白假丝酵母菌感染分布及耐药性分析

[收稿日期 ] 　2006 - 05 - 23 [作者简介 ] 　路晓钦 (1969 - ) ,男 (汉族) , 山东省菏泽市人 ,副主任药师 ,主要从事临床药学研究。 [通讯作者 ] 　路晓钦　　E2mail :luxiaoqin12 @sina. com 白假丝酵母菌感染分布及耐药性 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 路晓钦 ,黎莉华 ,周　丽 ,刘 　利 (重庆医科大学附属北碚医院 ,重庆 　400700) [摘 　要 ] 　回顾性分析某院 2003 —2005 年各类临床标本分离的 186 株白假丝酵母菌分布特点及药敏结果。186 株白假丝酵母菌主要分离自呼吸道标本 ,占 60 . 75 % ;其次为中段尿 18 . 28 % ,分泌物 11 . 83 % ,血液 4 . 30 % ,其他 4 . 84 %。白假丝酵母菌对两性霉素 B、制霉菌素、5 - 氟胞嘧啶、氟康唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、伊曲康唑的耐药 率分别为 4 . 84 %、9 . 68 %、41 . 94 %、63 . 98 %、61 . 83 %、67 . 23 %、46 . 77 %、66 . 67 % ;3 年来 , 白假丝酵母菌除对两性 霉素 B 和制霉菌素的耐药率显著降低 ( P < 0 . 01) ,对益康唑的耐药率没有太大变化 ( P > 0 . 05)外 ,对 5 - 氟胞嘧啶、 氟康唑、酮康唑、咪康唑的耐药率显著增高 ( P < 0 . 01 或 P < 0 . 05) 。 [关 　键 　词 ] 　白假丝酵母菌 ;抗真菌药物 ;抗药性 ,微生物 [中图分类号 ] 　R379 . 4 　　[文献标识码 ] 　B 　　[文章编号 ] 　1671 - 9638 (2007) 06 - 0419 - 03 　　随着临床广谱抗菌药物、抗肿瘤药物及免疫抑 制剂的广泛使用 ,白假丝酵母菌已成为医院感染重 要的病原体之一[ 1 ] 。目前 ,酵母菌对传统抗真菌药 物已产生耐药性并有上升趋势 ,而且药物的交叉耐 药使耐药率进一步升高 ,给临床治疗带来很大困 难[ 2 ] 。我们对本院 2003 年 1 月—2005 年 12 月间 白假丝酵母菌感染的分布和耐药趋势进行分析 ,为 临床治疗提供依据。 1 　 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1 . 1 　菌株来源 　菌株分离自本院 2003 年 1 月 — 2005 年 12 月住院患者的各种标本 ,如痰、尿、血、脓 性分泌物等。 1 . 2 　药敏纸片 　5 - 氟胞嘧啶、两性霉素 B、制霉菌 素、氟康唑、咪康唑、益康唑、酮康唑、伊曲康唑 ,购自 英国 Oxoid 公司。 1 . 3 　菌株鉴定 　将标本接种于血平板及沙氏培养 基 ,经 25 ℃,24h 培养 ,分离纯菌。采用 MicroScan WalkAway240 全自动微生物鉴定仪 (美国 Dade Behring 公司) 鉴定菌株。同一患者 7d 内的相同标 本同种菌株 ,不重复药敏鉴定 ,不计入菌株总数。 1 . 4 　酵母菌药敏试验 　以纸片扩散法 (与 K2B 纸 片扩散法试验相似)进行药敏试验。(1)制备酵母菌 悬液 :挑取大约 5 个菌落至 5mL 生理盐水或无菌水 中 ,旋摇成均匀的菌悬液。(2) 调酵母菌悬液浊度 : 用无菌盐水或水调整比浊至 0 . 5 号麦氏管浊度 ,方 法同标准的细菌纸片扩散法 ,酵母菌量约为 1 ×106 ～5 ×106 CFU / mL 。(3 ) 接种平皿 :在酵母菌悬液 中浸湿无菌棉签 ,在试管内壁液面上方通过旋转棉 签挤出多余的酵母菌液。用棉签的侧面 (不是顶端) 从 3 个不同的方向密涂葡萄糖美蓝 M2H 琼脂平 皿 ,每株酵母菌用 1 个平皿。注意不要把棉签戳进 琼脂 ,避免“划痕”。待琼脂吸收酵母菌液约 5～15 min 后 ,在已接种酵母菌液的平皿上贴药敏纸片并 轻轻按压 ,确保纸片贴在琼脂 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面。