PCR实验室SOP文件
前 言
我院是一所综合性三级医院。近年来，随着临床医学的不断进步，检验医学也得到了迅猛的发展。检验科为了更好的满足临床诊断的需求，根据卫生部临检中心制定的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发
[2002]10号)、《临床基因扩增检验实验室工作规范》(卫检字2002第8号)文件，设立了临床基因扩增检验实验室，并于2009年6月着手编写实验室质量管理程序文件。经过试运行，反复讨论和修改第一版已定稿。从即日起开始实施。
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1.质量方针 本实验室的质量方针是:准确、及时、可靠。
2.质量目标
全面贯彻质量方针，建立科学、合理的实验室质量管理体系，严格按照程序规定做好检验工作，不段提高自身素质和技术水平，为临床和患者提供准确、可靠的诊断依据。
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1.目的: 文件管理有序和便于资料的查用
2.范围: 本质量管理手册及实验室相关资料
3.负责人:王宇飞
4.规章
4.1本质量管理手册分正副本，正本由主任保管于主任办公室;副本由实验室负责人保管于
实验室;
4.2本质量管理手册有电子文档，备有一份软盘，由主任保管;
4.3本质量管理手册不能外借，不能复印，不能抄写，只能在本室阅读;
4.4临床基因扩增实验室的每区有相应的质量管理文件副本，由实验室工作人员保管;
4.5本实验室的相关资料由实验室工作人员填写，保管于相关实验室，超过一年的资料由主
任保管。
4.6实验原始数据电子文档每天保存于电脑中，一年的电子文档备于光盘中，保存五年;病
人原始送检单及原始资料记录本保存两年;其它实验室的记录保存两年，超过保存期可按实际情况处理。
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1.目的:保证实验室工作规范而有序的进行
2.范围:检验科临床基因扩增实验室
3.负责人: 王宇飞
4. 附表02实验室工作人员一览表
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1.目的: 规范实验室人员的管理，保证实验室具备开展该类实验的能力。
2.负责人:王宇飞
3.人员要求:
3.1基因扩增实验室工作人员应具备较广泛的分子生物学知识，掌握相关学科知识及
应用能力(实验技能、分析能力、沟通能力)。
3.2实验操作人员应取得卫生部临检中心或内蒙古自治区临检中心颁发的上岗培训证
书。
3.3工作人员上岗前必须掌握PCR实验室管理文件及要求，并由实验室主任核查。
4.人员配置:
4.1实验室根据工作开展情况配备足够数量的工作人员。目前，实验室由实验室主任、
两名青年技师组成。
4.2实验室主任负责实验室全面管理、解决与临床沟通及技术疑难问
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
，组织工作人
员参加相关知识培训，实验室主任不在岗时，应指定代理人负责。
4.3两名青年技师负责实验室技术管理及临床标本的检验。
5.人员管理:
5.1按时上下班，不迟到、早退。不得擅离工作岗位，特殊情况需请假。
5.2实验人员须保持仪表整洁，语言礼貌、举止文明，对待来访病人或电话应耐心细致，
解释明确，不得推脱或生硬回绝。
5.3进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。
5.4非本室工作人员未经允许不得进入实验室。
5.5实验室内不得吸烟、饮食及进行化妆。
5.6实验室技术人员必须严格执行PCR实验室制定的各项操作规程，不得随意更改操作步
骤。明确人员的责任分工，保证工作的顺利完成。
5.7所有仪器须有专人负责，有使用维护记录，保持仪器卫生整洁;实验人员必须熟
悉仪器性能方允许操作，仪器使用前必须检查是否完好，一旦发现问题，需及时向科室负责人反映，不得擅自拆装;非仪器操作人严禁使用。
5.8实验室内使用的一次性物品如离心管、吸头等要做好无菌灭活准备。
5.9每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，检查电源，水龙头，负责安全工作。
5.10实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有阻碍。
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5.11合理规划实验室内物品，抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别，做
到摆放整齐、有序，容易寻找。
5.12每日实验结束后及时记录，清洁实验台面和地面，用紫外灯消毒实验台面及实验
室。报告单按时发送，原始记录存档清晰，以备查询。
5.13每天下班前要关好门窗、检查空调和仪器的电源是否关闭，处理好废弃物，内务
整理完毕，关闭实验区。
6.人员培训
计划
项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载
:
6.1实验室主任(或其指定代理人)每年必须参加卫生部中心PCR室间质评总结会议。
6.2实验室主任督促指导本室工作人员通过继续教学或自学提高业务素质。
6.3实验人员参加卫生部临检中心或省(自治区)临检中心举办的临床核酸扩增培训班;
6.4安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训;
6.5实验室工作人员每1,2年至少参加1次临床基因扩增检验技术的省级或国家级继续
教育项目，参加相关学术交流会议;
6.6定期对临床医护人员进行有关核酸扩增技术，标本采集、保存、运输知识的培训;
组织科室人员学习核酸扩增相关知识，质量管理手册;组织科室人员学习讨论工作过程中出现的相关问题，并提出可行的解决
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
。
所引用图表:
附表02实验室工作人员一览表
人员培训计划及培训记录见“人员档案”
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1.目的: 保证实验室的良好工作环境和实验结果的准确性。
2.负责人:王宇飞
3.程序:
实验室分标本接收区和三个隔离区: 试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增分析区。进入各区严格按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区?标本制备区?扩增、分析区。各区及其设备、物品必须有明确的标记，严禁混用。
3.1试剂贮存和准备区
3.1.1实验人员进入该区穿专用白色工作服，及专用的工作鞋或使用一次性鞋套，操
作中须戴手套。
3.1.2使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录书写工整详细。
3.1.3记录实验室温度和相对湿度，绘制冷柜温度图，打开排风扇，提前开启洁净工作
台紫外灯和风机组工作15-30分钟。
3.1.4所使用的离心管、吸头等需事先经高温高压灭菌处理，使用时应在消毒有效期内。
3.1.5清点库存试剂，检查是否有过期或将近到期的试剂，作报废处理或排列优先使用，
避免浪费;取出当天实验须使用或配制的试剂，其余试剂要立即收好放回冷柜内，然后记录试剂的详细保存情况。
3.1.6在洁净工作台内配制试剂，将准备好的试剂分装到PCR反应管中，放入专用的
试剂管架中，填写
工作流程
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表及相关仪器使用维护记录表，还原实验台面，将
本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋并记录。
3.1.7准备结束后，清洁实验台及地面，打开紫外灯消毒30,60分钟并记录。
3.1.8将试剂管架、工作流程表及本区垃圾带出实验室，白色工作服留在本区。
3.2标本制备区
3.2.1实验人员进入该区换上专用蓝色工作服、及专用的工作鞋或使用一次性鞋套，
戴手套，手套在实验过程中疑有污染应立即更换。
3.2.2使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
3.2.3将带入本区的试剂放入冰箱冷藏室试剂存放专区暂存。记录实验室温度、相对
湿度和水浴箱温度，绘制冰箱温度图，打开排风扇，开启生物安全柜20分钟
后使用。
3.2.4取出冰箱内待测标本，并将冰箱内一周前的已测标本取出，丢入废液垃圾桶，
然后记录标本的保存情况。
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3.2.5在生物安全柜中按照操作说明书处理标本，将处理后的标本加入分装有试剂的
相应PCR反应管中。处理后的标本放入冰箱冷藏室标本存放专区暂存，实验结束后装入塑料袋内密封后放入生物垃圾袋内。
3.2.6填写工作流程表及相关仪器使用维护记录表，还原实验台面，关闭所有仪器。
3.2.7使用过的离心管、吸头须置于盛有10,84消毒液的废液桶中，实验结束后方丢
入生物垃圾袋内，患者样品应按有生物传染性危险品对待。
3.2.8将本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋并记录。
3.2.9本区应避免不必要的走动，实验结束后，清洁实验台及地面，打开紫外灯消毒
30,60分钟并记录。
3.2.10将专用的试剂管架，工作流程表，检验申请单及垃圾带出本区，将蓝色工作服
留在本区。
3.3扩增、分析区
3.3.1实验人员进入该区须更换专用粉红色工作服、及专用的工作鞋或使用一次性鞋
套，戴手套。
3.3.2使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。
3.3.3记录实验室温度和相对湿度，打开排风扇，打开扩增仪预热30分钟。
3.3.4将标本制备区带入的反应管(已加样)上机扩增。
3.3.5扩增完成，保存检测结果后关机，立刻取出反应管装入塑料袋内密封后放入生
物垃圾袋内。分析并记录检测结果，填写工作流程表，绘制质控图，记录仪器使用时间和运行状态。
3.3.6专用的试剂管架放入75%的酒精中浸泡12小时以上。
3.3.7将本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋并记录。
3.3.8严禁本区物品带至其他区，实验结束后清洁该区打开紫外灯照射30,60分钟，
记录紫外灯使用情况。
3.3.9将检验申请单和垃圾带出实验室，粉红色工作服留在本室再离开实验室。
3.3.10检验报告单在科室联机系统上统一发放，原始报告单保存在科室统一存放处。
3.4标本接收区
本临床基因扩增检测实验室配备两名实验员，在以下描述中分别称为第一实验员和第二实验员。
3.4.1第一实验员已经进入实验区后，不能返回的情况下，第二实验员在此接收、传递标
本，接待来访。
3.4.2第二实验员在收到标本，验收登记后，将标本通过缓冲区送入标本制备区。
3.4.3每天的标本登记记录，应书写工整详细。
3.4.4将本区所有废弃物装入垃圾袋，封口，交医院统一处理，在垃圾筒上套好新的垃圾
袋。
3.4.5每天要打开紫外灯消毒45分钟，记录紫外灯使用情况。
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所引用图表:
附表04.干式恒温器使用记录表
附表05.应急处理记录表
附表06.离心机使用记录表
附表09-1.检测后标本保存记录表
附表09-2.待检标本保存记录表
附表10.基因检测结果记录表
附表12.BIO-RAD iCycler荧光定量扩增仪使用记录表 附表17-1.生物安全柜使用记录表
附表17-2.洁净工作台使用记录表
附表21实验室温度、湿度、水浴箱温度记录表 附表22垃圾处理记录表
附图3.冰箱温度记录图
附图2.室内质控图
基因检验报告单格式
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1.目的:使实验室日常内务管理工作顺利进行，工作专人负责。
2.范围:实验室相关人员
3.负责人:王宇飞
