两种提取方法在尿儿茶酚胺测定中的应用比较

两种提取方法在尿儿茶酚胺测定中的应用比较 两种提取方法在尿儿茶酚胺测定中的应用 比较 ? 844?JournalofClinicalandExperimentalMedicineVo1.10,No.11Jun.2011 两种提取方法在尿儿茶酚胺测定中的应用比较 李明宋爱羚陈适卢琳童安莉曾正培(北京协和医院内分泌科北京100730) 【摘要】目的比较了两种提取方法在尿儿茶酚胺提取过程中的应用.方法用阴离子固相萃取柱和酸性氧化 铝分别提取 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品和尿标本,然后用高效液相色谱联用电化学检测器测定尿儿茶酚胺的含量.结果阴离子固相萃取 法的直接萃取率去甲肾上腺素为65%一87%,肾上腺素为57%,88%,多巴胺为68%一84%.酸性氧化铝吸附的直接 萃取率去甲肾上腺素为25%一32%,肾上腺素为17%,28%,多巴胺为28%,32%.结论在尿儿茶酚胺提取过程中 阴离子固相萃取法的萃取率高于酸性氧化铝吸附法. 【关键词】尿液儿茶酚胺阴离子固相萃取法酸性氧化铝吸附法高效液相色谱 Comparisonoftwoextractionmethodsinurinecatecholaminedetermination. 肘,SONGAi—ling,CHENShi,eta1.Departmentof Endocrinology,PekingUnionMedicalCollegeHospital,Beijing100730,China. 【Abstract]ObjecflveTocomparetwoex~acfionmethodsinthedetectionofurinecateeholamines.MethodsCatecholaminewasex~ac? tedfromurinebyanionsolidphaseextractioncolumnandacidicaluminarespectively.ThecontentofcatecholamineWasanalyzedbyhishperform- anteliquidchromatographywithelectrochemicaldetector.ResultsTheabsoluterecove~esofcatecholamineextractionwitllanionsolidphaseex? tractioncolumnwere65%一87%fornorepinephrine,57%, 88%forepinephrine,and68%一84%fordopamine.Theabsoluterecoveriesof eatecholamineextractionwitllacidicaluminawere25%, 32%fornorepinephrine,17%一28%forepinephrine,and28%, 32%fordopamine. ConclusionThemethodofcatecholamineextractionfromurinewithanionsolidphaseextractioncolumnisbeRerthanwitllacidicalumina. 【Keywords】 Urine;Catecholamine;Anionsolidphaseextraction;Acidicaluminaadsorption;Hig}l—performanceliquidchromatography 嗜铬细胞瘤会造成恶性高血压,常危及生命,须及 时通过手术根治lJ.瘤体内的嗜铬组织会释放大量的 儿茶酚胺,因而测定尿儿茶酚胺含量是鉴别与诊断嗜铬 细胞瘤的手段之一.目前的测定方法都涉及到尿标本 的预处理,包括去掉蛋白和一些干扰离子-3J.本研究对 尿儿茶酚胺测定中酸性氧化铝吸附和阴离子固相萃取 两种标本预处理方法进行了比较,现报告如下. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1仪器Et本岛津公司的高效液相色谱仪包括 LC一20AD泵,CTO一20A柱温箱,SiL一20A自动进样 器,L—ECD一6A电化学检测器,CBM一20A中央控制 器,美国Waters公司的SymmetryC18液相色谱 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 柱, 规格4.6mm×250mm,颗粒直径5m. 1.1.2试剂盐酸,酸性氧化铝,甲醇,氨水,冰醋酸, 氯化铵,十二烷基硫酸钠(SDS),乙二胺四乙酸二钠 (EDTANa),磷酸,氢氧化钠,偏重亚硫酸钠,Tris,硫酸 购自北京化学试剂公司,乙腈购自美国Fisher—seientif- ic公司,固相萃取柱(OASISS,MAX)购自美国Waters公 司,填料为30mg.