离体蛙心灌流
一、实验目的
1、学习离体蛙心灌流的方法;
2、观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。
3、观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
二、动物与器材
1、实验动物:蟾蜍
2、实验器材:斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl溶液、 5%NaCl溶液、 2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液
三、方法与步骤
(1)离体蛙心的制备:双毁髓?左主动脉结扎?左右两主动脉下方活结备用?剪口，插管(管内盛任氏液与肝素)?结扎备用线(套管，左右主动脉)?剪断动脉?结扎并剪断静脉。
(2)固定套管并用任氏液换洗血液;进入RM6240系统。
(3)观察并
记录
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正常心搏曲线;
(4)向套管内分别加入以下溶液(0.65%NaCl溶液2d 、 5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶液 1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ) ，观察并记录曲线变化。
四、实验结果
由于实验技术的问题，我们未能成功的将斯氏蛙心套管插入蟾蜍心脏内，所以后续实验未能顺利进行，我们只好观察其他组同学的实验，看到了滴加不同药液后心搏曲线的变化，并通过实验课后查阅相关
资料
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，对这些现象进行了理解分析。
五(分析与讨论
1.实验操作方面
实验后我们分析自己失败的原因:把斯氏蛙心管从左主动脉插了
进去，这样便增加了实验操作的难度，因为从主动脉将套管插入时，
需要拐一个弯才能进入，直接导致了实验的失败。
2.若按照实验原理，各个子实验应出现的现象及原因分析
?作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被仍能产生节律性兴奋和收缩。因此，可以记录到正常心搏曲线。心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。 ?有关心肌细胞的一些特性
心肌细胞根据组织学、电生理及功能特点，可分为两类:一类是工作细胞 ，这类细胞具有普通的兴奋、传导、收缩能力，在正常情况下，不具自动节律性。另一类是自律细胞，他们不仅具有兴奋性和传导性，而且具有自动节律性。
心肌的收缩力主要受血浆中Ca2+浓度的影响。在一定范围内，血Ca2+浓度升高，Ca2+内流增多，心肌收缩增强，反之，低Ca2+时心肌收缩减弱。
心率的快慢主要取决于自律细胞4期自动除极速度，若除极速度快，则心率加快，若除极速度慢，则心率减弱。
心肌的传导性主要受0相除极时的速度和幅度的影响。0相除极速度和幅度大时，传导速度大，反之则慢。因为0相幅度大，和未兴奋部位的电位差大，形成的局部电流强，0相上升速度快，局部电流的形成也快，因而也使兴奋传导速度加快。
?灌流NaCl对心搏曲线的影响
NaCl灌流 细胞外液Ca2+下降 心肌细胞动作电位其间Ca2+内流降低 心肌细胞胞浆Ca2+浓度下降 心肌收缩力下降 收缩幅度降低
?灌流KCl对心搏曲线的影响
+ a. 细胞外液K浓度轻度升高
++K抑制Ca2+内流 膜内外K浓度梯度减小 Ca2+内流减小 静息电位绝对值减小 Ca2+的兴奋-收缩 静息电位与阈电位水 偶联作用减小 平的电位差减小 心肌收缩力降低 心肌细胞兴奋性升高 收缩幅度降低
++b. 细胞外液K浓度显著升高 膜内外K浓度梯度减小 静息电位绝对值减小到-55Mv Na+通道失活 心肌细胞兴奋性丧失 心脏停搏于舒张状态
?灌流Ca2+对心搏曲线的影响
细胞外液Ca2+浓度显著升高
膜内外Ca2+浓度梯度增大
慢反应细胞4期自动 工作细胞动作电位 除极速度加快 Ca2+内流升高 自律性升高 肌浆Ca2+浓度升高 肌浆浓度持续升高 心率加快 Ca2+与肌钙蛋白 Ca2+与肌钙蛋白
结合数量增多 只结合不解离
心肌收缩力增强 心肌持续收缩
?灌流肾上腺素、乙酰胆碱对心搏曲线的影响
灌流肾上腺素时，其与心肌的β1受体结合，心率加快、心肌收缩力增强、房室交界兴奋传导速度加快，产生正性变时、变力和变传导效应。
灌流乙酰胆碱时，其与心肌细胞的M2受体结合，产生负性变时、变力和变传导效应。
浙公网安备 33021202002483