4. 制度: 本核酸扩增荧光检测实验室配备两名实验员，在以下描述中分别称为第一实验员和第二实验员。实验室每周二安排做HBV-DNA、TB项目检测(定性)，周五进行实验室
的卫生清洁、离心管、吸头的高压灭菌及仪器的维护保养等工作。
4.1 标本接收区内务
管理制度
档案管理制度下载食品安全管理制度下载三类维修管理制度下载财务管理制度免费下载安全设施管理制度下载
4.1.1 设立标本接收区的主要目的:接收待检测的标本，认真填写记录，并提供咨询服务。
4.1.2 每天工作开始前，第二实验员进入该区，清洁台面及地面，将台面物品摆放整齐。
4.1.3检测标本核对无误后，填写可接收标本记录表，统计当天待检标本数，告知第一实验员
后，将标本带入标本制备区进行检测(如当天不做，则放入专用冰箱中保存)。
4.1.4每天的登记记录，应书写工整详细，使用本室专用的记录本、纸和笔。
4.1.5每天下班前将本区所有废弃物装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋并记录，
将垃圾送至实验室外特定的实验垃圾区。
4.1.6每天要打开紫外灯消毒30,60分钟。
4.2试剂贮存和准备区内务管理制度
4.2.1第一实验员进入该区在缓冲间穿本区专用白色工作服、一次性鞋套,戴一次性手套，手套
要经常更换。
4.2.2 每天实验开始前，打开排风扇，提前开启洁净工作台紫外灯和风机组工作15-30分钟，
记录实验室温度、湿度，清洁实验室(见实验室清洁制度)。
4.2.3配制10%84消毒液2000ml ,分别倒入废液桶(不少于桶的1/5)和清洁盆里待用。将清
洁用品带入实验区后关闭隔离门，更换手套准备配制试剂。
4.2.4取出当天实验需配制和使用的试剂，绘制冷柜温度图，待试剂恢复室温后，按照试剂配
制的标准操作规程准备当天实验所需的试剂，分装后放入专用的试剂管架，其余试剂要立即收好，做好标记放回冷柜内。
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4.2.5本室的所有仪器参见“标准操作规程”并及时记录仪器状态，填写工作流程表。每次实
验记录，应使用本室专用的记录本和笔。
4.2.6 实验中使用的离心管、吸头等应经过灭活无菌处理(应在消毒的有效期内)，用后放入废
液桶中。
4.2.7试剂准备完成后，关闭仪器电源，用10%84消毒液擦拭实验台和离心机，再用75%酒精擦
拭，并用75%酒精擦拭加样枪、镊子、剪刀等物品，之后还原实验台面,开启洁净工作台紫外灯，将垃圾封口后更换新的垃圾袋并记录。
4.2.8打开隔离门，将配好的试剂、工作流程表、清洁用品、垃圾(封口后)带入缓冲区，开
启实验区紫外灯，关闭隔离门。整理好清洁用品，摘掉鞋套和手套放入生物垃圾袋内，洗手后脱去专用工作服，更换新手套，将实验区带出的垃圾和缓冲区的垃圾一同封口，更换新的垃圾袋。将配好的试剂、工作流程表、垃圾带出该区，开启缓冲区紫外灯(约45分钟)，关闭排风扇。(注: PCR其它室的用品不得带入本室)
4.2.9将配好的试剂、工作流程表经缓冲区交给标本制备区内的第二实验员，垃圾放入实验室
外特定的实验垃圾区，由专人交医院统一处理。然后进入扩增区开始工作。
4.3 标本制备区内务管理制度
4.3.1第二实验员进入该区在缓冲区穿本区专用蓝色工作服、一次性鞋套，戴一次性手套，手套需常更换。
4.3.2 每天实验开始前，打开排风扇，提前开启生物安全柜约20分钟后再使用，记录实验室温
度、湿度、水浴箱温度，清洁实验室(见实验室清洁制度)。
4.3.3配制10%84消毒液2000ml ,分别倒入废液桶(不少于桶的1/5)和清洁盆里待用。将清
洁用品带入实验区后关闭隔离门，更换手套后准备标本提取。
4.3.4取出当天要检测的标本，并将一周前已测的标本取出丢入废液桶中，填写标本保存记录
表;核对待测标本后，按标准操作规程在生物安全柜中进行标本提取。
4.3.5本室的所有仪器参见“标准操作规程”并及时记录仪器状态，填写工作流程表。每次实
验记录，应使用本室专用的记录本和笔。
4.3.6实验中使用的离心管、吸头等应经过灭活无菌处理(应在消毒的有效期内)，用后放入废
液桶中。
4.3.7将带入本区的试剂放入冰箱冷藏室试剂存放专区暂存，待标本提取完成后将处理后
的标本加入分装有试剂的相应PCR反应管中。将当日已测的标本放入冰箱中标本保存
专区冷冻保存，处理后的标本放入冰箱冷藏室提取后标本存放专区暂存，实验结束后
装入塑料袋内密封后放入生物垃圾袋内。
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4.3.8加样完成后，关闭仪器电源，用10%84消毒液擦拭实验台和离心机，再用75%酒精擦拭，
并用75%酒精擦拭加样枪、镊子等物品，之后还原实验台面，开启生物安全柜紫外灯，关闭排风扇，将垃圾封口后更换新的垃圾袋并记录。
4.3.9打开隔离门，将加样后的试剂、工作流程表、检验申请单、清洁用品、垃圾(封口后)
带入缓冲区，开启实验区紫外灯，关闭隔离门。整理好清洁用品，摘掉鞋套和手套放入生物垃圾袋内，洗手后脱去专用工作服，更换新手套，将实验区带出的垃圾和缓冲区的垃圾一同封口，更换新的垃圾袋。 将加样后的试剂、工作流程表、检验申请单、垃圾带出该区，开启缓冲区紫外灯(约45分钟)。
4.3.10将加样后的试剂、工作流程表、检验申请单、经缓冲区交给基因扩增区内的第一实验员，
垃圾放入实验室外特定的实验垃圾区，由专人交医院统一处理。然后进入标本接收区处理当天实验开始后所收到的标本。
4.3.11本区应避免不必要的走动，PCR扩增后的物品不得带入本区。
4.4 扩增区及产物分析区内务管理制度
4.4.1 第一实验员进入该区在缓冲间穿本区专用粉红色工作服、一次性鞋套，实验中须戴一次
性手套，手套常更换。
4.4.2每天实验开始前，打开排风扇，提前打开扩增仪预热30分钟，记录实验室温度、湿度，
清洁实验室(见实验室清洁制度)。
4.4.3配制10%84消毒液1000ml ,倒入清洁盆里，将清洁用品放入实验区待用。
4.4.4本室的所有仪器参见“标准操作规程”并及时记录仪器状态，每次实验记录，应使用本
室专用的记录本和笔。
4.4.5将标本制备区带入的反应管(已加样)按照扩增区的标准操作规程上机扩增。
4.4.6专用的试剂管架放入75%的酒精中浸泡12小时以上。将检验申请单上的内容填写到
基因检测结果记录表中。
4.4.7扩增完成，保存检测结果后关闭扩增仪，立刻取出反应管装入塑料袋内密封后放入垃圾
袋内。分析并记录检测结果，关闭计算机，填写工作流程表，绘制质控图，记录仪器使用时间和运行状态。(如发现室内质控品结果有问题时，则这次临床结果作废，并向科主任报告，认真分析原因，作好详细记录)。
4.4.8实验结束后，用10%84消毒液擦拭实验台，再用还75%酒精擦拭，还原实验台面，关
闭排风扇，将垃圾封口后更换新的垃圾袋并记录。
4.4.9将检验申请单、清洁用品、垃圾带入缓冲区，开启实验区紫外灯，关闭隔离门。整理好
清洁用品，摘掉鞋套和手套放入生物垃圾袋内，洗手后脱去专用工作服，更换新手套，将
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实验区带出的垃圾和缓冲区的垃圾一同封口，更换新的垃圾袋。将检验申请单、垃圾带出该区，开启缓冲区紫外灯(下午上班后关闭)。
4.4.10检验报告单在科室联机系统上统一发放，要认真核对检验结果，仔细填好化验单，
作好签名。原始报告单保存在科室统一存放处。
4.4.11 PCR扩增室的物品不得带入扩增前区。
注:当天实验结束后，由第二实验员依次进入各区关闭紫外灯，检查水电、门窗后关闭实验
室。
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1.目的: 保证实验室清洁工作顺利进行
2.范围:实验室地面、台面及仪器等
3.负责人:王宇飞
4.程序:
4.1实验台面和地面清洁 4.1.1每次实验开始、结束后做好清洁工作并记录，各区的清洁工具不得混用。
4.1.2实验开始时用清水擦拭;实验结束后，实验台面选用10,84消毒液擦拭，然后
用75,的酒精清洁，实验室地面用10,84消毒液清洁。清洁完成后，用紫外灯照射消毒30,60分钟，同时可移动紫外灯照射实验台面45分钟。
4.1.3实验操作过程中出现血液不慎泄漏至实验台面，应立即停止实验，用10%的84
消毒液浸住污染区域，再用滤纸片覆盖30分钟左右，然后用75,酒精反复清洗，再用清水擦拭;必要时紫外灯照射30,60分钟后方能开始实验。
4.2高速离心机清洁
4.2.1每次实验完毕后，先用10,84消毒液擦拭，然后用75,的酒精清洁，擦洗离
心机内壁，待干后盖上机盖。每周二用75,的酒精清洁离心机转头。
4.2.2如果离心时发现离心管破裂，必须先停止实验，将破裂管密封放入生物垃圾桶，
用10%84消毒液擦拭消毒、再用75,酒精进行擦拭消毒，如必要需用移动紫外灯照射30,60分钟后才能开始实验。
4.3生物安全柜和洁净工作台清洁
4.3.1每次使用后用10%84消毒液擦拭，再用75,酒精擦拭工作台面。
4.3.2每周二清洁生物安全柜和洁净工作台的周围环境，去除尘埃，75,酒精棉球擦
拭紫外灯。
4.3.3如果操作过程中出现液体不慎泄漏，立即用 10%84消毒液擦拭，再用75%的酒精反
复清洗，再用洁净的湿布擦洗。
4.4加样器清洁
4.4.1每次实验结束后用75,的酒精清洁。每周二用10%84消毒液擦拭，再用75,酒
精擦。
4.4.2每3个月对加样器进行彻底清洁，先用10%84消毒液擦拭，再用75,酒精擦洗，
后用清水反复洗涤，去除酒精，晾干，在活塞处加一定量的润滑剂。
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4.4.3当怀疑加样器有可能污染时高压消毒20分钟。各区的加样器归各区专用(有标
识)，清洁和消毒时分别处理。
4.5工作服清洁
4.5.1每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔周洗涤。
4.5.2如在实验过程中疑有污染，立即用10%的84消毒液浸泡消毒。
4.6 BIO-RAD iCycler荧光定量PCR检测仪清洁
由王宇飞负责，具体操作见BIO-RAD iCycler荧光定量PCR检测仪的维护。
所引用图表:
实验室清洁消毒记录本
附表05应急处理记录表
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1.目的: 预防和控制实验室及医院感染
2.范围: 实验室生活废弃物和医用生物污染废弃物
3.负责人: 王宇飞
4.处理程序:
4.1工作人员应明白本程序在预防交叉、实验室污染及切断传播途径中的重要性，并
严格执行。
4.2实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有:生活垃圾袋(白色)及生物污
染垃圾袋(黄色)。使用过的一次性消耗品(如试管、吸头、离心管、等)，先放入10%次84消毒液中浸泡后，再放入黄色垃圾袋内，使用过的手套、鞋套、扩增后的反应管(装入专用塑料袋密封后)放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。
4.3夹取标本的工具，如镊子等，用后均应消毒清洁，金属工具可烧灼灭菌或消毒液
浸泡。
4.4 废弃标本如血，10%的84消毒液浸泡后，交医院集中处理。
4.5 盛标本的容器，对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，加入10%84消毒液浸泡，
由专人洗涤沥干后备用。
4.6废弃标本及其容器装入黄色垃圾袋内、封闭，由医院废物处理中心处理。
4.7日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾处理。
所引用图表:
附表22垃圾处理记录表
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1.目的:预防实验室人员在工作过程中被感染及对实验的污染
2.负责人:王宇飞
3.程序:
3.1 工作人员在实验过程中应严格遵守相应的操作规程。
3.2 所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程
中，标本容器应完好无泄漏。
3.3 实验过程中要戴一次性手套，手套要保持完整、不破损。手套一旦疑有污染，应
立即更换。