(4) 孵育 :使平 皿底朝上 ,35 ℃孵育 18～24 h 后读取结果 ,如果 24 h 生长不足 ,则延长至 48 h。判定标准按美国临床 实验室标准化委员会 (NCCL S) 酵母菌纸片扩散法 敏感试验 2003 年 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 ,抑菌环直径 ≥19 mm 为敏 感 , ≤14 mm 为耐药[ 3 ] 。 1 . 5 　质控菌株　白假丝酵母菌 A TCC 60193 (敏感 菌株) 。 1 . 6 　统计方法 　采用 SPSS 11 . 0 软件对数据进行 统计分析 ,耐药率间比较采用χ2 检验。 2 　结果 2 . 1 　真菌菌种分类与构成比 　共分离真菌 412 株 , 其中白假丝酵母菌所占比率最高 ,为 45 . 15 % ,其次 是热带假丝酵母菌 19 . 90 % ,余详见表 1。 ·914·中国感染控制杂志 2007 年 11 月第 6 卷第 6 期　Chin J Infect Cont rol Vol 6 No 6 Nov 2007 表 1 　2003 —2005 年真菌菌种分类与构成比 真菌 2003 年 株数 构成比 ( %) 2004 年 株数 构成比 ( %) 2005 年 株数 构成比 ( %) 合计 株数 构成比 ( %) 白假丝酵母菌 热带假丝酵母菌 光滑假丝酵母菌 克柔假丝酵母菌 近平滑假丝酵母菌 其他真菌 33 7 4 4 4 5 57 . 89 12 . 28 7 . 02 7 . 02 7 . 02 8 . 77 57 22 13 9 6 13 47 . 50 18 . 33 10 . 83 7 . 50 5 . 00 10 . 84 96 53 28 22 8 28 40 . 85 22 . 56 11 . 91 9 . 36 3 . 40 11 . 92 186 82 45 35 18 46 45 . 15 19 . 90 10 . 92 8 . 50 4 . 37 11 . 16 合计 57 100 . 00 120 100 . 00 235 100 . 00 412 100 . 00 2 . 2 　白假丝酵母菌标本分布 　186 株白假丝酵母 菌主要分离自呼吸道标本 ,详见表 2。 表 2 　2003 —2005 年白假丝酵母菌在临床标本中的分布 标本 2003 年 株数 构成比 ( %) 2004 年 株数 构成比 ( %) 2005 年 株数 构成比 ( %) 合计 株数 构成比 ( %) 痰 中段尿 分泌物 血液 其他 19 8 4 0 2 57 . 58 24 . 24 12 . 12 0 . 00 6 . 06 33 9 10 3 2 57 . 90 15 . 79 17 . 54 5 . 26 3 . 51 61 17 8 5 5 63 . 54 17 . 71 8 . 33 5 . 21 5 . 21 113 34 22 8 9 60 . 75 18 . 28 11 . 83 4 . 30 4 . 84 合计 33 100 . 00 57 100 . 00 96 100 . 00 186 100 . 00 2 . 3 　不同年份白假丝酵母菌耐药性变迁 　见表 3。 表 3 　2003 —2005 年白假丝酵母菌耐药率 ( %) 抗真菌药物 2003 年 ( n = 33) 2004 年 ( n = 57) 2005 年 ( n = 96) 合计 ( n = 186) χ2 P 5 - 氟胞嘧啶 氟康唑 两性霉素 B 咪康唑 酮康唑 益康唑 制霉菌素 伊曲康唑 18 . 18 36 . 36 9 . 09 45 . 45 36 . 36 45 . 45 27 . 27 - 47 . 37 84 . 21 10 . 53 57 . 89 68 . 42 47 . 37 15 . 79 - 46 . 88 61 . 46 0 . 00 69 . 79 100 . 001) 46 . 88 0 . 00 66 . 67 41 . 94 63 . 98 4 . 84 61 . 83 　67 . 232) 46 . 77 9 . 