制药药剂教案

实验1生化实验基本操作1、生化实验特点介绍生化的重要性和有趣性，引起学生对生化课的兴趣，帮助学生树立正确的实验态度1、简介生物化学学科特点：1）一门在分子水平上研究和探索生命现象和本质的学科，发展迅速，进展快，是生命科学的领头羊，其理论和技术已渗入到医学各学科，二十一世纪被称为分子生物学时代，这门学科的发展，已很大程度上改变着人类的生存状态，但仍有很多未知领域。2）从同学们关心的角度（考研）说明生化的重要性。3）是一门实验性学科，每一理论的提出都来自于科学实验，实验本身是这门学科的基础和重要组成部分，是探究问题的重要途径，培养我们发现问题、 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 问题解决问题的能力，而非机械的操作（多问为什么！多想怎么办！）。2、生化实验的特点：1）主要运用化学的原理和方法 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 的科学实验。2）生化实验拥有先进的实验手段。3）微量和定量是生化实验的一大特点。2、生化实验室规则让学生树立科学正确的实验意识，培养基本的科研素养。1、实验前：认真预习，有自己的见解，提出实验思路和问题。2、实验中：认真操作，仔细观察，如实纪录。养成良好的科学实验习惯，注意安全。3、实验后：独立完成实验 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 ，分析结果和出现的问题，培养分析解决问题的能力。离开实验室时，清点仪器，安排值日，检查灯火水电气等。三、生化实验基本操作1、玻璃仪器的清洗：（开始实验的重要步骤，是实验能否成功的重要因素）一般玻璃仪器：（如试管，烧杯）自来水冲洗—肥皂水刷洗—自来水冲洗—蒸馏水淋洗—干燥（倒置风干）容量分析仪器：（如吸量管，滴定管）自来水冲洗—铬酸洗液浸泡—大量自来水冲洗蒸馏水淋洗—干燥比色杯：自来水冲洗—酒精或盐酸浸泡—自来水冲洗—蒸馏水淋洗***注：切忌用试管刷、粗布擦洗，分清毛面光面，手拿毛面。清洁 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ：对光面玻璃璧上有均匀的水膜，倒置不挂水珠。教学内容与组织安排：2、吸量管的种类及使用分类：奥式吸量管，移液管，刻度吸量管（实验中要根据情况选取合适的吸量管）刻度吸量管：全流出式（刻度到尖端，吹）和不完全流出式使用：执管；取液（忌悬空）；调准刻度（液体凹面，视线，刻度平行）；放液（管尖贴内壁）；洗涤。4、微量可调式移液器的使用调节所需体积值；套枪头；垂直持握，大拇指按至一档取液；排液按至一档后继续至二档；移取另一液体时更换枪头。5、溶液的混匀旋转混匀法：手持，手腕，离心运动。（适用于未盛满液体的试管或锥形瓶）指弹法：左手持试管上端，右手轻弹试管下部。颠倒混匀法：适用于有塞的容量瓶。吸量管混匀法：用吸量管将溶液反复吸放数次。玻璃搅动法：常用于固体试剂的溶解和混匀。6、离心机的使用BS原则平衡（balance）对称（symmetry）实验2糖的颜色反应[实验目的及要求]1.掌握莫氏试验鉴定糖的原理和方法；2.掌握塞氏试验鉴定酮糖的原理和方法3.掌握杜氏试验鉴定酮糖的原理和方法.[实验原理]1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。3．杜式试验：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。[实验仪器及用品]仪器：水浴锅器皿：吸管、试管实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。[实验内容及步骤]一、莫式实验于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml（切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。二、塞式试验于4支试管中，分别加入0.5ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加莫式试剂2滴，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。三、杜式试验于3支试管中加入杜式试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。将试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化，并记录颜色变化的时间。三、实验现象记录仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。[实验注意事项]1． 试管中加入各种糖后，做好标记，并按顺序放到水浴锅中；2.实验过程中，要仔细观察溶液的颜色变化情况。[实验报告要求]1.写好预习报告，包括实验目的与要求、实验原理、重要的实验器材及试剂、实验步骤。2．做完实验后，把所观察到的实验现象记录在实验报告上，并做相应的解释。实验3蛋白质及氨基酸的呈色反应一、目的：1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。二、呈色反应：（一）双缩脲反应1．原理：素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团NH2NH2的物质以及乙二酰二胺（O＝C——C＝O）等物质也有此反应。NH3也干扰此反应，因为NH​3与Cu​2+可生成暗蓝色的络离子Cu（NH3）42+。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。