3.4 做RNA类实验时，实验人员不能使用经反复搓揉的手套或用口吹胀的手套，以免
染上 RNAase，破坏标本的RNA。
3.5 在实验中应注意左右手分开原则:左手用于接触标本，右手用于使用移液器、操
作仪器。严禁用接触过样品的左手触摸任何器材或工作室门把手等。
3.6每天实验后更换废液缸的消毒液，并保证10%的84消毒溶液用量为废液缸内总液
量的五分之一左右。
3.7实验室消毒及时彻底，做好日常清洁工作;遇紧急情况，严格按有关程序操作，
如试剂、标本外溅于面部，应迅速用无菌生理盐水冲洗，实验过程中若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压伤处并用酒精消毒，必要时进行预防补救措施，及时报告科主任。
3.8实验废弃物，如吸头等，是非生物降解材料，不随意丢弃，要装入指定垃圾袋后
封好袋口，交医院废物处理中心处理。
3.9 患者标本均可能具有传染性，应按照有生物传染性物质对待，接触时要小心，若
废弃，交医院废物处理中心处理。
3.10
有下列情况之一者，需另外消毒:手接触有传染性的微生物;水龙头、水池肥
皂、工作服可能同时被大量细菌污染者。消毒剂可用84消毒液。
3.11保证实验室所用的实验消耗品均经过高压灭菌处理，且在消毒有效期内。 17
1.目的:在实验过程中，当出现仪器设备故障和试剂盒的质量问题时，可最大限度的避免因
此造成的临床检测报告不能及时发出等严重后果。
2.适用范围:临床基因扩增检验实验室的仪器设备和试剂等
3.负责人:王宇飞
4.程序:
4.1科室负责人接到仪器设备故障的报警后，立即现场确认异常情况的性质:观察是否为误操
作、偶发现象或确属不能立即排除的故障。
4.2仪器设备故障本室不能解决的，应及时通知有关设备维修人员或供应商，具体程序见仪器
设备管理程序。对于发生故障的仪器设备，及时维修的同时，采取以下处理办法。
4.2.1有满足使用要求的替用设备的，启用替用设备。
4.2.2可借用其他部门仪器设备时，核实该设备的使用状态良好后可借用。
4.2.3替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施
(特别是防污染)的要求。
4.3试剂盒质量发生问题，经核实后，及时通知供货商迅速更换另一批次试剂，使用前需先作
质量检测，合格后方可使用。
4.4仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将
标本送至其它实验室检查(该实验室同样应为获同类认证进行PCR检测的实验室);如已影响到报告的及时发出，应在门诊取报告处向病人公告或向相关病区公告，取得病人的谅解。
4.5影响到检测报告发出的情况，应记录在应急处理记录表中。
所引用图表
附表05.应急处理记录表
18
1.目的:规范实验室化学试剂、实验消耗品的管理
2.适用范围:实验室化学试剂(乙醇、氯仿、异丙醇、84消毒液、诊断试剂盒等)、
实验消耗品(离心管、吸头、一次性手套等)
3.操作人:王宇飞
4.管理程序:
4.1购买或领用:基因诊断试剂在可维持一个月的情况下，由实验人员提出申请，科
主任签字后提交医院统一进购。所购基因诊断试剂盒的生产厂家必须相关证件齐全，试剂规格与扩增仪相匹配。其他化学试剂向医院领取，必须确保质量。消耗品根据库存及时进购以确保实验顺利进行。并填写记录。
4.2 验收:试剂到货后由科主任和实验人员共同验收，实验人员负责试剂质量验收，
科主任(或指定人员)核对试剂的数量和价格。
4.3 质检:按试剂和消耗品质检SOP进行。如发现有质量问题，应及时退货或做相应
处理。并填写记录。
4.4 贮存:所有化学试剂、消耗品贮存于试剂配制区，实验室常用化学试剂均置于避
光、阴凉、干燥处。诊断试剂保存条件按说明书规定进行。常用消耗品根据实验需要放置不易被污染，水、电、火安全的位置。
4.5使用:临床基因扩增实验室常用化学试剂均无毒性或仅有低腐蚀性，故使用时主
要应注意分类保存、关注失效日期，做好使用后的记录和清洁等。
4.6 化学试剂和消耗品由专人负责管理，未经主任许可不能随意带出实验室。
所引用图表:
附表15试剂进购记录表
附表16试剂质检记录表
附表
18消耗品进购记录表
附表19消耗品质检记录表
19
1.目的:确保实验室仪器设备得到妥善的管理
2.适用范围:基因扩增检验实验室所有的仪器设备
3.负责人:王宇飞
4.iCycler荧光定量PCR检测仪处于稳定的工作状态，在该电脑上
不得使用非本室的外来软盘，不能在电脑里加载其它程序和软件
4.6实验室进购仪器时，需由科主任写出申请交设备科，经考查批准后，由医院统一
进购。
20
所引用图表:
附表03实验室仪器设备一览表 附表13仪器维护记录表 附表14仪器故障处理表
21
1.目的:保证实验结果的准确性和可靠性
2.范围:室内质量控制及室间质量评估
3.负责人:王宇飞
4.工作程序:
4.1室内质量控制:
4.1.1室内质控标本自备或来源于内蒙古自治区临检中心，具体见室内质量控制标准
操作程序(CG-JY-Sop-23)。
4.1.2标本的采集和处理:按各项目SOP进行。
4.1.3 标本处理:临床标本的制备严格按所购试剂中的说明书进行操作。
4.1.4 室内质控标本的处理必须同临床标本同时处理。
4.1.5 实验结果合格，即发报告。实验结果不合格，报告室主任，会同有关人员，查
找原因，妥善解决。
4.1.6记录每次检测质控结果，绘制质控图，若失控查找原因并及时提出纠正方案。
4.2室间质量评估:
4.2.1室间质量评估是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠性，以及各实验室
间结果的可比性的重要手段，定期参加室间质量评估。
4.2.2室间质量评估标本来源:卫生部或内蒙古自治区临检中心。
4.2.3质评标本的接收和验收:收到质控血清后由相关人员登记、签字，根据质控标
本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20?保存于标本制备区。
4.2.4质控标本的检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先根据说明对质控物进
行复溶。
4.2.5室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员测试，工作
人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。
4.2.6实验室检测质控标本的次数必须与常规检测临床标本的次数一样(1次)。
4.2.7质控标本的检测在卫生部或自治区临检中心规定的时间内进行，检测结果的上
报也必须在截止日期前，通过E-mail或挂号信寄出。
4.2.8严禁与其它实验室交流室间质评的检测结果。
22
4.2.9根据反馈结果分析室间质评的状态，如失控应查找原因，并采取相应措施。
所引用图表:
附图2室内质控图
附表20.室间质控记录表
23
1.目的:规范标本采集、运送、贮存、废弃的管理，确保检验结果准确性
2.范围:临床各类标本(包括采集、处理、保存)
3.操作人:王宇飞
4.工作程序:
4.1实验室所有临床标本必须有唯一性编号，标本的唯一性编号须字迹清晰明了，不得随意涂改。为了方便做实验,标本在有唯一编号同时也编有检验序号。
4.2 所有标本均应视为有传染性，须严格遵守医院有关院内感染及医用垃圾的管理和
处理规定，工作人员须注意保持并随时检查容器的完整和无标本外泄发生。
4.3 标本的采集、运送、保存见相应的SOP文件。
4.4 接收标本时应核对标本与检验申请单的一致性。工作人员有权拒收与检验申请单
不一致的标本、标识不清的标本。检验申请有不清晰情况时，应即时与临床科室或相关人员联系核实。
4.5标本接收人须检查标本状态:标本不合要求(使用不适当的容器、容器有破损、
标本外泄污染、标本溶血、标本量不足1ml等)，工作人员有权拒收标本，应记录其状态并通知临床重新送检。
4.6 检测前标本处理时，工作人员须仔细核对标本与标本资料记录的一致性，准确无
误时，方可进行处理。
4.7标本的废弃处理见“废弃物的处理程序”。
24
1.目的:确保检测报告的准确、清晰、管理受控 2.适用范围:基因扩增检验实验室所有临床检测项目的结果报告
3.负责人:王宇飞
4.工作程序:
4.1 检测结果的报告应准确、清晰、明确、客观和及时。
4.2只有经PCR培训并获得上岗证的工作人员才有权审核和签发报告单。
4.3结果打印报告，其数据要经分析，避免因非特异性荧光而造成假阳性结果。根据
质控品判断实验的有效性。
4.4报告内容至少应包括:病人姓名、性别、年龄、及测定项目、结果、参考范围以
及标题、样本号、标本类型、标本接收日期和检测日期、实验操作者和审核者的签名等。
4.5报告单应及时发出。门诊病人报告单送至本科室服务台报告发放处，病区报告单
由专人送至各病区，并签收。
4.6 当临床科室要求电话报告结果时，应先确认对方身份，核对其所查询的病人姓名、
病区床号等情况，方可报告，并明确告知对方，实验的最终结果以检测报告单为准。
4.7 当患者要求电话报告结果时，核对病人姓名、检测项目等，方可报告，并明确告
知对方，实验的最终结果以检测报告单为准;当需邮寄报告时，应由患者填写地址及邮政编码等，并作记录。本实验室暂不提供其它的报告方式。
4.8 实验室工作人员应为患者的检测结果严格保密，不得提供给非相关人员(查询或
复印)。
所引用图表:
基因检测报告单格式见附录
25
1.目的:以病人为“中心”，以质量为“核心”，优质服务。“抱怨”基于对临床和病
人(包括家属等)反馈意见的重视，从中发现实验室存在的问题或漏洞
2.处理范围:患者或家属、临床医护人员及本科室工作人员对本实验室的服务质量、
检测结果及实验室管理等问题的投诉或抱怨
3.负责人:王宇飞 4.工作流程:
4.1 抱怨的接受:实验室所有工作人员均有责任接待抱怨者，在接受抱怨时应热情、友好、礼貌、严肃和认真，应记录抱怨者姓名、地址、联系方式、抱怨内容。 4.2 抱怨的处理:
4.2.1工作人员能及时处理的抱怨应给予及时解决，记录处理结果。
4.2.2 不能及时处理的报怨应限时处理，并与抱怨者约定反馈时间，将抱怨情况向实验室主任汇报，寻求妥善的处理方法，尽快答复抱怨者。
4.2.3 抱怨的处理以抱怨者的满意为目的，但必须以尊重科学，尊重事实为原则，在不违背科学原则，医疗行为规范的基础上，争取抱怨者最大程度的理解。 4.3 抱怨处理的善后:
4.3.1 对抱怨中反映出的影响到试验质量及质量体系有效性的问题，室验室主任应会同相关人员及时分析存在的问题，提出有效的纠正措施，并由试验室主任负责组织执行。
4.3.2 如抱怨涉及到实验室操作程序是否符合《临床基因扩增实验室管理暂行办法》、《临床基因扩增实验室工作规范》等，实验室负责人应召集实验室工作人员讨论，如实验室的操作程序确实不符合有关规定，应重新修订操作规程，科主任批准后执行。
所引用图表: 26
1.目的:确保检验资料的记录、保存状态在控
2.适用范围:实验过程中产生的数据、文本资料的记录
3.负责人:王宇飞
4.工作程序:
4.1 书面记录文件的管理: 4.1.1 本实验室的书面记录包括附表中的各种记录表(图)及各工作区的记录本。
4.1.2 填写书面记录，需使用钢笔或圆珠笔，字迹清晰，如有涂改，在涂改处应有涂
改人签名，不得在记录表上进行无关书写，保持记录表清洁、完整。不同实验区 记录表严格专用。
4.1.3 各种记录表要纳入档案管理，写完后及时放入档案柜，每年分类装订成册,并依
照要求进行编号,如2009年的实验结果记录册、试剂进购记录册分别编为2009SYJG、2009SJJG，放于档案柜内以便查询。标本原始检验申请单最后保存于科里统一的检验单存
放处，其它实验记录保存于各自实验区内，均保存2年。
4.1.4 定期对保存的记录进行分析总结，形成总结报告，以便改进工作。
4.1.5 在没有实验室负责人同意的情况下，不得随意将记录借出。在记录借出时需有
实验室负责人、经手人、借阅人的签名方可。
4.2 电脑上记录文件的管理
4.2.1记录文件必须保存在非系统分区中，如D盘，保存路径要清晰、便捷、易查找。
4.2.2实验文件保存时以当天日期命名，若某天进行了多次实验，命名时在后面以-1、
-2、-3等字符标识，如2009年7月1日做的两次实验，分别保存为2009-07-01-1和2009-07-01-2。
4.2.3为了防止储存实验结果的电脑发生系统崩溃、硬件故障等问题导致实验结果丢
失、无法查询等情况，每个月的实验结果记录文件都要用移动存储设备(如软盘、USB硬盘等)拷贝到另一部PC机上做备份;
