粮油检验 小麦粉破损淀粉的测定 α-淀粉酶法（国家标准征求意见稿）

GB/T14990—××××GB/T14990—××××前言本 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 等同采用AACC76-30A（1999）《小麦粉破损淀粉测定》(英文版)。本标准为第一次修订，与GB/T9826—1988相比主要修改如下：——本标准将α－淀粉酶的作用时间由60min调整为15min；——本标准规定了α－淀粉酶的使用量；——新增了淀粉-碘化钾溶液（10%）的配制和应用；——新增了精密度；——修订了破损淀粉值的计算公式。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人：孙长坡薛雅琳陆晖。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T9826—1988。粮油检验小麦粉破损淀粉测定-α－淀粉酶方法1　范围本标准规定了小麦粉破损淀粉测定的范围、术语和定义、试剂、仪器和用具、操作步骤和结果表述。本标准适用于小麦粉破损淀粉的测定。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，但是，鼓励根据本标准达成 协议 离婚协议模板下载合伙人协议 下载渠道分销协议免费下载敬业协议下载授课协议下载 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法AACC80-60（1999）还原糖和非还原糖含量测定3　术语和定义下列术语和定义适用于本标准。破损淀粉damagedstarch小麦中的淀粉颗粒在研磨过程中受到机械损伤而产生破损的淀粉。4　原理在研磨过程中小麦的淀粉颗粒会受到损伤，破损淀粉含量会影响小麦粉的吸水性和面团混合特性。破损淀粉对α－淀粉酶的敏感性大大高于未破损淀粉，在常温下能被α－淀粉酶降解生成糊精和一定量的还原糖。利用此特性，在规定的条件下，用α－淀粉酶降解小麦粉中的破损淀粉，再用铁氰化钾测定还原糖含量，并根据公式计算小麦粉中破损淀粉的百分含量。5　仪器和用具5.1　恒温水浴锅：水温控制30℃±0.1℃。5.2　玻璃试管：φ25mm×220mm。5.3　量筒：25mL、50mL。5.4　玻璃漏斗及中速滤纸（whatman滤纸）。5.5　天平：精确度0.01g和0.1mg。5.6　移液管或移液器：1mL；5mL；10mL。5.7　旋涡振荡器。5.8　pH计或精密pH试纸：可测pH（4.7±0.1）。5.9　秒表。5.10　滴定管：10mL(精度为0.1mL)。5.11　电炉。5.12　锥形瓶：150mL。6　试剂除另有规定外,所使用的试剂均为分析纯。使用蒸馏水，或矿物质含量低于2mg/kg相同纯度的水。符合GB/T6682的规定。6.1　醋酸缓冲液溶解4.1g无水醋酸钠（CH3COONa），再加入3.0mL冰醋酸，用水定容至1000mL，pH为（4.7±0.1）。6.2　硫酸溶液将100mL浓硫酸（H2SO4）加入到大约700mL水中，用水稀释至1000mL，溶液的浓度为3.68mol/L±0.05mol/L。6.3　钨酸钠溶液称取12.0g的钨酸钠（Na2WO4·2H2O）溶于水中，并稀释至100mL。6.4　α－淀粉酶制品由米曲霉（Aspergillusoryzae）制得的真菌酶（活力≥10U/mg）。注：建议采用Sigma公司或其它公司相当的产品6.5　0.1mol/L碱性铁氰化钾溶液称取32.9g干燥铁氰化钾（K3Fe(CN)6）与44.0g无水碳酸钠(Na2CO3)用水定容至1000mL，贮于棕色瓶中避光保存。铁氰化钾溶液标定：准确量取10.0mL的铁氰化钾溶液，并加入25mL乙酸盐溶液和1mL淀粉-碘化钾溶液。滴定至溶液蓝色完全消失。0.1mol/L硫代硫酸钠溶液的消耗量为10.0mL。6.6　乙酸盐溶液称取70g氯化钾(KCl)和40g硫酸锌(ZnSO4.7H2O)于容量瓶中，加入200mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。6.7　0.1mol/L硫代硫酸钠溶液称取24.82g硫代硫酸钠(Na2S2O3.5H2O)和3.8g四硼酸钠(Na2B4O7.10H2O)用水定容至1000mL，贮于棕色瓶避光保存，并标定。6.8　可溶性淀粉-碘化钾溶液用少量冷水调和2g的可溶性淀粉，然后慢慢加入沸腾的水中。待到溶液冷却后，再加入50g碘化钾(KI)，最终用蒸馏水稀释至100ml，并加入1滴饱和的氢氧化钠(NaOH)溶液。7　操作步骤7.1　将醋酸缓冲液（6.1）置于30℃水浴中。称取1.00g（14%湿基）面粉或淀粉样品于150mL锥形瓶中。称取总酶活力大于500U的酶量，加到锥形瓶中，再加入45mL醋酸缓冲液(6.1)。用玻璃棒或旋涡振荡器混匀。从加入溶液(6.1)时起，在30℃恒温水浴中准确保温15min。7.2　保温后，加入3.0mL硫酸溶液（6.2）和2.0mL钨酸钠溶液（6.3）。充分混合，静置2min，然后经中速滤纸（5.4）（Whatman）或与之相当的滤纸过滤，弃去最初8－10滴滤液。7.3　立即吸取5.0mL滤液（7.2）于试管中，做为样品液。7.4　再准确加入10mL0.1mol/L碱性铁氰化钾溶液（6.5），混合后将试管浸入沸水中(可将试管置于铁丝笼架放入水浴锅煮沸的水中，每次可同时做多个样品的测定)，继续加热待水再沸腾后开始计时，准确反应20min后，取出试管立即置流水冷却。冷却后将试管中溶液倒入锥形瓶(5.12)中，并用25mL乙酸盐溶液(6.6)分三次洗涤试管一并倒入锥形瓶内，再加入1mL淀粉-碘化钾溶液(6.8)，并充分混匀，此时呈蓝色。7.5　用0.1mol/L的硫代硫酸钠(6.7)溶液将溶液（7.4）滴定至蓝色完全消失(半分钟内溶液不返蓝色)。记录用去硫代硫酸钠溶液（6.7）的体积为V1(mL)。7.6　空白试验按步骤7.1至7.5在不加面粉或淀粉样品的条件下进行。