比色法快速测定奶粉和乳饮料中游离L_羟脯氨酸

“科技创新与食品产业可持续发展 ” 学术研讨会暨 �� � 年广东省食品学会年会 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 集 比色法快速测定奶粉和乳饮料中游离 !一轻脯氨酸 赵天珍 ’, 袁秀金 ‘, 谭贵良 ’气 , 江迎鸿 ’, 卢蔚 ’, 顾凯 ‘, 李向丽 � ∀# 广东省中山市质量计量监督检测所, 广东 中山 ∃� %� &∋ ∀� 中山火炬职业技术学院生物医药系, 广东 中山 ∃� %& (∋ 摘要 ) 建立了用蛋白沉淀剂沉淀蛋白质后 比色法快速测定奶粉和含乳饮料中游离 !一舟脯氨酸的方法 。 结 果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明 �# ∗ 叭 醋酸锌和 #� (叭 亚铁氛化钾共同沉淀蛋白质效果最佳 。 该方法线性范围为 � + # 林, − . !/ # + ( 卜留01! , 最低检出限为 �+ �∃ 叭, , 2 34 为 �+ ( 5一%+ ∗ 5 , 回收率为 ∗ # 5一5 5 。 在市场上抽查的部分扔粉和含乳饮料产品中有检测到游离 ! 6 舟脯氛酸 + 本方法具有经济、 操作简便 、 快速的特点 。 关健词 ) 蛋白质沉淀 7 比 色法 7 游离 !一在脯氛酸 中图分类号 ) � ( ∃8 & � 文献标识码) 9 4 :0: ; . <1 = 0<> 1 > ?≅ ; : : ! 一Α ΒΧ ; > Δ ΒΕ; > Φ< 1 : <1 Γ <ΦΗ Ε> Ι Χ : ; = 1 Χ ϑ0Κ 4 ; <1 Η ΛΒ Μ > Φ> ; <. :0;Β Γ : 0Ν > Χ Ο拟> Π <= 1 一Ν :1 , ,钊Θ Ρ Δ <Σ一<1 , , Π ΘΡ Τ Σ <一1 = 1 , , ’ , Υ训: 叭 1 , 一Ν > 1 , , , ! Σ Ι: <, , Τ Σ ς = <, , ! Φ兀= 1 , 一##, ∀# Ω Ν> 1 , ΚΝ=1 3 ΣΕ:;Ξ <Κ<> 1 Π: Κ0<1 , ϑ1 Κ0<0Σ 0: > ?Ψ Σ = Φ<0Β Ζ Γ :0;> Φ> ,Β, ΩΝ > 1 , ΚΝ=1 ∃� % �& , Τ Σ =1 , Χ > 1 , , ΜΝ<1 = ∋ ∀� 9 <> . : Χ<[ =Φ4 :Ε= ;0 . :1 0 > ? Ω Ν> 1 , ΚΝ = 1 Π> ;[ Ν Π: :Ν1 > Φ> ,Β Μ > Φ#: , : , Ω Ν> 1 , ΚΝ=1 ∃� % &( , Τ ∴=1 , Χ > 1 , , Μ Ν <1 = ∋ Θ Λ Κ0; = : 0) Θ . :0Ν > Χ ?> ; ; =] <Χ Χ: 0:;. <1 =0 <> 1 > ? ?;: : ! 一ΝΒ Χ ;> Δ ΒΕ;> Φ.: ∀!