一年的数据要用刻录机刻制一张CD光27
1.目的:保证实验室化学试剂正确配制
2.适用范围:实验室常用化学试剂(酒精、84消毒液、氢氧化钠)
3.负责人:王宇飞
4.操作程序:
4.1 75,酒精的配制
4.1.1 常规消毒的75%酒精和95%酒精由医院药剂科提供。
4.1.2 用于RNA提取的75,的酒精的配制:根据当天的标本数量，用本科室提供去离
子水(已高压灭菌)，分析纯的无水酒精按1:4比例配制，然后放入-20?冷柜中预冷后待用。
4.2 10,的84消毒液配制
量取84消毒原液100ml，再加入900ml水，混匀备用。
4.3. 4,的氢氧化钠配制。
取无水氢氧化钠4g，加入100ml蒸馏水充分溶化后装入试剂瓶中备用。
注:每份配制好的溶液保质期为14天。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
28
1.目的:保证每批用于临床实验的试剂的质量良好
2.适用范围:临床基因扩增试剂(HBV、HCV、NG、CT、TB)
3.负责人:王宇飞
4. 操作程序:
4.1在结余试剂可维持一月使用的情况下，实验人员按需提出所购试剂的项目名称、数量，交科主任审核，报相关部门订货及购买。
4.2 收到试剂后，检查试剂外包装是否完好，目测试剂是否处在冻存状态。
4.3 核对试剂品种和数量，检查试剂批号。及时将试剂转入,20?冰箱保存，认真填
写试剂进购表。
4.4 进行试剂校验实验:
4.4.1 校验实验要求设置:空白对照、阴性对照、阳性对照各一，阳性标准品梯度(104、
105、106、107)室内质控品。
4.4.2 实验结果若:空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照及室内质控品正常检出，
曲线光滑呈“S”型，CT值均在相应的范围内，阳性标准品导出的标准曲线的拟和度(R值)的绝对值应大于等于0.980，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。
4.5 有下情况之一的，不能用于临床检测:
4.5.1目测不合格。
4.5.2校验实验结果，空白对照出现扩增，如扩增曲线CT值大于27，需重复实验确
证试剂污染。
4.5.3阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品扩增效率大
幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。
4.5.4阳性对照及室内质控品未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存
在问题。重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液是否失效。更换提取液后该批试剂方可使用。
4.5.5空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，则提取液存在污
染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。
4.5.6 阳性对照及室内质控品扩增，阳性标准品未扩增或扩增曲线CT值系统性偏大5
个循环以上。提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可使用。
29
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附表15试剂进购记录表
附表16试剂质检记录表
30
1.目的:保证实验消耗品的质量、合理配用及存放
2.范围: 1.5ml离心管、0.5ml离心管、带滤芯的吸头
3.操作人:王宇飞
4. 操作程序:
4.1实验人员按需提出所购耗材的品名、规格、数量，交科主任审核，报医院采购科
订货及购买。
4.2 消耗品进购后经质检合格方可入库，填写消耗品进购、质检记录表。
4.3无菌处理前的消耗品贮存于试剂贮存、准备区，定期领取消毒，消毒过的消耗品
送标本制备区备用。
4.4消耗品在使用过程中发现质量问题(如畸形、离心管密闭性不好等)，立即通知科
主任，科主任报相关部门，办理退、换货手续。
5.质检:
5.1 0.5ml、 1.5ml离心管
5.1.1目测:检查离心管有无畸形、破损、不能闭盖的情况。
5.1.2 实验检测:
(1)目测合格后，随机抽取50个离心管用于实验检测。
(2)离心管插在100?干浴锅中20分钟后取出，如发现有爆开情况发生，即认为该
批离心管不符合本实验室实验要求。
(3)再将这50个离心管加半量生理盐水后，10000rpm离心20分钟，如发现有管盖
爆开或漏液情况，即认为该批离心管不符合本实验室实验要求作退货处理。
(4)经上述检测合格后，即可启用该批耗材。
5.2 检测带滤芯的吸头
5.2.1 目测:检查吸头有无畸形、破损，是否带有滤芯。
5.2.2 实验检测:
(1)目测合格后，随机抽取50个吸头用于实验检测。用适配加样器配合吸取适量液
体，检查有无吸孔堵塞、漏气现象发生，在排除移液器因素后，如有异常发现，即认为该批吸头不符合本实验室实验要求，作退货处理。
(2)用10个滤芯吸头做平行对照实验，是否与预期结果一致。
(3)经上述检测未发现不合格情况后，即启用该批耗材。
31
6. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附表18消耗品进购记录表
附表19消耗品质检记录表
32
1.目的:正确使用移液器，确保移液的精确性
2.负责人:王宇飞
3. 操作程序:
3.1实验人员必须熟悉操作程序，严格按照仪器操作程序操作。
3.2旋转移液器按钮设定移液量，设定的移液量不可超出该移液器规定的范围。使用
配套的吸头。
3.3 前进移液法:适合加样本时采用
3.3.1 将按钮压至第一停点位置;
3.3.2垂直握持移液器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定，然后慢慢松开按
钮吸入液体。待移液器吸满液体后，将管嘴撤出液面，贴壁停留2,3秒，使管尖外侧的液滴滑落。
3.3.3放液时，将吸嘴贴到容器内壁并保持10?,40?倾斜，轻轻按下按钮至第一停点
位置，放出液体。约1,2秒后，继续将按钮向下压至第二停点位置以排出剩余液体，待吸嘴放干净液体后，停留1,2秒，撤出吸嘴。
3.3.4松开按钮使之回到起始位点，按吸嘴弹射器除去吸嘴。更换吸嘴进行下一步操
作。
3.4 倒退移液法:适用于高粘度液体或易起泡沫的液体，极小量液体也可采用
3.4.1 将按钮向下压至第二停点位置。
3.4.2垂直握持移液器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定，然后慢慢松开按
钮吸入液体。待移液器吸满液体后，将管嘴撤出液面，贴壁停留2,3秒，使管尖外侧的液滴滑落。
3.4.3放液时，将吸嘴贴到容器内壁并保持10?,40?倾斜，轻轻按下按钮至第一停点
位置，放出液体。
3.4.4遗留在管嘴尖的液体随管嘴一起扔掉，或按至第二停点放回原来的容器中。
3.5重复操作法:可以快速、简便地重复转移同体积的同种液体。
3.5.1将按钮向下压至第二停点位置。
3.5.2垂直握持移液器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定，然后慢慢松开按
钮吸入液体。待移液器吸满液体后，将管嘴撤出液面，贴壁停留2,3秒，使管尖外侧的液滴滑落。
33
3.5.3放液时，将吸嘴贴到容器内壁并保持10?,40?倾斜，轻轻按下按钮至第一停
点位置，放出液体。待放完所需体积液体后，把按钮仍停在第一停点位置停留约1,2秒使管尖外液滴淌下。按钮保持原位取下一次液体。
3.6预洗步骤:
当取液体积大于10ul时，为了保证吸液的精密度和准确性，装上一个新吸嘴(或改变吸取的容量值)时应预洗吸嘴，即先吸入一次液样并将之排回原容器中，反复2,3次;而当取液体积小于10ul时，只有在没有预洗，同时要将吸取的液体在要转入的液体中反复吸打几次，排空液体，再将吸嘴提出并贴壁停留2,3秒，才能保证取液的精密度和准确性。
4.维护程序:
4.1 在调整取液量的旋钮时，不可用力过猛，并应注意计数器显示的数字不要超过其
可调范围。
4.2. 吸取液体时应缓慢均匀吸取，防止液体进入加样器套筒内，必须注意压放按钮
时保持平稳，加样器不得倒转，吸头中有液体时不可将加样器平放。
4.3移液器在使用完毕后应放置于移液器支架上，远离潮湿及腐蚀性物质。
4.4移液器的清洁见实验室清洁程序之移液器的清洁。
4.5每年二次检查该支移液器的柱塞和圆柱，具体操作方法见可调式移液器使用说明
书。
4.6 维护保养应有及时的实施记录，实验室主任对记录应及时检查，核实。
4.7移液器每年由市质量技术监督局进行校验。如不合格则更换新的移液器。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附表13.仪器维护记录表
34
1.目的:保证离心机正常使用
2.负责人:王宇飞 3.操作程序:
3.1 TGL-16B台式高速离心机的使用方法:
3.1.1接通电源，打开高速离心机电源开关，打开机盖，检查机腔有无异物，平衡放入离心管，关上机盖。
3.1.2按功能键结合?”或“?”键调整仪器的运行参数(时间和转速)，调至需要的
值后按记忆键确认储存。
3.1.3按开启键启动仪器，数码屏幕显示设定好的参数。仪器到达设定好的时间自动
停止运转，或按停止键停止离心。
3.1.4待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品，关闭机盖结束离心。
3.2 5417R型台式高速冷冻离心机的使用方法:
3.2.1接通电源，按功能键结合?”或“?”键预先设置好离心所需的温度、转速和
时间。
3.2.2按OPEN键打开机盖，取下转头盖装上已平衡的试样，再依次盖好转头盖和机盖，
确认锁住盖锁。
3.2.3按STAR键启动仪器，液晶屏显示设定好的参数并倒计时。仪器到达设定好的时
间自动停止运转并报警，或按STOP键停止离心。
3.2.4待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品，待机腔内晾干后关闭机盖
结束离心。
4.维护程序:
4.1 离心机应处于水平位置，与外接电源电压匹配，有良好的接地线。
4.2 开机前应检查机腔有无异物;样品应预先平衡，使用离心机微量离心时离心套管
与样品应同时平衡。
4.3挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免侵蚀
机腔或造成事故;使用离心机时遵守左右手分开原则，只以右手操作仪器。
4.4离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。
4.5离心机清洁:一般清洁见实验室清洁程序之高速离心机清洁;离心室及转子的清
洁(每月进行一次):应先拨掉电源线，打开离心机盖，用专用设备将离心机转子
35
旋下，再用中性去污剂(70%的异丙醇/水混合物或乙醇去污染)清洁离心室;离心室
RCF=0.011238095×R×N
N表示转速，单位为转/分(r/min);R表示离心半径，即离心管底端至轴心的距离，单位为厘米(cm);RCF表示相对离心力，单位用重力加速度g(g,9.8m/ s);
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附表13.仪器维护记录表
附表06.离心机使用记录表
36
1.目的:对冰箱进行适当的维护，以确保冰箱的正常使用。
2.适用范围:本实验室使用的BC/BD-146B海尔冷柜和BCD-201美凌冰箱。
3.负责人:王宇飞
4.操作及维护程序:
4.1 冰箱应放置于水平地面并留有一定的散热空间;外接电源电压必须匹配，并要求
有良好的接地线。
4.2冰箱内禁止存放与本实验室无关的物品。
4.3保持冰箱出水口通畅;非自动除霜冰箱应定期除霜;定期清洁冰箱，清洁时切断
电源，用软布蘸水擦拭冰箱内外，必要时可用中性洗涤剂。
4.4每日观察冰箱内温度并记录于表中，一年装订成册存档。若温度超出规定范围，
调节温控使其回到正常范围。
4.5若温控调节无效，报请设备科维修，修理后须验收合格并签字后方能正常使用。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附图3.冰箱温度记录表
附表13.