去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E), 二羟基苯胺(DHBA),多巴胺(DA),二苯基硼酸一二氨 基乙脂(DPB)购自美国Sigma公司. 1.1.3色谱条件流动相的组成:磷酸缓冲液(pH= 3.5):乙腈=4:1,每升流动相含有SDS200mg,ED- TANa250mg.超声波除气30min,流速lm]/min,测定 电压0.7V,测定电流量程0,1000nA.柱温35?,测 定时间15min. 1.2方法 1.2.1标本收集正常人与嗜铬细胞瘤患者(我院确 诊并手术切除瘤体后经病理证实)均留取24h尿液,在 留尿容器中加入l0IIll浓盐酸作为防腐剂,留尿完毕 后, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 全部尿液的体积(IIl1),混匀后取5IIll装入含有 抗氧化剂的标本管中送检. 1.2.2标本提取 1.2.2.1阴离子固相萃取法尿液经高速离心后取1 IIll加入20l浓硫酸和100内标准DHBA(0.8g/ 1111),沸水浴20min,冷却后加入0.5miDPB(0.1mg/ na)和0.5ml维生素c(1.2mg/m1),用10%的氨水调 pH至8.6后准备上样.固相萃取柱先用1IIll甲醇活化 两遍,再用1ml去离子水冲洗,接着是混合后的尿液上 样,上样完毕,用2%的氨水lrnl冲洗柱子,最后用0. 1N的盐酸llIll洗脱,收集洗脱液上机测定. 1.2.2.2酸性氧化铝吸附法在10玎n1玻璃刻度离心管中 加人5llll蒸馏水,2mlTris一盐酸(pH=8.6),5%焦亚硫酸 钠(Na2S205)溶液400和100内标准DHBA(0.8 IIl1),加入1ml经高速离心后的尿液后再加人150rag酸性 氧化铝,震摇1min后静置弃上清,加入5lIll蒸馏水,震摇 30S后静置弃上清,然后加入1ml0.1N的冰醋酸,静置30 min后,收集E清液上机测定. 1.2.3标本测定使用日本岛津公司的高效液相色谱 仪联用电化学检测器测定尿中的儿茶酚胺含量,上机测 定的样本量均为50. 2结果 2.1直接萃取率的比较以不同浓度的标准品为样 本,比较两种提取方法的直接萃取率,阴离子固相萃取 法在萃取率上明显优于酸陛氧化铝吸附法.见表1. 临床和实验医学毒志2011年6月第10卷第11期?845? 表1两种方法的直接萃取率(%) 2.2最小可测范围的比较采用稀释标准品并测定, 得到两种方法的最小可测范围:阴离子固相萃取法在 0.005,0.0001mg/L的浓度之间,酸性氧化铝吸附法 在0.O1,0.005mg/L的浓度之间,固相萃取法略高于 氧化铝吸附法. 2.3线性的比较在0.O1—100mg/L的浓度范围内, 阴离子固相萃取法与酸性氧化铝吸附法线性均良好. 见表2. 表2两种方法的回归方程 试剂阴离子固相萃取法酸性氧化铝吸附法 NEY=14.296X+3.422fr=0.9999)Y=20.341X一4.o65(r=0.9998) EY=16.345X-2.037(r=O.9999)Y=26.216X+3.891(r=0.9997) DAY=19.364X一4.631(r=O.9999)Y=27.356X+3.947(r=O.9997) 注:以浓度为横坐标并以色谱峰高值为纵坐标(实测峰高值减去基线 值)制作标准曲线,并求回归方程 2.4同一份嗜铬细胞瘤患者尿标本的应用比较在标 本的实际应用中阴离子固相萃取法在萃取率上高于酸备复杂J,长期放置易吸附潮 气等杂质影响萃取率,对测定结果造成影响. 近年来,随着固相萃取技术的快速发展,所使用的 填料品种也在不断更新.本研究使用的固相萃取柱填 料为高交联聚苯乙烯一二乙烯基苯一乙烯吡咯烷酮一 季铵基,其活性集团总是呈离子状态,与目标物之间的 作用力为离子作用力,高于酸性氧化铝通过铝原子与化 合物羟基之间形成的氢键作用力,能实现更好的吸附. 萃取所依据的原理是儿茶酚胺与DPB在碱性的条件下 形成带负电的化合物后,与萃取柱里的阴离子交换而得 到富集,再洗脱达到萃取的目的,所形成带负电的化合 物本身就具有一定的特异性.根据Maiko等的文献 并比较了不同的浓度,本研究将DPB的最终浓度定在 0.1mS/ml.研究发现固相柱的直接萃取率要高于酸性 氧化铝.对我科近10年的临床资料 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf ,发现病人24 h的尿量变化很大(375,6100m1),尤其当尿量大于5 000ml时,每毫升尿液含有的儿茶酚胺量很低,使用酸 性氧化铝进行吸附时,去甲肾上腺素与肾上腺素容易测 不出来,这时使用阴离子固相柱萃取,效果要好一些. 参考文献 [1]史轶蘩,吴从愿.协和内分泌和代谢学[M].北京:科学出版社, 1995:1222—1226. 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