2．试剂：①尿素②10%氢氧化钠溶液③1%硫酸铜溶液④2%卵清蛋白溶液3．操作：取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。（二）茚三酮反应1．原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。β—丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。该反应十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。2．试剂：①蛋白质溶液2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9）②0.5%甘氨酸溶液③0.1%茚三酮水溶液④0.1%茚三酮-乙醇溶液3．操作：①取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。（三）黄色反应1．原理：含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。反应式如下：多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。2．试剂：①鸡蛋清溶液将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1∶20混匀，然后用6层纱布过滤。②大豆提取液将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状再用纱布过滤。③头发④指甲⑤0.5%苯酚溶液⑥浓硝酸⑦0.3%色氨酸溶液⑧0.3%酪氨酸溶液⑨10%氢氧化钠溶液3．操作：向7个试管中分别按下 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。 管号 1 2 3 4 5 6 7 材料（滴） 鸡蛋清溶液4 大豆提取液4 指甲少许 头发少许 0.5%苯酚4 0.3%色氨酸4 0.3%酪氨酸4 浓硝酸/（滴） 2 4 40 40 4 4 4 现象 1．写出蛋白质中可以与双缩脲试剂反应的化学基团的名称及化学结构。2．一个分子中必须有几个上述化学基团才能给出双缩脲反应的阳性结果？双缩脲试剂与二肽和三肽都能进行反应吗？3．如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，此时可对水解作用进行的程度作出什么结论？4．如果蛋白质中的氨基酸的平均分子量为125，在分子量为150000的蛋白质分子中存在着多少个上述化学基团？5．茚三酮反应的阳性结果是否经常是同一色调？并说明原因。6．你能区分蛋白质茚三酮反应及其他氨基化合物茚三酮反应的结果吗？试解释之。7．能否利用茚三酮反应可靠地鉴定蛋白质的存在？8．哪些芳香基因（蛋白质中的、非蛋白质中的）可以与浓硝酸作用呈现黄色反应的阳性结果？9．是否所有氨基酸都呈现黄色反应的阳性结果？为什么？是否大部分蛋白质呈现阳性结果？为什么？实验4蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、目的1、了解蛋白质的两性解离性质。2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。1、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。二、原理蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固。蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200ml取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。加入10mL1mol/L醋酸钠溶液。把锥形瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移到100mL容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。2、1.00mol/L醋酸溶液100mL3、0.10mol/L醋酸溶液300mL4、0.01mol/L醋酸溶液50mL5、蛋白质溶液500mL5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1:9）6、pH4.7醋酸—醋酸钠的缓冲溶液100mL7、3%硝酸银溶液10mL8、5%三氯乙酸溶液50mL9、95%乙醇250mL10、饱和硫酸铵溶液250mL11、硫酸铵结晶粉末10000mL12、0.1mol/L盐酸溶液300mL13、0.1mol/L氢氧化钠溶液300mL14、0.05mol/L碳酸钠溶液300mL15、甲基红溶液20mL（三）器具1、水浴锅2、温度计3、200mL锥形瓶4、100mL容量瓶5、吸管6、试管及试管架7、乳钵四、操作步骤（一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。 试管号 蒸馏水（mL） 0.01mol/L蜡酸（mL） 0.1mol/L蜡酸(mL) 1.0mol/L蜡酸(mL) 1 8.4 0.6 - — 2 8.7 - 0.3 — 3 8.0 - 1.0 — 4 7.4 - - 1.6（2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。（二）蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。