仪器维护记录表
37
1. 目的:对生物安全柜正确使用、进行适当维护，以保证净化能力。
2. 范围:本实验室使用的 HF-Safe 1200型生物安全柜
3. 负责人:王宇飞
4. 操作程序:
4.1接通电源，开机预热20分钟后开始使用。
4.2按键选择开启玻璃门，保持前窗不高于200mm的操作高度，当报警时及时复位。
开启排风?开启照明?开始工作。
4.3每次操作结束,清洁台面?关闭照明?关闭排风?关闭玻璃门?开启灭菌30分钟
后?退出操作系统?关闭电源。
5.维护程序:
5.1每周二清洁生物安全柜的周围环境，去除尘埃;用10,84消毒液擦拭工作台面，再用
75,酒精擦拭，用75,酒精棉球擦拭紫外灯;
5.2每次使用生物安全柜后，均需对生物安全柜进行清洁，用10,84消毒液擦拭工作台面，
再用75,酒精擦拭。
5.3使用过程中，勿将软质、细微的物品放于进风格栅附近。
5.4每年请仪器厂家维护人员进行调试和维护。
5.5做好维护记录
6. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则
公布实行。
所引用图表:
附表
13.仪器维护记录表
附表17-1.生物安全柜使用记录表
38
1. 目的:对洁净工作台正确使用、进行适当维护，以保证净化能力。
2.范围:本实验室使用的JJT-1300型洁净工作台
3.负责人:王宇飞
4.操作程序:
4.1 新安装或长期未使用的工作台，使用前必须用超净真空吸尘器或不产生纤维的物品认
真进行清洁工作。
4.2 接通电源，使用前应提前15,30分钟同时开启紫外灯和风机组工作。
4.3 当需要调节风机风速时，用工作台操作面板上的风速调节钮进行调节。电源、风机、
紫外灯消毒均由指示灯指示其工作状态，工作时，发光。
4.4 工作台面上禁止存放不必要的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。
4.5 禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免做明显扰动气流的动作;禁止在预过
滤进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。
4.6 使用结束后，用消毒液清理工作台面后打开紫外灯，30分钟后关闭紫外灯，关闭洁
净台电源。
4.7 长期不使用的工作台请拨下电源插头。
5.维护程序:
5.1每周二清洁净化工作台的周围环境，去除尘埃;用10,84消毒液擦拭工作台面，再用
75,酒精擦拭，用75,酒精棉球擦拭紫外灯;
5.2 每次使用后用10,84消毒液擦拭工作台面，再用75,酒精擦拭。
5.3 如果操作过程中出现液体不慎泄漏，立即用软布蘸10,84消毒液反复清洗，然后再
用75%酒精擦拭;
5.4每年请仪器厂家维护人员进行调试和维护。
5.5 做好维护记录。
6. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则
公布实行。
39
所引用图表:
附表13.仪器维护记录表
附表17-2.洁净工作台使用记录表
40
1. 目的:确保该仪器的正确使用及正常运作
2.范围:本实验室使用的K30B型干式恒温器
3.负责人:王宇飞
4.操作程序:
4.1接通电源，打开干式恒温器电源开关，仪器进入初始化，
4.2“嘀”声后，按“R/S”键运行上一次设置好的程序;当温度恒定后，恒温倒计时开
始，计时结束，运行停止，蜂鸣器鸣叫报警。
4.3设置温度:
4.3.1按“TEMP”键迅速放开，显示上次运行的温度设置值，同时小数位闪烁，按“?”
或“?”键，更改光标位数值至所需数值。
4.3.2接着按“TEMP”一次，闪烁位移至百位，再按一次，闪烁位移至十位，按“?”
或“?”键，更改光标位数值至所需数值。
4.3.3接着再按“TEMP”一次，闪烁位移至个位，按“?”或“?”键，更改光标位
数值至所需数值。
4.3.4设置完成后，约8秒后，系统自动确认为新的温度设置值。
4.4设置时间:
4.4.1按“TIME”键迅速放开，显示上次运行的时间设置值，同时最右位闪烁，按“?”
或“?”键，更改光标位数值至所需数值。
4.4.2接着按“TIME”一次，闪烁位移至最左位，再按一次，闪烁位移至次左位，按
“?”或“?”键，更改光标位数值至所需数值。
4.4.3接着再按“TIME”一次，闪烁位再右移一位，按“?”或“?”键，更改光标
位数值至所需数值。
4.4.4设置完成后，约8秒后，系统自动确认为新的时间设置值。
5.维护程序:
本仪器应定期用棉签沾无水乙醇清洗模块上的锥孔，以保证试管与锥孔壁接触充分，导热良好，仪器表面如有污迹，可用软布浸水绞干后清洗。仪器表面严禁用腐蚀性清洗剂清洗。
6.温度误差校准:干式恒温器需由厂家专业工程师进行校准，每年一次。
41
7. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附表13.仪器维护记录表
附表04.干式恒温器使用记录表
42
1.目的:保证水浴箱工作温度恒定。
2.范围: 本实验室使用的HH-W型电热恒温水浴箱
3. 负责人:王宇飞
4.操作程序:
4.1水浴箱应置于坚固的水平台上，电源电压须匹配。
4.2在水浴箱内注入去离子水至总高度1/2,1/3处。
4.3打开电源开关，控温仪面板即有数字显示表示电源接通。
4.4调节温度控制器的按钮选择所需工作温度。
4.5此时数字显示的温度为水槽内温度，加热指示灯亮，仪器进入自动升温状态。
4.6当水槽内温度达到设定温度时，加热中断、指示灯熄灭，再通电90分钟后，温度可保持稳
定。
4.7在每次水浴箱使用前，放入标准温度计同时监测实际水温，以校正温度。水浴箱工作温度
波动范围应控制在设定温度?1?以内。
4.8记录每天温度;如温度超出正常范围，该温度应划上圈，并把修正操作记录下来。
4.9水浴箱内外应保持清洁，外壳忌用腐蚀性溶液擦拭。
4.10仪器不用时，需套好塑料薄膜防尘罩。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布
实行。
所引用图表:
附表13.仪器维护记录表
附表21.实验室温度、湿度、水浴箱温度记录表
43
1.目的:保证待处理样品的完全混匀。
2.范围:各种类型的旋涡振荡器。
3.负责人:王宇飞
4.操作程序:
4.1旋涡振荡器应置于坚固的水平台上。
4.2检查电源电压是否匹配后，接通电源。
4.3将样品管垂直或略为倾斜地放置在振荡盘上，开机振荡数秒或数分钟直至样品完全混
匀后，
关机。
4.4切忌将样品管平躺或倒转振荡，以免管内液体渗出。
4.5 保持振荡器清洁、干燥。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布
实行。
44
1.目的:确保该仪器正确使用及正常运作
2.负责人:王宇飞
3.操作程序:
3.1接通电源，打开iCycler扩增仪、蓄电池及电脑的开关。
3.2扩增仪预热至少30min。
3.3从开始菜单中选择Icycler，进入循环编辑。
3.4如使用已编辑好的循环条件，点Protocol Library，点View Protocol，双击目录中的Icycler选择您的循环名称。如新编程序则点Edit，编辑、命名后保存。
3.5点View plate Setup选择您的反应管板面设置。如重新编辑则点Edit。荧光性Flurorescence选择Fam系统，命名后保存。
3.6 在View Plate Setup窗口下点Run，在Run Prep 窗口下检查循环条件及反 应管板面设置文件名后，输入反应体系，点Begin Run循环开始。
3.7循环状态时可在Run Time central中查看运行状况。
3.8循环结后，点PCR View/Save Date，在Data Run File栏中输入结果文件名后点save键保存。
3.9返回PCR Quantification窗口，在Base Line栏中选择PCR Base Line Subtraction;在Threshold cycle calculation栏中选择2到15个循环， 20倍方差，点Recalculate键重新分析。
3.10如果为定量PCR，在文件分析模式下点PCR Standard Curve显示标准曲线及标准品拟合度。
3.11返回PCR View/Save Date窗口，在Viewing栏中选Threshold cycle可显示CT值，选Calculated Concentration可显示标本拷贝数，选Standard Quantities可显示标准品拷贝数。
3.12使用完毕后关闭电源。
4.维护程序:
4.1控制iCycler的电脑必须专用，电脑的控制程，信息收集、计算软件不得改变设置
45
或删除;不能确定无病毒的软件不得上机运行。
4.2电脑中保存的检测结果占用较大iCycler荧光定量PCR检测仪的使用记录表
附表13.仪器维护记录表
46
1.目的:保证UPS的安全使用
2.范围:本实验室使用的C2K-2KVA型UPS。
3.负责人:王宇飞
4.操作程序:
4.1 接市电UPS开机
4.1.1 确定电源配接正确后，先将后盖板的旁路断路器扳至ON，此时风扇会转，UPS经由旁路
对负载供电，此时UPS工作于旁路模式下。
4.1.2 持续按开机键0.5秒以上进行开机，即开启逆变器。
4.1.3 开机时UPS先进行自检，此时面板上负载指示灯会亮，并逐一熄灭，几秒钟后逆变指示
灯亮，旁路指示灯熄灭。到此，UPS已处于逆变模式一运行。
4.2 未接市电UPS直流开机
4.2.1 无市电输入，按开机键0.5秒以上启动UPS。
4.2.2 启动过程中UPS的动作与接市电时相同，只是市电指示灯不亮，电池指示灯亮。
4.3 有市电时UPS关机
4.3.1 持续按关机键0.5秒以上，进行关机，即关闭逆变器。
4.3.2 关机时UPS进行自检，此进负载指示灯会全亮，并逐一熄灭，逆变指示灯熄灭，旁路指
示灯会亮，此时UPS工作于旁路模式下。
4.3.3 以上执行完关机后，UPS仍有输出，若要使UPS不输出，只要将市电断开即可。此时UPS
会先进行自检，负载指示灯会全亮并逐一熄灭，最后面板无显示，UPS无输出电压。
4.4无市电时UPS 直流关机
4.4.1 持续按关机键0.5秒以上，进行关机。
4.4.2 关机时，UPS会先进行自检，此时负载指示灯全亮并逐一熄灭，最后面板无显示，UPS
无输出电压。
47
1.目的:保证紫外灯的灭菌效果。
2.范围:本实验室使用的可移动紫外灯
3.负责人:王宇飞
4.操作和维护程序:
接通电源即可使用可移动紫外灯;每星期清洁紫外灯架的外表，去除尘埃;用75,酒精棉球擦拭紫外灯(清洁时应断开电源)。记录紫外灯的使用情况，定期请医院预防保健科的人员进行紫外灯灭菌效果的监测，如不合格则更换新的紫外灯管。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布
实行。
48
1.目的: 保证实验时温度的准确
2.范围: 基因扩增实验室所有温控的仪器
3.操作:王宇飞
4.程序
4.1温度计校准程序:
4.1.1 由设备科送市质量技术监督局对温度计进行校准，每年进行1次。
4.1.2经校准过的温度计可作为干式恒温器温度校温的参照。
4.2 扩增仪温度的校准:
4.2.1由于仪器较精密，需请厂家前来校准并调试。
4.2.2经调试后贴上绿色标签，标明仪器的性能状态。
4.3 冰箱温度的校准:(4?冰箱和-20?冰箱)
4.3.1 每次实验前都需对冰箱温度进行记录，绘置冰箱温度的质控图。
4.3.2 取一只已经技术监督局校准后的温度计对冰箱温度进行实际测量，并计下读数。
4.3.3 反复多次测量，如超出规定范围，将冰箱调至所需温度。
4.4 干式恒温器温度的校准
4.4.1 将干式恒温器打开并设至一温度。
4.4.2待干式恒温器的温度长至所设温度时，用一只已经技术监督局校准过的温度计
插入孔内进行测量温度并记录。
4.4.3 在不同孔内进行重复测量，取均值，并与干式恒温器的显示温度进行比较。
4.4.4 由于仪器较精密，温度相差太大则需请厂家前来校准并调试。
4.4.5 经调试后贴上绿色标签，标明时间仪器的性能状态。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
49
1.目的:保证所接收的标本符合实验要求,保证标本的保存质量。
2.负责人:王宇飞
3.标本的采集 (标本由医护人员采集)
血液标本:HBV标本采用血清。病区标本由护士采集，门诊标本由门诊抽血处专人采集，血清取静脉血2ml于真空无菌采集管中，2小时内送检。
HCV标本采用血清。病区标本由护士采集，门诊标本由门诊抽血处专人采集，血清取静脉血2ml于真空无菌采集管中，1小时内送检。
痰标本: 用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。对于无痰或少痰的患者，可用45?加温的100g/L NaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出;对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。