记录用去硫代硫酸钠溶液（6.7）的体积为V2(mL)。氧化5.0mL样品液中还原糖所需0.1mol/L铁氰化钾体积V按式（1）计算：V＝V1-V2………………………………………………………(1)根据式（1）所得的V值，在表1（符合AACC80-60（1999）还原糖和非还原糖含量测定的规定）中查出相应的每10g淀粉中麦芽糖含量N（mg）.表1　铁氰化钾-麦芽糖的转换数据表 0.1mol/L铁氰化钾每10克淀粉中麦芽糖（ml）含量（mg） 0.1mol/L铁氰化钾每10克淀粉中麦芽糖（ml）含量（mg） 0.1050.20100.30150.40200.50250.60310.70360.80410.90461.00511.10561.20601.30651.40711.50761.60801.70851.80901.90962.001012.101062.201112.301162.401212.501262.601302.701352.801402.901453.001513.101563.201613.301663.401713.501763.601823.701883.801953.902014.002074.102134.202184.302254.402314.50237 4.602444.702514.802574.902645.002705.102765.202825.302885.402955.503025.603085.703155.803225.903286.003346.103416.203476.303536.403606.503676.603736.703796.803856.903927.003987.104067.204127.304187.404257.504317.604387.704457.804517.904588.004658.104728.204788.304858.404928.504998结果计算试样的破损淀粉值用P表示，以质量分数％计，按式（2）计算：＝0.082×N……………………………（2）式中：N——氧化样品液中还原糖所需0.1mol/L铁氰化钾体积所对应的每10g淀粉中麦芽糖含量（mg）；5——样品稀释倍数；1.64——61%的淀粉转化为麦芽糖，所以乘以0.61的倒数1.64，8.1精密度两次测定结果之差不得超过平均值的5%，测定结果保留小数点后两位。附录A硫代硫酸钠标准溶液标定方法（规范性附录）A.1试剂A.1.10.1/moL碘酸钾标准溶液准确称量3.5667g经105℃烘干2h的碘酸钾（优级纯），溶解于水，移入1L容量瓶中，再用水定溶至1000ml。A.1.20.1mol/L盐酸溶液：量取82ml浓盐酸加水稀释至1000ml。A.1.30.5%淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加入100ml沸水，并煎沸2min～3min至溶液透明。A.2硫代硫酸钠溶液的标定方法精确量取25.00ml[C(1/6KIO3)=0.1000mol/L]碘酸钾标准溶液，于250ml碘量瓶中，加入75ml新煮沸后冷却的水，加3g碘化钾及10ml0.1mol/L盐酸溶液，摇匀后放入暗处静置3min。用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘，至淡黄色，加入1ml0.5%淀粉溶液呈兰色。再继续滴定至兰色刚刚褪去，即为终点，记录所用硫代硫酸钠溶液体积（V），单位为ml，其准确浓度V0用式（1）计算：V0=0.1000×25.00/V--------------（1）平行滴定两次，所用硫代硫酸钠溶液相差不能超过0.05ml，否则应重新做平行测定。注：在每天测定还原糖含量的一系列实验的同时，应该做以下空白试验以测定铁氰化钾试剂的变化，并进行校正。1.把45mL的醋酸钠溶液（5.1）和3mL的H2SO4溶液（5.2）、2mL的钨酸钠溶液混合均匀。2.取5mL以上混合液（代替5mL的样品滤液），加入10mL的铁氰化钾溶液和1mL的淀粉-碘化钾溶液，该步骤与还原糖的测定同时进行，最终使溶液的蓝色完全消失所用的0.1moL/L硫代硫酸钠溶液的量为10mL。3.如果硫代硫酸钠溶液的用量在10mL±0.05mL，铁氰化钾仍可使用，但在还原糖含量计算时应该进行适当的校正。参考文献1Beernfield.P.1995.Amylase,alphaandbeta.MethodsEnzymol,1:149.2Blish,M.J.,andSandstedt,R.M.1993.Animprovedmethodfortheestimationofflourdiastaticvalue.CerealChem.10:189.3Donelson,J.R.,andYamazaki,W.T.1962.Noteonarapidmethodfortheestimationofdamagedstarchinsoftwheatflours.CerealChem.39:460.4Donelson,J.R.,andYamazaki,W.T.1968.Enzymaticdeterminationofstarchinwheatfractions.CerealChem.45:177.5AOACInternational1995.OfficialMethodsofAnalysisofAOACInternational,16thed.Method,939.03.TheAsscotion,Arlington,VA.ICS65.020.20B05中华人民共和国国家标准GB/T9826—××××代替GB/T9826-1988粮油检验小麦粉破损淀粉的测定-α-淀粉酶法Methodfordeterminationofstarchdamageinflour-Alpha-amylasemethod（征求意见稿）（本稿完成日期：2008年1月）200×-××-××发布200×-××-××实施国家质量监督检验检疫总局发布PAGE1_1263044485.unknown