稻草秸秆中木质素纤维素测定方法的研讨

稻草秸秆中木质素纤维素测定方法的研讨稻草秸秆中木质素、纤维素测定方法的研讨薛惠琴　杭怡琼　陈　谊 (上海市农业科学院畜牧兽医研究所　201106) 　　测定木质素、纤维素含量的方法很多 ,如纤维素含量的测定方法有浓酸水解定糖法、硝酸乙醇法、氯化法等 ;木质素含量的测定方法有浓酸水解法、紫外分光光度法、红外光谱定量分析法和同位素标记法。由于红外光谱法和同位素标记法对实验室要求较高 ,所以应用并不普遍。我们常用的是浓酸水解法。本试验应用中性洗涤剂法、2M HCl 水解法、72 % H2 SO4 水解法及灰化法综合运用 ,一次...

稻草秸秆中木质素、纤维素测定方法的研讨薛惠琴　杭怡琼　陈　谊 (上海市农业科学院畜牧兽医研究所　201106) 　　测定木质素、纤维素含量的方法很多 ,如纤维素含量的测定方法有浓酸水解定糖法、硝酸乙醇法、氯化法等 ;木质素含量的测定方法有浓酸水解法、紫外分光光度法、红外光谱定量分析法和同位素标记法。由于红外光谱法和同位素标记法对实验室要求较高 ,所以应用并不普遍。我们常用的是浓酸水解法。本试验应用中性洗涤剂法、2M HCl 水解法、72 % H2 SO4 水解法及灰化法综合运用 ,一次性进行木质素、纤维素的测定 , 并将灰化时间缩短至 3h ,所得结果较为准确。现将方法介绍如下 : 1 　材料与方法 1. 1 　材料稻草经机器粉碎成 1cm 长细秸 ,粉碎成 1cm 长稻草粉分别经 Z17、921 和 1024 三种白腐真菌菌株发酵 , 每周取样一次 ,共 7 周。 1. 2 　主要试剂中性洗涤剂 :按 Van Soest 方法配制 ; 2M 盐酸溶液 :167ml 浓盐酸 (比重 1. 19) 用蒸馏水定溶至 1000ml ; 72 %浓酸溶液 : 665mlH2 SO4 (比重 1. 84 ) 加入 300ml 水中 ,冷至 20 ℃,补加水至 1000ml。 1. 3 　方法取经 80 ℃3h 烘至衡重的三个菌株各 5g。 1. 3. 1 　取 1. 0000g 样品置于 100ml 碘瓶中 ,加入 70ml 中性洗涤剂 , 之后放入已沸的高压锅 , 100 ℃保温 40min ,115～121 ℃保温 20min ,取出用 3 号 30ml 沙芯坩埚过滤至 p H 6. 5～7. 0 ,依次用 95 %乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤 2 次 ,将残渣置真空干燥器中 ,干燥 20min。 1. 3. 2 　将残渣连同坩埚置于 100ml 烧杯中 ,加入 70ml 2M 盐酸溶液 ,然后放入已沸的高压锅 , 100 ℃保温 50min ,过滤至中性 ,依次用 95 %乙醇、无水乙醇和丙酮洗涤 2 次 ,残渣 80 ℃烘至衡重为 W1 。 1. 3. 3 　将残渣连同坩埚置于 150ml 烧杯中 ,加入 10ml 致冷的 72 %硫酸 ,20 ℃降解 4h ,后加入 90ml 蒸馏水 ,室温过夜 ,次日用蒸馏水洗残渣至 p H 6. 5 ,烘干至衡重为 W2 ,W1 - W2 为纤维素的含量。 1. 3. 4 　将残渣在 550 ℃马福炉中灰化 ,干燥器中平衡至衡重为 W3 ,W2 - W3 即为木质素的含量。 2 　结果与讨论本测定方法是在原有方法基础上加以改进 ,按照王玉万 (1987)半纤维素、纤维素、木质素系统定量分析程序方法 ,纤维素测定前两步同上面方法 (1. 3. 1、1. 3. 2 ,1. 3. 3) 采用丙酮洗 2 次 ,60 ℃干燥 ,然后置入 100ml 烧杯 ,加入 10ml 72 % H2 SO4 , 20 ℃水解 3h ,然后加入 90ml 蒸馏水 ,室温过夜 ,次日用已称恒重的 3 号砂芯坩埚过滤 ,水洗残渣至 p H 6. 5 ,将滤液经适当稀释 ,取 1ml 稀释液加 4ml 蒽酮试剂 ,100 ℃保温 10min ,于 620nm 测 OD 由葡萄糖标准曲线求出糖量 ,乘上系数 0. 9 ,求得纤维素 ,将残渣 80 ℃烘干 ,干燥器冷却 30min ,称重 ;在 550 ℃马福炉中灰化 4 小时 ,干燥器冷却 30min ,称重 , 前者称重数减去后者称重数即为木质素含量。而经我们改进后的方法就直接按上面方法 (1. 3. 3 ,1. 3. 4) ,所测结果见表 1。表 1 　三个菌株在不同培养时间的木质素　　　　　　　　　　　　　和纤维素的含量　　　(单位 : %) 菌株 0 天 7 天 14 天 21 天 28 天 35 天 42 天 49 天木 Z17 16. 63 13. 76 12. 78 12. 01 11. 59 11. 02 10. 34 9. 89 质 921 16. 63 14. 04 13. 19 12. 68 11. 98 11. 18 10. 73 10. 3 素 1024 16. 63 14. 43 13. 58 12. 59 12. 05 11. 42 11. 02 10. 87 纤 Z17 30. 35 28. 74 26. 96 25. 86 24. 99 24. 29 23. 92 23. 12 维 921 30. 35 28. 73 26. 56 25. 21 24. 26 23. 85 23. 42 22. 72 素 1024 30. 35 28. 62 27. 56 27. 06 26. 62 25. 88 25. 5 25. 03 　　三个菌株的木质素由接种前含 16. 63 %经 49d 培养分别减少至 9. 89 %、10. 30 %、10. 87 % ,纤维素含量由接种前含 30. 35 % 经 49d 培养后分别减少至 23. 12 %、22. 72 %、25. 03 % ,说明木质素、纤维素含量都明显减少 ,同我们以往所做的分析结果基本相似。并且有以下几方面优点 : ( 1 ) 节约试剂 : 按照王玉万 (1987)方法 ,纤维素含量的测定需要蒽酮试剂 ,并且蒽酮试剂需要现配现用 ,相对来说我们的方法比较简便 , 同时减轻了工作量 ; (2) 减少人员 ,节约电源 :王玉万的方法灰化需要 4h ,现在只要 3h 就可灰化好。而且所测结果同以往我们所做的分析结果基本相似。说明在不考虑酸溶木质素含量和不需了解培养物中木质素、纤维素的绝对含量时 ,本测定方法是可行的。 ·51·《上海畜牧兽医通讯》　2001 年第 2 期

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