分泌物标本:尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子(灭菌，一次性)采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，要求病人在采样有2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2,3cm，转动一周以获得上皮细胞。将取样后的棉拭子管加1ml无菌生理盐水。
尿液:由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。
脑脊液和胸腹水:由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。
注:定期对临床医护人员进行有关标本采集、保存、运输等知识的培训。
4.标本验收程序:
4.1认真查对姓名，联号，住院号，病区床号，项目及标本性状等。对不符合要求者
记入拒收标本记录表中，并及时通知采样科室，正确及时地补采样，以免延误病人的检测报告。对书写不清楚的化验单，要及时与医护人员联系(可电话)，明确受检者有关资料。
4.2对符合检测要求的标本及时进行唯一性编号详见标本唯一性编号标准操作程序
(CG-JY-Sop-17)，并记入可接收标本记录表中。
5 .标本的保存:
HBV:血样标本4?下短期保存，或分离出血清，-20?下保存。
HCV:在1小时内分离血清， -20?下保存。
TB:痰、尿、胸腹水、脑脊液标本置4?下短期保存。胸腹水、脑脊液和处理后的痰、
50
尿-20?下保存。
NG、CT、:分泌物标本置4?下短期保存，处理后标本置,20?下保存。
注:所有标本在报告发出后保存一周，由专人负责。提取的核酸标本当天检测可 4?
保存，如当天不检测应置-20?保存，报告发出后丢弃。
特殊标本处理:
对暂不检测的项目或规定时间外收到的标本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。对特殊标本或特殊病人的标本，实行“首接”负责制。所谓特殊标本是指难于采集的标本，以及特殊病人的标本。 “首接”负责制是指无论那位工作人员，一旦收到标本，均须负其责任，及时和正确保管，转送标本到有关实验室或有关人员，同时作交班记录和双签名，不得以任何借口推托。对于做长期病情动态考察的病人标本一律置-20?下长期保存，使用时再按需取出检测。
6. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布实行。
所引用图表:
附表07.可接收标本记录表
附表08.拒收标本记录表
附表09.标本保存记录表
51
1.目的:规范待检标本的唯一识别标记的编码规则，保证在任何时候对标本的识别
不发生混淆。
2.适用范围: 基因扩增实验室所开展的检测项目:乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎
病毒(HCV)、结核杆菌(TB)、淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)
3.操作人:王宇飞
4.操作程序:
4.1 标本的唯一性标识须字迹清晰明了，不得随意作任何涂改;若需更改，操作人员
在更改处必需签名。
4.2 用标记笔在每张化验单和对应的样品管上作好相同的标记。填写可接收标本记录表。
4.3标本的唯一性标识:标识由三部分构成:待检日期、检测项目、该检测批次的标本序
号，三部分间无间隔符号，例如:060701B01，序号为01-999，整个标识为9-10位。
4.4 按检测类型分类标记:根据检测项目的不同，每种检测项目对应标记一种唯一的
代号。如乙型肝炎病毒标记为“B”、丙型肝炎病毒标记为“C”、结核杆菌 “T”、性病(淋球菌、沙眼衣原体)统一标记为“X”。
4.5 按化验单接收顺序编号:如2009年7月1日第一个接收的乙型肝炎病毒标本化
验单编号为:060701B01。
4.6特殊标本的编号:在原编号的基础上增加文字“特”区别。
5. SOP的变动程序:
本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人，如通过则公布
实行。
52
1.目的:保证标本检测各环节正确进行及HBV-DNA检测结果的准确、可靠性
2.适用范围:HBV-DNA的TaqMan荧光定量检测，标本类型为血清
3.试剂来源:深圳匹基HBV-DNA荧光定量PCR检测试剂盒
4 .SOP的变动程序:本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负
责人，如通过则公布实行。更换试剂或仪器时必须更改该操作程序。
5.质控物:对照及阳性标准品系列均来源于试剂盒，室2000rpm离心10sec后向n个反应管中分别加入38ul，转移至标本制备区。
6.3标本制备及加样(在标本制备区操作)
6.3.1标本处理:取n个1.5ml的灭菌离心管(n=样本数 +1管室DNA提取液2，振荡10sec(沉淀无需打散)混匀，100?干浴或沸水浴10min，13000rpm 离心10min(注意固定离心方向)，保留上清备用(如已裂解的标本当天不用，请于
53
-20?保存)。
6.3.2加样:若样本及对照品的裂解产物保存在-20?，使用前置室温解冻，13000rpm 离心5min，在各设定的反应管中分别加入处理过的样本、质控、阴性、阳性、临界阳 性对照上清液和标准品各2ul,盖紧PCR反应管管盖，转移至扩增区，记录标本处理况。
6.4 扩增(在扩增区操作)
6.4.1打开扩增仪电源预热30分钟后，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.4.2将循环条件设定为37? 5min,94? 1 min;95? 5sec，60? 30sec，42个循环，
反应体系为40ul。
6.4.3仪器检测通道选择:荧光素设定为Fam;荧光信号收集设在60? 。
6.4.4将反应管排好放入荧光PCR仪内，记录样本摆放顺序。检查反应管是否盖紧，以
免荧光物质泄漏污染仪器。关好扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
6.4.5扩增结束保存数据后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。分析
数据，填写检验记录，关闭计算机。
6.5记录检测结果,签发检测结果报告。
《乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒
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1.目的:保证HCV-RNA检测结果准确、可靠
2.适用范围:HCV-RNA的TaqMan荧光检测，标本类型为血清
3.试剂来源:深圳匹基HCV-RNA荧光定量PCR检测试剂盒
4. SOP的变动程序:本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级
负责人，如通过则公布实行。更换试剂或仪器时必须更改该操作程序。
5.质控物:对照及阳性标准品系列均来源于试剂盒，室Enhancer 0.4ul, RT-PCR酶0.5ul,计算好各试剂的使用量，加入一适当体积的试管中，充分混合均匀。
6.2.3 2000rpm离心10sec后向n个反应管中分别加入35ul，转移至标本制备区。根据标
本量配备适量75%乙醇-20?预冷备用。
6.3 标本制备及加样(在标本制备区操作)
6.3.1 标本处理:试剂盒中的强阳性对照为血清冻干粉，实验时用100ulDEPC水复溶，
混合均匀制成强阳性对照;取10ul强阳性对照加到剩余的DEPC水中，混合均匀 制成临界阳性对照，然后按下述步骤与待测样本一起处理。
1)取n个1.5ml的灭菌离心管(n=样本数 +1管室内质控 + 1管阴性对照 + 1管强阳性对照 + 1管临界阳性对照)，作好标记。
55
2) 首先加入150ul裂解液，然后分别加入待测样本、室内质控 、阴性对照、强阳性对照和临界阳性对照各50ul，吸头反复吸打混匀(一份样本换用一个吸头);再加入50ul氯仿(―20?预冷)，混匀器上振荡混匀5sec(不宜过于强烈，以免产生乳化层，也可用手颠倒混匀)。13000rpm离心15min(如有条件，于4?进行离心)。
3)取与步骤1)中相同数量的1.5ml灭菌离心管，加入100ul异丙醇(―20?预冷)，作好标记。吸取步骤2)各管中的上层液相转移至相应的管中(注意不要吸出中间层，该层富含DNA和蛋白质)，颠倒混匀，13000rpm离心15min(注意固定离心方向)。轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体;加入300ul 75%乙醇(-20?预冷)，颠倒洗涤，13000rpm离心10min(注意固定离心方向)。
4)轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体;4000rpm离心10sec(注意固定离心方向)，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量将其吸干(一份样本换一个吸头，注意吸头不要碰到有沉淀的一面)，室温干燥1-5min或65?烘箱烘干(不宜过于干燥，以免RNA不溶)，加15ulDEPC水，轻轻混匀，溶解管壁上的RNA，2000rpm离心5sec。注意，此时的RNA最易受RNA酶降解，请立即进行后续步骤。
6.3.2加样:在各设定的分装有反应液的反应管中分别加入处理后的15ul RNA提取物，盖
紧PCR反应管管盖，转移至扩增区。记录标本处理情况。
6.4扩增(在扩增区操作)
6.4.1打开扩增仪电源预热30分钟后，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.4.2将循环条件设定为42? 30min，95? 3min; 95? 10sec, 55? 30sec, 72? 60sec,
5个循环;95? 5sec，60? 30sec，42个循环，反应体系为50ul。
6.4.3仪器检测通道选择:荧光素设定为Fam荧光信号收集设在60? 。
6.4.4将反应管排好放入荧光PCR仪内，记录样本摆放顺序。检查反应管是否盖紧，以免荧
光物质泄漏污染仪器。关好扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
6.4.5扩增结束保存数据后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。分析数据，
填写检验记录，关闭计算机。记录检测结果,签发检测结果报告。
《丙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒
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1.目的:保证TB-DNA检测结果准确、可靠
2.适用范围:TB-DNA的TaqMan荧光检测，标本类型为痰、胸腹水、尿、脑脊液
3.试剂来源:深圳匹基TB-DNA荧光定量PCR检测试剂盒
4. SOP的变动程序:本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责
人，如通过则公布实行。更换试剂或仪器时必须更改该操作程序。
5.质控物:对照及阳性标准品系列均来源于试剂盒，室2000rpm离心10sec后向n个反应管中分别加入38ul，转移至标本制备区。
6.3 标本制备及加样(在标本制备区操作)
6.3.1对痰液样本首先进行目测，若样本中唾液占绝大部分，则需重新采集样本;目测合格后，在样本中加入等体积的4%的NaOH溶液，置于摇床上，在150rpm、37?条件下处理30min，使其充分液化，(如液化不完全，可将液化时间延长至60min或将液化温度提
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高到70?液化20min，样本是否完全液化直接影响核酸提取效率，故液化步骤非常关键，如确有无法液化的浓痰，将其挑弃，用所余痰液进行后续处理)。
6.3.2取n个1.5ml的灭菌离心管(n=样本数 )，作好标记，加入相应样本1ml，13000rpm离心10min;倒去上清，将标本管倒置于吸水纸上，吸干管口的液体，加入1ml灭菌的0.9% NaCl溶液(或注射用生理盐水)，振荡悬浮，13000rpm离心10min;倒去上清，将标本管 倒置于吸水纸上，吸干管口的液体，再加入1ml灭菌的0.9%NaCl溶液(或注射用生理盐水)，振荡悬浮，13000rpm离心10min;倒去上清，将标本管倒置于吸水纸上，吸干管口的液体，加入30ul DNA提取液，振荡混匀，放37?温浴30min，再放入 100?干浴或沸水浴10min，13000rpm离心10min，保留上清备用(如已裂解的标本当天不用，请于-20?保存)。