加蛋白质溶液5mL于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。2、重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？3、某些有机酸沉淀蛋白质取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。4、有机溶剂沉淀蛋白质取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL95%乙醇。观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀。5、乙醇引起的变性与沉淀取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂： 试剂（mL）管号 蛋白质溶液 0.1mol/L氢氧化钠溶液 0.1mol/L盐酸溶液 95%乙醇 PH4.7缓冲溶液 123 111 —1— ——1 111 1——振摇混匀后，观察各管有何变化。放置片刻向各管内加入水8毫升，然后在第2，3号管中各加一滴甲基红，再分别用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象。五、注意事项等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。六、实验报告以表格形式总结实验结果，包括观察到的现象，分析评价实验结果。七、思考题1、什么是蛋白质的等电点？2、在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？实验五、考马斯亮蓝染色法一、目的：学习考马斯亮蓝(CoomassieBrilliantBlue)法测定蛋白质浓度的原理和方法。二、原理：考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质—染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝G—250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它和蛋白质通过范德瓦尔键（vanderWaals’bond）结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’slaw）。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1h，之后，蛋白质—染料复合物发生聚合并沉淀出来。蛋白质—染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，在测定溶液中含蛋白质5μg·ml-1时就有0.275光吸收值的变化，比Lowry法灵敏4倍，测定范围为10—100μg蛋白质，微量测定范围是1~10μg蛋白质，此反应重复性好，精确度高，线性关系好。标准曲线在蛋白质浓度较大时稍有弯曲，这是由于染料本身的两种颜色形式光谱有重叠，试剂背景值随更多染料与蛋白质结合而不断降低，但直线弯曲程度很轻，不影响测定。此方法干扰物少，研究表明：NaCl，KCl，MgCl2，乙醇，（NH4）2SO4无干扰。强碱缓冲剂在测定中有一些颜色干扰，这可以用适当的缓冲液对照扣除其影响。Tris，乙酸，2－巯基乙醇，蔗糖，甘油，EDTA及微量的去污剂如TritonX－100，SDS，玻璃去污剂有少量颜色干扰，用适当的缓冲液对照很容易除掉。但是，大量去污剂的存在对颜色影响太大而不易消除。三、试剂与器材：1．试剂：①考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝G－250100mg溶于50ml95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000mL，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250，4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）磷酸。②标准蛋白质溶液结晶牛血清清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用0.15mol·L-1NaCl配制成1mg·ml-1，0.1mg·ml-1蛋白溶液。③未知蛋白质溶液。2．器材①试管及试管架，②吸量管（0.1ml及5ml），③722型分光光度计。四、操作步骤1．标准法制定标准曲线取14支试管，分两组按下表平等操作。 试管编号 1 2 3 4 5 6 1mg·mL-1标准蛋白溶液/ml 0．0 0．15 0．30 0．45 0．60 0．75 水/ml 1 0.85 0．7 0．55 0．4 0．25 考马斯亮蓝试剂/ml 5ml 摇匀，1h内以1号试管为空白对照，在595nm处比色 A595nm 绘制标准曲线：以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。2．测定未知样品蛋白质浓度测定方法同上，取1ml至试管内，再加入G—250染色液5ml混匀。根据所测定的A595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度（mg·ml-1）。五、结果与讨论1．绘出标准曲线2．求出未知蛋白质浓度注意事项（1）如果测定要求很严格，可以在试剂加入后的5—20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色最稳定。