68 　66 . 673) 9 . 30 21 . 39 10 . 04 6 . 51 28 . 68 0 . 056 24 . 37 - < 0 . 01 < 0 . 01 < 0 . 01 < 0 . 05 < 0 . 01 > 0 . 05 < 0 . 01 - 　　1)检测 29 株 ;2)检测 119 株 ;3)检测 96 株 3 　讨论 白假丝酵母菌是条件致病菌 , 其致病性主要与 黏附素、胞外酸性蛋白酶及芽管生成等有关 ,其中胞 外酸性蛋白酶具有重要作用[ 4 ] 。随着皮质类固醇、 免疫抑制剂和抗菌药物的广泛使用 , 白假丝酵母菌 感染的发病率呈不断上升趋势。20 年来白假丝酵 母菌感染增长了 20 倍以上 ,成为医院感染的主要死 亡原因之一[ 5 ] 。 2003 —2005 年 ,本院各类临床标本共分离出真 菌 412 株 ,菌株分离数逐年上升 ,菌谱不断扩大 ,其 中白假丝酵母菌分离率最高 ,占 45 . 15 %。186 株白 假丝酵母菌主要分离自呼吸道标本 ,多数来源于 > 60 岁的老年人和 < 10 岁的儿童。这是由于老年患 者及婴幼儿抵抗力弱 ,免疫力低下 ,且均有较严重的 基础疾病 ,长期反复使用广谱抗菌药物、免疫抑制剂 等[ 6 ] 。 白假丝酵母菌通过多种分子机制对唑类抗真菌 药物获得性耐药。如药物作用靶酶 (细胞色素 P450 L 1 A1 )的改变、膜外排泵的主动外排作用增强以及 ·024· 中国感染控制杂志 2007 年 11 月第 6 卷第 6 期　Chin J Infect Cont rol Vol 6 No 6 Nov 2007 甾醇去饱和酶的失活等 ,不仅介导了白假丝酵母菌 对氟康唑和酮康唑耐药 ,同时介导对制霉菌素和两 性霉素 B 交叉耐药[ 7 ] 。另外 ,耐药的发生也与染色 体改变以及白假丝酵母菌在局部形成生物被膜有 关。多烯类抗真菌药物 (两性霉素 B、制霉菌素、那 他霉素)耐药率虽然较低 ,但唑类抗真菌药物的使用 可以导致两性霉素 B 结合位点的缺乏 ,从而导致其 敏感性下降 ;而且单用 5 - 氟胞嘧啶抗真菌治疗过 程中可有 10 %～15 %真菌出现耐药 ,其耐药机制是 编码胞嘧啶透性酶、胞嘧啶脱氨基酶或 UMDP 的基 因发生点突变 ,从而导致其中一种酶失活[ 8 ] 。本研 究中 ,白假丝酵母菌仅对两性霉素 B、制霉菌素较敏 感 ,耐药率依次为4 . 84 %、9 . 68 % ;对 5 - 氟胞嘧啶、 氟康唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、伊曲康唑则表现为 耐药 ,耐药率分别为 41 . 94 %、63 . 98 %、61 . 83 %、 67 . 23 %、46 . 77 %、66 . 67 %。3 年来 , 白假丝酵母 菌除对两性霉素 B 和制霉菌素的耐药率显著降低 ( P < 0 . 01) ,对益康唑的耐药率没有太大变化 ( P > 0 . 05) 外 ,对 5 - 氟胞嘧啶、氟康唑、酮康唑、咪康唑 的耐药率显著增高 ( P < 0 . 01 或 P < 0 . 05) 。 白假丝酵母菌对唑类抗真菌药的耐药主要是获 得性的 ,天然耐药菌株少见。本资料白假丝酵母菌对 唑类抗真菌药的耐药性显著高于国内外的报道[9 - 12 ] 。 可能与三唑类抗真菌药尤其是氟康唑的广泛使用及 其在高危患者中广泛地预防性使用有关。 伊曲康唑对假丝酵母菌属的抗菌谱与氟康唑类 似 ,二者存在较高的交叉耐药现象。虽然伊曲康唑 在本院临床应用的时间相对较短 ,并且以口服为主 , 但白假丝酵母菌对其的耐药率已达 66 . 67 % ,该结 果与国内报道[ 13 - 14 ]基本相符。 耐药白假丝酵母菌感染导致的治疗失败日趋增 多。因此 ,临床医生在治疗白假丝酵母菌感染性疾 病时 ,当应用一种抗真菌药物治疗无效 ,则应考虑到 耐药菌株的产生 ,及时调整用药。高剂量氟康唑[ ≥ 12mg/ (kg ·d) ]用于治疗敏感性浓度依赖性的假丝 酵母菌属感染是安全、有效的 ;使用免疫调节剂细胞 因子 ( GM2CSF、G2CSF、γ2干扰素) 在治疗难治性真 菌病中已表现出有益的辅助疗效 ;交替使用药物 ,耐 药株的耐药性可能回复敏感性[ 15 ] ;另外 ,可采用新 的抗真菌药物。 