一Α ⊥Ε∋ <1 . <ΦΗ Ε> Ι Χ: ; =1 Χ <0Κ . <ΦΗ Χ;< 1Η ΛΒ : > Φ> ;< . :0;Β .: 0Ν > Χ = ?0 : ; Ε;>0 : <1 Ε;: :<Ε<0=0 <> 1 Ι =Κ Χ : Ξ :Φ>] : Χ <1 0Ν <Κ Κ0Σ ΧΒ + Π Ν: ;: ΚΣ Φ0 ΚΝ > Ι : Χ 0Ν =0 : > . Ε=; : Χ Ι <0Ν > 0Ν: ; Ε;> 0: <1 Ε;:[ <ΕΦ0= 0> ;Κ , 0Ν : : > 一Ε;: : <Ε<0=0 <> 1 Ι <0Ν Ε;: : <Ε<0=0 > ; � #∗ ,− ! =[ : 0=0 : Ο <1 : =1 Χ #�( ,− ! Ε> 0= ΚΚ <Σ. ?: ;; > :Β=1 <ΧΚ . =Β , ;:=0 ΦΒ :1Ν =1 [ : 0Ν : Ε;: : <Ε<0=0 <> 1 > ? Ε;> 0: <1 + Π Ν : . : 0Ν > Χ Ν=Χ = , > > Χ Φ<1 :=; ;=1 , : ∀� + #� 林,加工一 # + (� ΦΦ,− . !∋ =1 Χ 0Ν : Φ> Ι : Κ0 Χ : 0: : 0< > 1 Φ<. <0 ∀� + �∃ ,−Η , ∋+ Π Ν : 2 34 =1 Χ ;: : > Ξ : ;Β ;=0 <> Κ Ι : ;: � + (5一 ‘∗5 =1 Χ ∗ #5 一∗ (5 , ;: ΚΕ:[ 0<Ξ : ΦΒ + !一Α ⊥Ε Ι = Κ ?> Σ1 Χ ?;> . Κ > . : ΚΕ> 06 :Ν : : Η: Χ . <ΦΗ Ε> Ι Χ: ; =1 Χ . <ΦΗ Χ;< 1 Η ?; > . ΚΣΕ :;. = ;Η: 0 + ΠΝ : . : 0Ν > Χ Ι = Κ Κ<. ΕΦ: , ?= Κ0 =1 Χ Φ> Ι 一: > Κ0 + ς :Β Ι > ; Χ Κ ) Ε;>0 : <1 Ε;: :<Ε<0=0 <> 1 , [ > Φ> ;< . :0;Β, ?; : : !一ΝΒ Χ ;> Δ 即;> Φ<1 ! 一轻脯氨酸 ∀! 一ΝΒ Χ; >Δ 即;> Ν1: , ! / Α ⊥ ] ∋是≅< Κ[Ν :; 于 #∗ � � 年首次从白明胶中分离获得的一种具有独特 生理活性的氨基酸 , 其化学式为 Μ ∃ Α ∗Ρ � & , 分子量 #&# + # & , 白色粉末 , 无毒无臭略带甜味 , 易溶于水 。 ! 一Α ⊥ Ε 是人体胶原蛋 白的组成成分 , 但不属于 �� 种 常见的氨基酸 。 由于 ! 一Α ⊥ Ε 具有多种重要的生理功 能与独特的生物活性_Φ# , 可用作抗氧化 、 防腐和保鲜 和许多药物合成原料以及化妆品等的添加剂_�⎯ , 因此 近年来在医药 、 生化 、 食品及美容等领域的研究和开 发备受瞩 目 。 尽管 ! / Α ⊥Ε 具有如此多的功效 , 但我国最近出 台的 《食品添加剂使用卫生标准 � 8 ( � 一� � � 8∋∋ 并不允 许其作为食品添加剂添加到各类食品中 。不过最近在 我们检测过程中却发现一些企业为了追求利润 , 使自 己产品的蛋白质含量达标而在生产奶粉和乳饮料过 程中非法添加了游离的 ! / Α ⊥ Ε 。 正如之前在含乳饮 料中超范围使用蛋白质的替代品一甘氨酸事件 ∀Φ 份 甘氨酸相当于四份的蛋白质 ∋ _&# 一样 , 奶粉和含乳饮 料中添加 ! 一Α⊥Ε 的问题越来越引起人们的广泛关 注 。 ! 一Α ⊥ ] 的测定主要包括离子色谱法 _%⎯ 、 比色法 卜(# 、 氨基酸分析仪法 _86 # 和 ΑΦ, ! [ 法_∗# 、 电泳法等 , 作者简介 ) 赵天珍 ∀ #∗ �一∋ , 女∀汉∋, 硕士助理工程 师 , 主要从事食品检测分析工作 。 恤讯作者 ) 谭贵良∀# ∗ 88 一 ∋, 男, 博士 , 主要从事食品及环境安全方面的研究工作 α . =<Φ ) Υ>: 0=1 β Ν> 0. =<Φ ￡> . 比色法快速测定奶粉和乳饮料中游离 !一轻脯氨酸 其中以比色法最为常用 。 我国于 #∗ ∗ � 年将比色法定 为 《肉与肉制品 !∀ 一卜轻脯氨酸含量测定》_∃⎯ 的国家 标准方法 , 并且一直沿用至今 。 但遗憾的是 , 目前还 未见对奶粉和含乳饮料中游离 ! 一Α⊥ Ε 进行测定的研 究报道 。本文首先通过对奶粉和乳饮料中的蛋白质进 行沉淀处理 , 再采用经典的比色法对其中游离的 ! 一Α ⊥Ε 进行了测定 , 旨在判定一些企业是否为了使 蛋白质含量达标 、 以次充好而非法添加这种游离的 !一Α ⊥Ε , 获得的相关结果最终可为食品安全监管部门 的监督和执法提供依据 。 # 材料与方法 # + # 主要仪器和试剂 # + # + # 主要仪器 紫外可见分光光度计 ∀∴ χ6 � ��# 岛津仪器有限公 司 ∋ , 电热恒温水浴锅 ∀4 ς 一∃ � ( 型 上海精宏实验设 备有限公司 ∋ , 电子天平 ∀北京赛多利斯仪器系统有 限公司 ∋ 。 # + # + � 试剂 蛋白质沉淀剂 ) 沉淀剂 # ) ��� ,− ! 醋酸铅 7 沉 淀剂 � ) �# ∗ ,− ! 乙酸锌 ∀称取 �# + ∗ ∗ 乙酸锌 , 加入 冰醋酸 & . ! , 蒸馏水定容至 #� � #ΦΦ! ∋ 和 #� ( 留! 亚 铁氰化钾 ∀称取 #� 一 ( ∗ 亚铁氰化钾 , 蒸馏水定容至 #� � . ! ∋ 7 沉淀剂 & ) ( . >比 盐酸 7 沉淀剂 % ) &� 叭 醋酸 。 缓冲溶液∀ΕΑ 一(∋ ) 称取 ∃� + � ∗ 柠檬酸 , �( + & ∗ 氢 氧化钠和 #%( + # ∗ 乙酸钠 , 蒸馏水溶解 , 定容至 #� �� . ! 。 再加入 �� � #1 ! 蒸馏水和 &�� #ΦΦ! 正丙醇 , 混匀 , 保存 。 氯胺 Π 溶液 ) 称取 # + %# ∗ 氯胺 Π 溶解 #� . ! 蒸 馏水 , 依次加入 #� .! 正丙醇和 � .! ]Α ( 缓冲液 ∀溶液现用现配 ∋ 。 显色剂 ) 称取 #� +� ∗ 对二氨基苯甲醛 , &∃ .! 高 氯酸溶解 , 混匀后缓慢加入 (∃ . ! 异丙醇 ∀溶液现 用现配 ∋ 。 # + � 分析方法 # + � + # 样品前处理 分别选取有代表性的市售奶粉和含乳饮料样品 各两份 , 用作蛋白质沉淀剂沉淀效果的实验材料 。 具 体方法如下 ) 准确称取 �� ∗ 奶粉或乳饮料样品 ∀精 确至 � + � � � # ∗ ∋ 于 � ∃> .! 容量瓶中 , 加入 # � 林,− . !的 ! 一Α⊥Ε 标准溶液 Φ + > . ! , ( � ‘Μ 加热 � � . <1 , 冷却 至室温 ∀�∃ ℃ ∋后分别加入 ∃ . ! 