（2）测定中，蛋白—染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，实验证明此复合物的吸附量是可以忽略的。测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。思考题根据下列所给的条件和要求，选择一种或几种常用蛋白质定量方法测定蛋白质浓度：1．样品不易溶解，但要求结果较准确。2．要求在半天内测定60个样品。3．要求很迅速地测定一系列试管（30支）中溶液的蛋白质浓度。实验六、酶的特性一、目的：观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、PH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。二、原理：人唾液中淀粉酶为α-为淀粉酶，在唾液腺细胞内合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下：淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色。麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。淀粉与糊精无还原性，或还原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应。麦芽糖、葡萄糖是还原糖，与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。唾液淀粉酶的最适温度为37—40℃，最适PH为6.8。偏离此最适环境时，酶的活性减弱。低浓度的Cl—离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。三、器材及试剂：1．器材： ①试管 ⑦酒精灯 ②烧杯 ⑧恒温水浴锅 ③量筒 ⑨冰浴 ④玻璃棒 ⑩试管夹 ⑤白磁板 eq\o\ac(○,11)试管架 ⑥铁三角架 eq\o\ac(○,12)唾液淀粉酶液：实验者先用蒸馏水嗽口，然后含一口蒸馏水于口中，轻嗽一、二分钟，吐入小烧杯中，用脱脂棉过滤，除去稀释液中可能含有的食物残渣。并将该滤液稀释一倍。2．试剂：①1%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；将1g可溶性淀粉与0.3g氯化钠，混悬于5ml的蒸馏水中，搅动后缓慢倒入沸腾的95ml蒸馏水中，煮沸1分钟，冷却后倒入试剂瓶中。②碘液：称取2g碘化钾溶于5ml蒸馏水中。再加1g碘。待碘完全溶解后，加蒸馏水295ml，混合均匀后贮于棕色瓶内。③班氏（Benedict）试剂：将17.3g硫酸铜晶体溶入100ml蒸馏水中，然后加入100ml蒸馏水。取柠檬酸钠173g及碳酸钠100g，加蒸馏水600ml，加热使之溶解。冷却后，再加蒸馏水200ml，最后，把硫酸酮溶液缓慢地倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤除去或自然沉降一段时间取上清液。此试剂可长期保存。④0.4%的HCl溶液⑤0.1%的乳酸溶液⑥1%Na2CO3溶液⑦1%NaCl溶液⑧1%CuSO4溶液⑨0.1%淀粉溶液四、操作步骤：1．淀粉酶活性的检测：取一支试管，注入1%淀粉溶液5ml与稀释的唾液0.5~2ml。混匀后插入1支玻棒，将试管连同玻棒置于37℃水浴中。不时地用玻棒从试管中取出1滴溶液，滴加在白磁板上，随即加1滴碘液，观察溶液呈现的颜色。此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。记录淀粉在水解过程中，遇碘后溶液颜色的变化。向上面试管的剩余溶液中加2ml班氏试剂，放入沸水中加热10分钟左右，观察有何现象？为什么？2．PH对酶活性的影响：取4支试管，分别加入0.4%盐酸（PH≈1）、0.1%乳酸（PH≈5）、蒸馏水（PH≈7）与1%碳酸钠（PH≈9）各2ml，再向以上四支试管中各加2ml1%淀粉溶液及2ml淀粉酶液。混合摇匀后置于37℃水浴中，保温15分钟。向四支试管中各加2ml班氏试剂，在沸水浴上加热，根据生成红棕色沉淀的多少，说明淀粉水解的强弱。综合以上结果，说明PH对酶活性的影响。3．温度对酶活性的影响：取3支试管，各加3ml1%淀粉溶液；另取3支试管，各加1ml淀粉酶液。将此6支试管分为三组，每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支，三组试管分别置入0℃、37℃与70℃的水浴中。5分钟后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，立即滴加2滴碘液，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明温度对酶活性的影响。4．激活剂与抑制剂对酶活性的影响：取3支试管，按下表加入各种试剂。混匀后，置于37℃水浴中的保温。从1号试管中用玻棒取出1滴溶液，置于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。待1号试管内的溶液遇碘不再变色后，立即取出所有的试管，各加碘液2滴，观察溶液颜色的变化，并解释之。 管号 1 2 3 1%NaCl（ml） 1 — — 1%CuSO4（ml） — 1 — 蒸馏水（ml） — — 1 淀粉酶液（ml） 1 1 1 0.1%淀粉液（ml） 3 3 3五、分析与讨论：通过本实验，结合理论课的学习，小结出哪些因素影响唾液淀粉酶活性？是如何影响的？思考题1．本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变化来判断酶促反应快慢的？2．如何通过加入班氏试剂后生成沉淀多少来反映酶促反应快慢的？