6.3.3 将其他体液标本(如脑脊液、胸腹水等)、阴、阳对照1ml ，13000rpm离心10min; 倒去上清，将标本管倒置于吸水纸上，吸干管口的液体，加入30ul DNA提取液，振荡混匀，放37?温浴30min，再放入 100?干浴或沸水浴10min，13000rpm离心10min，保留上清 备用。
6.3.4加样:若样本裂解产物保存在-20?，使用前置室温解冻，13000rpm离心5min，在各 设定的反应管中分别加入处理过的样本、室内质控、阴性和阳性对照上清液各2ul,盖紧PCR反应管管盖，转移至扩增区。
6.4扩增(在扩增区操作)
6.4.1打开扩增仪电源预热30分钟后，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.4.2将循环条件设定为37? 5min,94? 1 min;95? 5sec，60? 30sec，42个循环，
反应体系为40ul。
6.4.3仪器检测通道选择:荧光素设定为Fam荧光信号收集设在60? 。
6.4.4将反应管排好放入荧光PCR仪内，记录样本摆放顺序。检查反应管是否盖紧，以免荧
光物质泄漏污染仪器。关好扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
6.4.5扩增结束保存数据后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。分析数据，
填写检验记录，关闭计算机。
6.5 记录检测结果,签发检测结果报告。
《结核杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒
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1.目的:保证CT-DNA检测结果准确、可靠
2.适用范围:CT-DNA的TaqMan荧光检测，标本类型为生殖道分泌物
3.试剂来源:深圳匹基CT-DNA荧光定量PCR检测试剂盒
4. SOP的变动程序:本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负
责人，如通过则公布实行。更换试剂或仪器时必须更改该操作程序。
5.质控物:对照及阳性标准品系列均来源于试剂盒，室2000rpm离心10sec后向n个反应管中分别加入38ul，转移至标本制备区。
6.3 标本制备及加样(在标本制备区操作)
6.3.1标本处理:将加有无菌生理盐水的标本，充分震荡摇匀，取n个1.5ml的灭菌离心管(n=样本数 + 1管室内质控)，作好标记，加入100ulDNA提取液1，再加待测样本100ul，振荡混匀，13000rpm离心15min(注意固定离心方向);吸弃上清(注意吸头不要碰到有沉淀的一面)，再加入50ul DNA提取液2，振荡10sec(沉淀无需打散)混匀，100?干浴或沸水浴10min，13000rpm离心10min(注意固定离心方向)，保留上清备用(如已裂
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解的标本当天不用，请于-20?保存)。对照品无需用提取液处理。
6.3.2加样:若样本裂解产物保存在-20?，使用前置室温解冻，13000rpm离心5min，在各设定的反应管中分别加入处理过的样本裂解产物及试剂盒中的阴性、阳性对照各2ul,盖紧PCR反应管管盖，转移至扩增区。
6.4扩增(在扩增区操作)
6.4.1打开扩增仪电源预热30分钟后，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.4.2将循环条件设定为42? 30min，95? 3min; 95? 10sec, 55? 30sec, 72? 60sec,
5个循环;95? 5sec，60? 30sec，42个循环，反应体系为50ul。
6.4.3仪器检测通道选择:荧光素设定为Fam荧光信号收集设在60? 。
6.4.4将反应管排好放入荧光PCR仪内，记录样本摆放顺序。检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。关好扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
6.4.5扩增结束保存数据后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。分析数据，填写检验记录，关闭计算机。
6.5记录检测结果,签发检测结果报告。
《沙眼衣原体核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒
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1.目的:保证NG-DNA检测结果准确、可靠
2.适用范围:NG-DNA的TaqMan荧光检测，标本类型为生殖道分泌物
3.试剂来源:深圳匹基NG-DNA荧光定量PCR检测试剂盒
4. SOP的变动程序:本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级
负责人，如通过则公布实行。更换试剂或仪器时必须更改该操作程序。
5.质控物:对照及阳性标准品系列均来源于试剂盒，室2000rpm离心10sec后向n个反应管中分别加入38ul，转移至标本制备区。
6.3 标本制备及加样(在标本制备区操作)
6.3.1标本处理:将加有无菌生理盐水的标本，充分震荡摇匀，取n个1.5ml的灭菌离心管(n=样本数 + 1管室内质控)，作好标记，加入100ulDNA提取液1，再加待测样本100ul，振荡混匀，13000rpm离心15min(注意固定离心方向);吸弃上清(注意吸头不要碰到有沉淀的一面)，再加入50ul DNA提取液2，振荡10sec(沉淀无需打散)混匀，100?干
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浴或沸水浴10min，13000rpm离心10min(注意固定离心方向)，保留上清备用(如已裂解的标本当天不用，请于-20?保存)。对照品无需用提取液处理。
6.3.2加样:若样本裂解产物保存在-20?，使用前置室温解冻，13000rpm离心5min，在各设定的反应管中分别加入处理过的样本裂解产物及试剂盒中的阴性、阳性对照各2ul,盖紧PCR反应管管盖，转移至扩增区。
6.4扩增(在扩增区操作)
6.4.1打开扩增仪电源预热30分钟后，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.4.2将循环条件设定为42? 30min，95? 3min; 95? 10sec, 55? 30sec, 72? 60sec,
5个循环;95? 5sec，60? 30sec，42个循环，反应体系为50ul。
6.4.3仪器检测通道选择:荧光素设定为Fam荧光信号收集设在60? 。
6.4.4将反应管排好放入荧光PCR仪内，记录样本摆放顺序。检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。关好扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
6.4.5扩增结束保存数据后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。分析数据，填写检验记录，关闭计算机。
6.5记录检测结果,签发检测结果报告。
《淋球菌核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒
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1.目的:监控本实验室常规工作的可靠性和有效性，确定报告能否发出
2.适用范围:实验室临床检测项目的实验全过程
3.操作人:王宇飞
4.质量控制品制备:
4.1血清质控品制备:
4.1.1 乙肝血清，收集本室检测的临床血清标本，HBV-DNA定量为105拷贝/毫升。充
分混匀，分装于0.5ml的离心管中，每支50ul，制备至少50份,编号(如QB)，-20?保存。或购自自治区临检中心。
4.1.2
丙肝血清，收集本室检测的临床血清标本，HCV-RNA
定量为103拷贝/毫升。充
分混匀后分装于0.5ml的离心管中，每支50ul，制备至少50份,编号(如QC)，-20?保存。
4.2分泌物质控品制备:收集本室检测的临床分泌物标本。
4.3制定均值(X)、标准差(SD或S)及变异系数(CV):
4.3.1在短的时间间隔内由相同的操作者对质控品进行实验检测。
4.3.2 每个项目实验检测不得少于
20次，20次前采用即可法(见7、即可法)。
4.3.3 计算公式如下:
n为结果的份数(或天数)。X为各检测结果
4.4 绘制室内质控图。
5.室内质控操作步骤:
5.1每次实验作相应项目质控品一份(与标本同时处理)。
5.2记录质控品实验结果，取其对数值，并在室内质控图上描点。
5.3分析室内质控图，详见
5.4实验结果合格，即发报告;实验结果不合格(失控)，报告主任，会同有关人员，
查找失控原因，妥善解决。
6.室内质控图:
6.1描点
6.1.1 图中X 线为靶线，X?2SD为警告线，X?3SD为失控线。对于同一批号的质控
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血清不论使用几个月，其质控图均不变化。
6.1.2 每次实验将日期、检测结果和操作者记录在图下方的相应位置，检测结果在图
上对应位置描点，用直线将该点与前一次的点连接。
6.1.3 月底计算当月全部质控血清检测结果的X、SD和CV，并进行图形分析和小结，
将质量控制图存入质控资料档案。
6.2 图形分析
6.2.1如果在X?3SD线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等记入失控记录表。
6.2.2 如果在X?2SD线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即使向
有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。
6.2.3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源。
a)曲线漂移:提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往
是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。 b)趋势性变化:向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种
变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。
c)连续多点分布在靶值一侧:一般认为质控血清的检测结果连续6天以出现在靶值同
一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小(小于1.5,)，因此凡出现连续6
天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。
d)其他规律变化:(周期性等)
6.2.4 通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源
a)每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的 X和SD与该批测定的X和SD进行
比较。如果发生了变化，说明准确度发生了变化,提示有非随机误差存在。如果当月SD不同侧表明检测的精密度发生了变化。
b)将使用同一批号质控血清的CT值的X和SD按月份列出。如果X逐在月上升，应考
虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而SD逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。
c)在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋
势分析。
7.“即刻法”质控:
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“即刻法”质控，只须检测3次，即可进入质控状态。 具体方法如下:
(1)从测定值中，找出Xmax和Xmin (2)计算测定值的X和S
(3)计算SI上限值和SI下限值，见公式
当SI
上限
SI上限= SI下限=
Xmax,X S X,Xmin S
(4)将SI上限、SI下限与SI值中的数字比较
值和SI
下限
值,n2s时，表示处于控制范围内，可以继续往下测定，继续重复以上
各项计算，当SI上限和SI下限有一值处于n2s和n3s
值之间时，说明该值在2S,3S范围，处于“告警”状态;当SI上限和SI下限有一值,n3s值时，说明该值已在3S范围之处，属“失控”。质控数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，重新测定该项质控血清。