上述四种蛋白质沉淀 剂 , 用以沉淀蛋白质 。 加超纯水定容至刻度 , 充分摇 匀 , 静止 &� . <1 , 溶液分层 , 用定量滤纸滤 去δ _ 层脂 肪 , 弃去前 #� . ! 初滤液后 , 收集流出液 , 摇匀备 用 。 从制备好的待测液中吸取 � + >. ! 于 �∃ . ! 具塞 试管 。 游离 ! 一Α ⊥ Ε 的回收率测定按 # + � + � 步骤进行 。 通过比较添加不同的沉淀剂后测定游离 ! 一Α ⊥Ε 回收率 ∀! 一Α⊥ Ε 的测定参见 # + �+ &∋ 用来决定后续大 量样品测定时沉淀剂的最佳选择 。 Φ + � + � !一Α ⊥ ] 标准曲线的绘制 ! 一Α ⊥Ε标准贮备液 ∀∃�� 陀−?1! ∋ 配制 ) 准确称 取 ! 一Α⊥Ε 标准品 �+ � ∃ � � ∗ , 加入 # 滴 # . >Φ −! 盐酸溶 解 , 蒸馏水定容至 ∃�� . ! , %℃冰箱保存 。 标准曲线工作母液配制 ) 分别吸取 ∃∀∋� 林,− 01! ! 一Α ⊥Ε 标准储存液 � 、 � + ∃ 、 # 、 � 、 % 、 ( 、 1 #! 至 #� � . ! 容量瓶 , 定容至 #�� . ! , 得到浓度分别为 � 、 � + ∃ 、 ∃ · #� · � � 、 & � 、 % � 林, −. ! 的 ! 一Α ⊥ ] Φ 作母液∀现用 现配∋。 以蒸馏水为空白 , 吸取 ! 一Α ⊥ Ε 标准工 作液 # + � . ! , 加入氯胺 Π Ω . ! 溶液 , 充分混均后室温条件下 反应 �� . <1 后 , 加入显色剂 � . ! , 于 ( �℃ 水浴恒 温反应 �� . <1 , 迅速冷却至室温后定容至 � ∃ . ! , ∃∃ 1 . 处测定吸光度 。 以 !一Α ⊥ Ε浓度为横坐标 , 吸光度 为纵坐标绘制标准 曲线 , 求出回归方程和相关系数 。 # + �+ & 奶粉和含乳饮料 ! 一Α ⊥Ε 的测定 采用合适的蛋白质沉淀剂量对样品进行预处理 。 预处理方法同 # + � + # 。 然后准确吸取 � + > . ! 滤液于 �∃ . ! 具塞试管 , 以下按 # + � + � 步骤测定其中的 ! 一Α ⊥ Ε 。 将吸光度代入回归方程求出轻脯氨酸含量 。每个样品 做三次重复。 � 结果与讨论 � + # 不同蛋白沉淀剂沉淀蛋白效果比较 由于比色法测定 ! 一Α ⊥ Ε 时对所测定样品要求要 澄清透明 , 并且需要测定的样品中不含有有机物 、 大 分子物质 、 蛋白等物质 , 因此在测定实际样品前必须 对样品进行前处理 。 为 了除去影响测定结果的蛋 白 质 , 本文比较了四种蛋白质沉淀剂对奶粉和乳饮料中 蛋白质 的沉淀效果 , 以计算各种处理后 ! 一Α ⊥Ε 回收 率的高低来比较沉淀剂的优劣 。 由表 # 可看出 , 采用 第 � 种沉淀方法 , 即 � #∗ ,− ! 醋酸锌和 #�( ,− ! 亚铁 氰化钾共同的方法对蛋白质的沉淀效果最佳 , ! 一Α ⊥Ε 的回收率达 ∗� 5 以上 , 可以满足定量分析的要求 。 同样 , 戴军等人∀� � �8∋ 也研究发现这两种物质联合使 用可使蛋 白质的沉淀效果最佳Φ%⎯ 。 