;,:,:,:,,;,;,:,～:,,,;,,,,;,,,,,:,,,,! ,,，，,,,,:,,::，,:,,,,,,:,,::,,,,,,,,,,,,,,, ,,，，,,,,,,,,:,;,,,～,，,,,,,,,,,,::,,,,,,,,,,,,,,! ,, ，，，,,,，,，, ,，:，，,，，,，,,,,,,，:,，,,,,,,,:～,:,,,～, ,, ，，，,，，, :,,， ,，,，, ,,,,,,,:,～,,,,:,:,,;,,,;,,;,,!,? 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