所引用图表:
室内质控图见附图2
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1.目的:保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2.操作人:王宇飞
3.标准程序:
3.1基因扩增实验操作程序 :
3.1.1接通电源，打开iCycler扩增仪、蓄电池及电脑的开关。
3.1.2扩增仪预热至少30min。
3.1.3从开始菜单中选择Icycler，进入循环编辑。
3.1.4如使用已编辑好的循环条件，点Protocol Library，点View Protocol，双击目录中的Icycler选择您的循环名称。如新编程序则点Edit，编辑、命名后保存。
3.1.5点View plate Setup选择您的反应管板面设置。如重新编辑则点Edit。荧光性Flurorescence选择Fam系统，命名后保存。
3.1.6在View Plate Setup窗口下点Run，在Run Prep 窗口下检查循环条件及反 应管板面设置文件名后，输入反应体系，点Begin Run循环开始。
3.1.7循环状态时可在Run Time central中查看运行状况。
3.1.8循环结后，点PCR View/Save Date，在Data Run File栏中输入结果文件名后点save键保存。
3.1.9返回PCR Quantification窗口，在Base Line栏中选择PCR Base Line Subtraction;在Threshold cycle calculation栏中选择2到15个循环， 20 倍方差，点Recalculate键重新分析。
3.1.10如果为定量PCR，在文件分析模式下点PCR Standard Curve显示标准曲线及标准品拟合度。
3.1.11返回PCR View/Save Date窗口，在Viewing栏中选Threshold cycle可显示CT值，选Calculated Concentration可显示标本拷贝数，选Standard Quantities可显示标准品拷贝数。
3.1.12使用完毕后关闭电源。
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3.2结果分析:
3.2.1分析条件设定:基线(baseline)取为2—10或2—15个循环的荧光信号，阈值(threshold)可根据仪器噪音情况在15—40内调整。为避免漏检阳性标本，应首先将基线定为6—10/3—10/2—10个循环的荧光信号观察分析Ct值，如果没有Ct值小于16.0的样本，则将基线改定为6—15/3—15/2—15个循环的荧光信号进行结果分析。
3.2.2质控标准:
阴性对照的检测结果应为阴性;
强阳性对照的Ct应小于等于30.0;
临界阳性对照的Ct值应大于强阳性对照的Ct值。其中任何一条不满足上述条件，此次实验视为无效。
3.2.3结果判断:
HBV-DNA:
检测样本Ct值小于等于38.0时报告为阳性;
检测样本Ct值为40.0或0.0时报告为阴性;
检测Ct值大于38.0且小于40.0的样本建议复查。复查结果Ct值小于40.0或不等于0.0者均报告为阳性，等于40.0或0.0时报告为阴性。
HCV-RNA:
检测样本Ct值小于等于36.0时报告为阳性;
检测样本Ct值为40.0或0.0时报告为阴性;
检测Ct值大于36.0且小于40.0的样本建议复查。复查结果Ct值小于40.0或不等于0.0者均报告为阳性。
CT-DNA和NG-DNA:
检测样本Ct值小于等于38.0时报告为阳性;
检测样本Ct值为40.0或0.0时报告为阴性;
检测Ct值大于38.0且小于40.0的样本建议复查。复查结果Ct值小于40.0或不等于0.0者均报告为阳性，等于40.0或0.0时报告为阴性。
TB-DNA
检测样本Ct值小于等于37.0时报告为阳性;
检测样本Ct值为40.0或0.0时报告为阴性;
检测Ct值大于37.0且小于40.0的样本建议复查。复查结果Ct值小于40.0或不等于0.0
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者均报告为阳性，等于40.0或0.0时报告为阴性。
3.2.4定量参考说明:本试剂盒配有阳性参控品系列，可进行病毒载量的量化分析。将阳性参控品1-4的外标拷贝浓度输入，仪器将自动以阳性参控品拷贝浓度的对数值为横坐标，以其实际测得的外标Ct值为纵坐标给出标准曲线。在实验结束后，根据所测样本的Ct值，仪器将会自动给出该样本中的病毒载量(copies/ml)。目前使用的此套阳性参控品系列的浓度系采用Roche公司的试剂盒进行比对得出，但在未用国家标准品标定之前，仅作为样本病毒载量的参考定量。本试剂盒的检测极限为5.0*102copies/ml,线性范围为5.0*102-5.0*107copies/ml。
3.2.5阳性参控品系列
阳性参控品1，(1.0-5.0)*107copies/ml
阳性参控品2，(1.0-5.0)*106copies/ml
阳性参控品3，(1.0-5.0)*105copies/ml
阳性参控品4，(1.0-5.0)*104copies/ml
(注意:阳性参控品具体拷贝数请参照试剂盒内给定值)
3.2.6使用方法:将设定的反应管数定为n + 4管阳性参控品，并按上述配方配制 n + 4个测试的反应液;在加样区再加入各阳性参控品，盖紧管盖，置于PCR仪内。在扩增开始前条件设定时，将阳性参控品设为“STND”并输入拷贝数，将待检样本和对照品设为“UNKN”。
3.2.7质控标准:除说明书中所述质控标准外，四个阳性参控品的Ct值都应小于38.0,标准曲线拟和度的绝对值应大于等于0.980,否则视为定量结果无效。
3.2.8定量结果判断:
5.0*102copies/ml?样本检测结果? 5.0*107copies/ml时，按实际检测拷贝数报告。 样本检
测结果大于 5.0*107copies/ml时，既可直接报告为大于 5.0*107copies/ml，也可用正常人血
清按10倍梯度做相应稀释，使其拷贝数落在线性范围内，测定结果应以稀释倍数进行校正。
样本检测结果小于 5.0*102copies/ml时，拷贝数仅供参考，报告为低于最低检出限。 样
本检测结果等于0.0copies/ml时，报告为阴性。
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王宇飞
批 准 人: 张惠彬
批准日期:2009年07月01日
二零零九年七月一日制
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目 录
程序管理文件
前言 ......................................................... 1
质量方针、目标 ............................................... 2
文件管理程序 ................................................. 3
临床基因扩增实验室设置与管理 ................................. 4
实验室人员配置、管理及培训 ................................... 5
临床基因扩增实验室各区的工作制度 ............................. 7
内务管理制度 ................................................ 10
实验室清洁制度 .............................................. 14
残留试剂、废弃物的处理程序 .................................. 16
实验室的生物防护程序 ........................................ 17
实验室的应急处理程序 ........................................ 18
化学试剂、消耗品的管理程序 .................................. 19
仪器设备的管理程序 .......................................... 20
实验室质量控制管理程序 ...................................... 22
临床标本的管理程序 .......................................... 24
检验结果报告程序 ............................................ 25
抱怨处理程序 ................................................ 26
70
实验室记录管理制度 .......................................... 27 标准操作程
序 ..................................................
化学试剂配制的标准操作程序 .................................. 28
试剂的进购、质检标准操作程序 ................................ 29
消耗品进购、质检、贮存标准操作程序 .......................... 31
移液器的使用、维护及校准标准操作程序 ........................ 33
离心机的使用、维护及校准标准操作程序 ........................ 35
冰箱的使用维护标准操作程序 .................................. 37
生物安全柜的使用维护标准操作程序 ............................ 38
洁净工作台的使用维护标准操作程序 ............................ 39
干式恒温器的使用、维护及校准标准操作程序 .................... 41
恒温水浴箱使用、维护与校准标准操作程序 ...................... 43
旋涡振荡器的使用维护标准操作程序 ............................ 44 BIO-RAD iCycler荧光定量PCR
检测仪的使用、维护及校准标准操作程序
............................................................ 45
UPS使用标准操作程序 ........................................ 47
可移动紫外灯使用维护标准操作程序 ............................ 48
温度校准标准操作程序 ........................................ 49
标本采集、验收、保存标准操作程序 ............................ 50
标本唯一性编号标准操作程序 .................................. 52
乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序 ........................ 53
丙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序 ........................ 55
71
结核杆菌基因扩增检测标准操作程序 ............................ 57
沙眼衣原体基因扩增检测标准操作程序 .......................... 59
淋球菌基因扩增检测标准操作程序 .............................. 61
室内质量控制标准操作程序 .................................... 63
基因扩增检测实验及结果分析标准操作程序 ...................... 66
临床基因扩增实验室程序文件目录 .............................. 70
72
附图、附表
附图 01.实验室平面图
附图 02.室iCycler荧光定量PCR检测仪使用记录表 附表13.仪器维护记录表
附表14.仪器故障处理表
附表15.试剂进购记录表
附表16.试剂质检记录表
附表17-1.生物安全柜使用记录表
附表17-2.洁净工作台使用记录表
附表18.消耗品进购记录表
附表19.消耗品质检记录表
附表20.室间质控记录表
附表21.实验室温度、湿度、水浴箱温度记录表
附表22.垃 圾 处 理 记 录 表
人员培训计划及培训记录表
基因检验报告单格式
73
74
浙公网安备 33021202002483