表 # 四种沉淀剂处理后奶粉和含乳饮料中 ! 一Α⊥ϑ ∋ 的回收率 “科技创新与食品产业可持续发展” 学术研讨会暨 �� � 年广东省食品学会年会论文集 几ΛΦ: # ΠΝ : ;: : > Ξ: ;Β ;=0 <> > ? ! 一Α ⊥Ε <1 . <ΦΗ Ε> Ι Χ : ; = 1 Χ . <ΦΗ Χ;< 1 Η 0;: =0 : Χ Ι <0Ν ?> Σ; Η< 1 Χ Κ > ?Ε;: [ <Ε<0= 0> ; 表 � 线性范围 、 相关系数及检出限 几Λ Φ: � Π Ν : Φ<1 := ; ;= 1 , : , : >;;: Φ=0< > 1 : > :??< : <: 1 0 =1 Χ 0Ν : Χ: 0: : 0<> 1 !一Α ⊥Ε 的回收率−5 ∀1 ε & ∋样品 ##而 0Κ 沉淀剂 # 沉淀剂 � 沉淀剂 & 沉淀剂 % 化合物 奶粉 含乳饮料 #� + & �8 + % #� + ( &% + � 线性范围 −协, −. ! 相关系数 −; 检出限 − , −Η , !一Α ⊥Ε � + # / # + ( � + ∗∗∗ 一气、�、�� !,∀、�只#, 了亡」∀、∃‘% & ∋ & 线性范围和检出限 配制浓度分别为 ( 、 ( ∋ ) 、 ( ∋ & 、 ( ∋ ∗ 、 ( ∋ + 、 ) ∋ & 、 ) ∋ , 叫− . 轻脯氨酸标准溶液经比色法测定后 , 以浓 度为横坐标 , // + 01! 处测得的吸光度为纵坐标绘制 标准曲线 , 求得的线性方程为 # 23 (∋ ( ) )∗ 4 (∋ ( 5& &6 7其 中 2 表示测定的吸光度 , 6 表示 . ∋ 8 9: 的浓度 , 单 位为 林留− .; 。 线性范围、 相关系数和检出限见表 & 。 &∋ 5 样品加标回收率和精密度 分别在奶粉和含乳饮料中选取有代表 & 个样品 , 对其进行加标 7分别加入 ) ∋ < −. 浓度为 )( 呵−. 和&( 林=加工 的 . 一8 9: ; 后 , 采用 & )> 叭 醋酸锌和 )(,留. 亚铁氰化钾共同沉淀蛋白质的方法对样品进行预 处理 , 比色测定 . ?8 9≅ 的浓度 , 最后计算出加标回 收率 。 表 5 . ? 8 9≅ 回收率和精密度 7 ! 3 5; Α ΒΧ ΔΕ 5 Φ Ε Ε < Γ Ε 2 Β0 Η < Ι < ϑ . 一89 ≅ Β! Κ Φ Λ Μ 样品 奶粉 ) 本底值Ν陀 加入量Ν陀 测定值Ν雌 回收率Ν Ο 精密度 ΝΟ Π Μ )( Π Μ & ( > ) ∋( >5 ∋ / >∗>/Ο>&>∗ > ∋ ) )+ ∋ ‘ )& ∋ & )∋ ) !∃!%, ∋且,‘奶粉 & !Θ�!%,),‘ΜΜ ΔΡΠΠ5含乳饮料 含乳饮料 & Δ+ Δ& 5 ∋ & & ( && ∋ ( >∗ ∋ ( & ∋ , Π Μ # 未检测出 。 由表 5 可以看出 , 奶粉和含乳饮料中 . 一8 9 ≅ 的 回收效果较为理想 , 它们的回收率分别在 >) ∋ (Ο 一 > / ∋ /Ο和 > &∋ (Ο一 > ,∋ (Ο之间 , 含乳饮料中 . 一8 9 ≅ 的 回收效果略好于奶粉 。 此外 , 随着 . 一8 9≅ 加入量高 , 样品中 . ?8 9 ≅回收率也相应高 , 精密度在 & ∋ , Ο 一 ∗∋ > Ο之间 。