2、动物性食品中受体激动剂残留测定的
标准
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操作程序（GC/MS法） 动物性食品中受体激动剂残留测定的标准操作程序（GC/MS法） 1适用范围 本程序
规定
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了动物性食品中10种受体激动剂残留的气相色谱—质谱仪测定方法 本程序适用于动物性食品中10种受体激动剂残留的测定。当试样取5.0g时，本方法10种受体激动剂的检测限为 0.5μg/kg。 2 原理 本方法采用β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶解动物组织，然后通过固相萃取柱净化，用双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）衍生后采用GC/MS测定动物组织中10种受体激动剂残留，同位素内标法定量。 3 仪器、设备与试剂 3.1 仪器和设备 3.1.1 气相色谱质谱仪。 3.1.2 漩涡混匀器。 3.1.3 氮吹仪。 3.1.4 具塞刻度试管：10 mL。 3.1.5 固相萃取仪。 3.1.6 离心机: 最低转速8，000 r/min（最好冷冻） 3.2 试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯。 3.2.1 甲醇。 3.2.2 盐酸。 3.2.3 正己烷。 3.2.4 乙酸乙酯（色谱纯）。 3.2.5 氨水（分析纯，要求新，没有开封过）。 3.2.6 无水硫酸钠，于450℃灼烧4 h，冷却后贮于干燥器中备用。 3.2.7 特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、马布特罗、西马特罗、班布特罗、克仑潘特、苯氧丙酚胺、卡布特罗；莱克多巴胺标准品。 3.2.8 D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺（D6-莱克多巴胺）内标。 3.2.9 β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶购自Sigma或者MERCK(产品型号1.04114.0002)； 3.2.10 双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA） +1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）。 3.2.11 SLW 固相萃取柱规格为500mg/6ml（杭州福裕科技服务有限公司）。 3.2.12 受体激动剂标准储备溶液：分别称取各种受体激动剂标准品10mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在-18℃冰箱中备用；受体激动剂混合标准使用液用甲醇稀释至0.1 mg/L。 3.2.13 D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺（1.0mg/L）受体激动剂内标混合液：使用时用甲醇稀释储备液至1.0 mg/L混合液。 4 样品处理 4.1 样品采集、制备、保存 动物组织(包括肌肉、肝脏、肾脏、肺等)采集200_500g,取肌肉部分用组织捣碎机（或者榨汁机）绞碎，四分法取50—100g，放在具塞玻璃瓶或者食品袋中，贴上标签后，放在-18℃冰箱冻藏。 4.2 样品酶解 称取5.0g经绞碎均匀的动物组织于50mL离心管中,分别加50μL 1.0 mg/L受体激动剂内标混合液，静置10min，加入15ml0.2mol/LpH5.2乙酸钠-醋酸缓冲液，用匀质机匀质20s，加入50μLβ-葡萄糖醛苷酶／芳基硫酸酯酶液，在37℃水浴中水解16h后取出冷却，8，000 r/min离心10min，分出上层溶液，（注意如果液面有脂肪析出，可以用棉花过滤）用2.0mol/盐酸溶液调节至2.0±0.1(pH测定仪)，再在8，000 r/min离心10min，分出上清液待用。 4.3 样品净化 取SLW（或者SLS）固相萃取柱，先用水5mL、甲醇5mL、水5mL、40mmol/L盐酸5mL活化柱子,然后将10mL上清液加到柱子上过柱,再用5mL水、5mL甲醇洗脱淋洗除杂，真空泵抽干5min，然后用10ml4%氨化乙酸乙酯（现配现用）洗脱收集，在50℃水浴中氮气吹干。 4.4 样品衍生 蒸发剩余物加0.1mL甲苯（色谱纯）、0.1mLBSTFA +1%TMCS，在80℃的烘箱中加热衍生1.0h。另外分别取标准溶液，加50μL内标使用液，氮气吹干后与样品同时进行衍生化。取1.0μL甲苯溶液进行GC-MS分析。 5样品分析 5.1 色谱质谱参考条件 HP—5 MS 5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)或等同柱；进样口温度: 280℃；柱温:初温100℃，保持3 min，然后以10℃／min升至280℃，保持5min,300℃postrun 5min；载气: 氦气，纯度≥99.999％，流速1 mL/min；进样量: 1-2μL；电离方式：EI源, 70eV。 离子源温度：230℃；进样方式：不分流进样;溶剂延迟：11 min。 5.2 选择离子监测方式:监测离子见下表 参考保留时间及监测离子 化合物 内标 保留时间 定量离m/z 定性离子m/z 检测限 μg/kg 马布特罗 D9—克伦特罗 11.39 86 277、296、367 0.5 特布他林 D3-沙丁胺醇 13.77 356 86、426、370 0.5 D9—克伦特罗 13.78 262 95 卡布特罗 D9—克伦特罗 13.78 325 86、282、308 0.5 克伦特罗 D9—克伦特罗 13.83 262 86、243、277 0.5 西马特罗 D9—克伦特罗 14.00 72 219、276、287 0.5 D3-沙丁胺醇 14.51 372 86、443 沙丁胺醇 D3-沙丁胺醇 14.52 369 86、440、384 0.5 克仑潘特 D9—克伦特罗 14.82 100 262、243、277 0.5 苯氧丙酚胺 D5-莱克多巴胺 17.93 178 267、430、267 0.5 班布特罗 D5-莱克多巴胺 18.98 354 86、282、354、 0.5 D5-莱克多巴胺 20.26 255 507 D6-莱克多巴胺 20.26 256 508 莱克多巴胺 D5-莱克多巴胺 20.26 250 179、267、502 0.5 5.3样品测定 分别取100.0，150.0，200，250，500μL混合标准使用液，加50μL内标使用液，氮气吹干衍生后进行仪器分析，绘制标准曲线；然后进行样品测定，根据标准曲线计算样品中10种受体激动剂含量n。根据受体激动剂保留时间及碎片离子进行定性、定量分析。 6 结果计算 试样中对应10种受体激动剂含量按式（1）计算，结果保留小数点后1位： （1） 式中： X — 试样中对应10种受体激动剂含量，μg/kg； n — 试样中中色谱峰与内标色谱峰的峰面积比值对应的受体激动剂的含量，单位为ng； m — 样品的取样量，单位为g； 7 质量控制 为了保证分析结果的准确，要求在分析每批样品时，进行样品加标5.0μg/kg试验，计算添加回收率，多组分残留测定添加回收率应在60-120%范围之内。 8 谱图 受体激动剂标准及内标总离子流图 1.马布特罗；2.特布他林；3+4 D9-克伦特罗+卡布特罗；5. 克伦特罗；6+7+8. 西马特罗+D3-沙丁胺醇+沙丁胺醇；9. 克仑潘特；10. 苯氧丙酚胺；11. 班布特罗；12+13 D5-莱克多巴胺+莱克多巴胺 动物肌肉空白离子流图 3.D9-克伦特罗;7.D3-沙丁胺醇；12 D5-莱克多巴胺
浙公网安备 33021202002483