虽然导致白假丝酵母菌感染的因素很多 ,但主 要是抗菌药物应用不合理而导致的。因此 ,临床医 生应早诊断、早治疗 ,合理使用抗菌药物和抗真菌药 物。微生物实验室要加强对假丝酵母菌属的培养、 分离、鉴定及药敏试验 ,积极开展真菌耐药性监测 , 为临床提供用药依据 ,指导临床合理使用抗真菌药 物。另外 ,还应加强病区卫生 ,严格执行消毒隔离制 度 ,预防交叉感染。 [参 考 文 献 ] [ 1 ] 　Jarvis W R. Epidemiology of nosocomial fungal infection wit h emphasis on Candida species[J ] . Clin Infect Dis ,1995 ,20 (6) : 1526 - 1530 . [ 2 ] 　Alexander B D , Perfect J R. Antifungal resistance t rends to2 wards t he year 2000 [J ] . Drugs ,1997 ,54 (5) :657 - 661 . [ 3 ] 　徐应春 ,王彭 ,谢秀丽 ,等. 美国临床实验室标准化委员会酵母 菌纸片扩散法敏感试验 2003 年版方案介绍[J ] . 中华检验医学 杂志 ,2003 ,26 (9) :579 - 580 . [4 ] 　任南 ,文细毛. 白色念珠菌致病机制的研究进展[J ] . 中国感染 控制杂志 ,2003 ,2 (2) :157 - 158 . [ 5 ] 　廖万清. 真菌病学[ M ] . 北京 :人民卫生出版社 ,1985 :243 . [ 6 ] 　李新华 ,张玉珍 ,高秀华. 医院真菌感染高危因素调查分析 [J ] . 中华医院感染学杂志 ,2005 ,15 (3) :280 - 281 . [7 ] 　朱宇宁 ,吕时铭. 白色念珠菌对氟康唑耐药机制研究进展[J ] . 国外医学临床生物化学与检验学分册 ,2004 ,25 (1) :17 - 19 . [8 ] 　黄文祥 ,王其南. 抗真菌药物的耐药性研究进展[J ] . 国外医药 抗生素分册 ,2003 ,24 (4) :176 - 179 . [ 9 ] 　Sobel J D ,Zervos M ,Reed B D ,et al . Fluconazole susceptibility of vaginal isolates obtained f rom women wit h complicated Can2 dida vaginitis ,clinical implications[J ] . Antimicrob Agent s Che2 mot her ,2003 ,47 (1) :34 - 38 . [ 10 ] 　陶风蓉 ,宜天芝 ,张秀珍. 用 E2test 方法监测酵母样真菌对氟 康唑的耐药性[J ] . 中华医院感染学杂志 ,2002 ,12 (8) :632 - 633 . [ 11 ] 　刘小平 ,李建武 ,樊尚荣 ,等. 临床常见念珠菌对 5 种抗真菌 药物的敏感性[J ] . 中华医院感染学杂志 ,2005 ,15 (6) :671 - 674 . [ 12 ] 　胡志东 ,岳娜 ,徐海茹 ,等. 临床标本中分离的白色念珠菌对 氟康唑的敏感性分析[J ] . 中华检验医学杂志 ,2004 ,27 (10) : 676 . [ 13 ] 　李兴禄 ,黄长武 ,陈维贤. 临床标本中酵母菌的耐药性分析 [J ] . 重庆医学 ,2003 ,32 (5) :568 - 569 . [ 14 ] 　张建平 ,张春盛 ,辛德清 ,等. 酵母样真菌的病原分布与耐药性 监测[J ] . 中国感染控制杂志 ,2005 ,4 (1) :61 - 63 . [15 ] 　韩旭东 ,张永信 ,章强强. 白色念珠菌对氟康唑耐药性的诱导 和回复研究[J ] . 中国抗生素杂志 ,2004 ,29 (6) :473 - 475 . ·124·中国感染控制杂志 2007 年 11 月第 6 卷第 6 期　Chin J Infect Cont rol Vol 6 No 6 Nov 2007