如此高的样品回收率和精密度完全可 以满足 定量分析研究的需要 , 用此方法测定奶粉 、 含乳饮料 中游离 . 一轻脯氨酸是可行的 。 & ∋ ∗ 奶粉与乳饮料中添加游离 . ? 8 9 ≅ 的调查结果 用上述建立的方法对中山市抽查的 &5 种奶粉和 & > 种含乳饮料进行了测定 , 根据判定标准 7 以检出 限 (∋ ( / 叭= 为基准 , 样品含量 Σ (∋ (/ 叭 = 判为合格 ,反之如果样品含量全(∋ (/ 叭= 判为不合格 ; 获得的调 查结果如下 # & 5 种奶粉中有 / 批不合格 , 合格率为 Τ +∋ 5Ο Υ & > 种含乳饮料中有 & 批不合格 , 合格率为 > 5 ∋ )Ο 。 经调查发现 , 这些不合格样品中 . ς8 9≅ 含 量为 (∋ (/ 一( ∋ )( >瓜= 之间 。 由此表明 , 一些企业为了 使蛋 白质含量达标在奶粉和含如乳饮料中违规添加 了游离的 . 一8 9≅ 。 与含乳饮料相 比 , 这种现象在奶 粉中显得较为严重 。 5 结论 本文建立了奶粉和含乳饮料中游离 . ∋ 89 ≅ 的测 定方法 , 所建立的方法操作简单 、 快捷 、 可靠 、 成本 低 。 从蛋白质沉淀的预处理来看 , 醋酸锌和亚铁氰化 钾的蛋白质沉淀效果最佳 。对中山市的奶粉和含乳饮 料调查结果发现 , 这些产品中含有国家不允许添加的 游离 . ?8 9 ≅ 存在 , 表明企业有非法添加这些化合物 的现象 。 建议食品监督部门应引起重视 , 加大对这些 产品的执法和查处力度 。 比色法快速测定奶粉和乳饮料中游离!一轻脯氨酸 【(」 参考文献 _Φ⎯ 吴显荣+ 氨基酸营养 + 氨基酸杂志 ∀Υ Θ . <Θ : <Χ ∋_Υ⎯ , #∗ ∀� ∋) � # 一� + 【�⎯ 吕红线 + 从骨胶中制备轻脯氨酸的研究_Υ⎯ + 山东轻工业 学报 , #∗∗ 8 , # #∀% ∋) ∃& 一∃( + _& ⎯ 王丁棉 + 含乳饮料惊现甘氨酸_Υ⎯ + 饮食科学 , ���( , ∀Φ �∋) � � 一� & + _%⎯ 戴军 , 王娟 , 高秋菊 , 等 + 离子色谱法测乳饮料及乳制品 中游离甘氨酸_Υ⎯ + 中国乳品工业 , �� �8 , &∃ ∀&∋) % 8 一%∗ · _∃# Τ 9− Π ∗( ∗∃ + �& 一 #∗∗ � 肉与肉制品 !∀ 一卜轻脯氨酸含量测定 【3 ⎯ + _8 ⎯ _ 」 _∗」 沈同, 王镜岩+ 生物化学 ∀上册 ∋ 「Γ ⎯ + 北京 ) 高等教育 出版社 , #∗∃ � ) #∃% 一 �(� + 孙玮 , 潘峰, 袁发焕 , 等+ 血清游离轻脯氨酸的快速检测 _Υ⎯ + 分析测试学报 , �� �� , Ω Δ∀& ∋) � 一 � + 曾暖茜 , 王洪健, 周兴起 , 等+ 氨基酸 自动分析仪对乳制 品中轻脯氨酸的测定方法研究_Υ⎯ + 现代食品科技 , �� � , �% ∀8∋) 8 #∗ 一8 � # + 唐志毅 , 肖路延 , 罗玲 , 等 + 一种新的高效液相色谱法选 择性测定尿轻脯氨酸_Υ⎯ + 中华医学检验杂志 , #∗∗∗ , �� ∀%∋ ) � # � 一� #� + �&%