项目名称冠心合剂对心梗大鼠心肌的保护作用及机制研究推荐单位

项目名称：冠心合剂对心梗大鼠心肌的保护作用及机制研究 推荐单位：浙江省中医药管理局 项目简介： 研究立项背景：冠心病是由于冠状动脉粥样硬化引起心肌血氧供需之间不平衡，而导致的心肌缺血缺氧甚则凋亡坏死，是严重威胁人类健康的疾病。由大剂量黄芪和失笑散组成的冠心合剂作为院内制剂在临床治疗冠心病慢性心肌缺血中应用多年，疗效显著，能有效缓解心肌缺血引起的胸闷胸痛、乏力气短、心悸等症状。前期研究表明冠心合剂能提高心梗后大鼠血清NO、HDL-C含量，降低血清ET、CK-MB、cTNI、TC、TG、LDL-c水平，促进血管表皮和内皮生长因子bFGF、VEGF的表达，从而促进血管新生并缓解心肌缺血。为进一步阐明冠心合剂抗心肌缺血的机制，课题组对冠心合剂调控心肌细胞的凋亡展开了研究。 主要研究内容及结果：1.目的：观察冠心合剂对大鼠心梗模型的保护作用及对缺血诱导的心肌细胞凋亡和凋亡信号转导途径的影响。2.研究内容：本研究采用雄性SD大鼠随机分为11组：模型组、假手术组、冠心合剂大中小剂量组及西药组（倍他乐克、阿司匹林、代文、立普妥、可定、来适可）。各组相应剂量灌胃7天后行前降支结扎术建立大鼠急性心梗模型，TTC单染色法检测梗死面积，颈动脉插管检测血流动力学变化，TUNEL染色检测凋亡率，western blot法检测凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2、Bax、Bad、p-bad、caspase-3、caspase-8的表达。并对冠心合剂主要活性成分如何发挥血管保护作用进一步探讨。3.结果显示：1）冠心合剂能明显改善心梗大鼠血流动力学指标及心功能，降低心梗面积并抑制梗死边缘区心肌细胞的凋亡。2）冠心合剂能降低梗死边缘区凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达，且呈剂量依赖性。3）冠心合剂能明显上调心梗后大鼠Bcl-2、P-bad的表达，下调Bax、Bad、Fas、FasL的表达，呈剂量依赖性。4）冠心合剂主要通过线粒体及死亡受体介导的凋亡信号转导通路抑制梗死边缘区心肌细胞的凋亡。5）阿托伐他汀能减少心梗大鼠心肌梗死面积，抑制心肌细胞凋亡，改善梗死后左心室功能。6）冠心合剂主要活性成分异鼠李素能减少血管内皮细胞的凋亡和炎症反应。 应用推广及取得的经济效益：冠心合剂作为院内制剂在临床治疗冠心病慢性心肌缺血中已应用多年，衍化而来的益气养阴活血冠心协定方在临床亦应用广泛，冠心合剂每 帖 行书字帖3500常用字图幼儿笔画描红字帖田字格空白字帖簪花小楷字帖乐善堂 单价20元左右，院内年使用量超过1000贴，每年可产生持续而可观的经济效益。此外，研究成果将为益气活血类中药应用于临床心血管疾病的治疗提供理论和科学依据，具有明显的社会效益。课题组现已发表SCI 2篇，一级论文5篇，培养研究生4名。 主要科技创新： （1）项目中的冠心合剂是课题组在长期的临床实践中摸索出由大剂量的黄芪配伍失笑散组成，在临床实践中得到验证，对治疗冠心病慢性心肌缺血中疗效显著，冠心合剂首先由本课题组提出并对其作用机制展开研究，国内外未见相关报道； （2）研究结果表明冠心合剂能明显改善心梗大鼠血流动力学指标及心功能，降低心梗面积并抑制梗死边缘区心肌细胞的凋亡。 （3）冠心合剂能降低梗死边缘区凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达，且呈剂量依赖性。 （4）冠心合剂能明显上调心梗后大鼠Bcl-2、P-bad的表达，下调Bax、Bad、Fas、FasL的表达，呈剂量依赖性。 （5）研究结果表明西药组阿托伐他汀能减少心梗大鼠心肌梗死面积，抑制心肌细胞凋亡，改善梗死后左心室功能。 （6）研究结果表明冠心合剂主要活性成分异鼠李素能减少血管内皮细胞的凋亡和炎症反应。 综上，本项目研究结合了多种现代细胞分子生物学技术，从蛋白、基因水平来阐述冠心合剂抗心肌细胞凋亡的疗效及具体机制，旨在指导临床实践，并为开发研制新的制剂，进一步推 广临床应用打下基础。 主要完成人及技术贡献： 项目第一完成人情况 姓 名 陈铁龙 出生年月 1977-09 技术职称 主任医师 工作单位 杭州市中医院 对本项目主要学术、技术贡献 项目负责人对项目的前期设计和项目开展起到主要贡献作用，对实验的具体开展工作进行了指导，实际实验操作部分由研究生及主治医师开展，其中对实验操作困难部分给予技术上的支持。目前实验结果已发表相关论文7篇，其中已第一作者发表SCI 2篇，国内期刊论文5篇，并培养了研究生4名。负责人每年定期组织开展全国中西医结合心血管病诊疗新进展学术交流会，向国内外同行推广项目成果。         项目第二完成人情况 姓 名 祝光礼 出生年月 1955-07 技术职称 教授 工作单位 杭州市中医院 对本项目主要学术、技术贡献 对项目的具体设计进行指导，督导项目开展，并积极对项目成果进行推广应用。         项目第三完成人情况 姓 名 赫小龙 出生年月 1983-09 技术职称 医师 工作单位 杭州市中医院 对本项目主要学术、技术贡献 项目实施的实验操作部分及数据统计与论文撰写。         其他完成人情况 排名 姓名 性别 出生年月 技术职称 工作单位 4 汪禹 男 1990-10 医师 杭州市中医院 5 方伟 女 1970-04 主任医师 杭州市中医院 6 陈启兰 女 1976-01 副主任医师 杭州市中医院 7 魏丽萍 女 1979-04 副主任医师 杭州市中医院 8 刘昭 女 1982-02 主治医师 杭州市中医院             主要完成单位及创新推广贡献： 杭州市中医院。冠心合剂已作为院内自制制剂在院内推广使用，每帖单价20元左右，院内年使用量超过1000贴，每年可产生持续而可观的经济效益。课题组每年定期开展全国中西医结合心血管病诊疗新进展学术交流会，向国内外同行推广项目成果。 经济（社会效益）及推广应用情况： 冠心合剂是课题组在长期临床实践中摸索出由大剂量的黄芪配伍失笑散组成，临床治疗冠心病慢性心肌缺血疗效显著，能有效缓解心肌缺血所引起的胸闷胸痛、乏力气短、心悸等。实验结果证实冠心合剂有提高心肌梗死后大鼠心功能指标，抑制梗死边缘区心肌细胞的凋亡、保护缺血心肌的作用，其机制可能是通过抑制死亡受体和线粒体受体介导的心肌细胞凋亡信号通路发挥抗凋亡的作用，为益气活血类中药应用于临床心血管疾病的治疗提供理论和科学依据。冠心合剂已作为院内自制制剂在院内推广使用，每帖单价20元左右，院内年使用量超过1000贴，每年可产生持续而可观的经济效益。课题组每年定期开展全国中西医结合心血管病诊疗新进展学术交流会，向国内外同行推广项目成果。课题组现已发表SCI 2篇，国内期刊论文5篇，培养研究生4名。冠心合剂目前在临床主要以草药方或颗粒剂形式，课题组计划后期开展对新剂型的研制及冠心合剂有效成分的提取纯化，探索更多的应用价值。 代表性专著及作者： 作者 论文专著名称/刊物 年卷页码 (X年X卷X页) Tie-Long Chen, Guang-Li Zhu, Jian-An Wang, Guo-Dong Zhang, Hong-Fei Liu, Jin-Ru Chen, Yu Wang, Xiao-Long He Protective effects of isorhamnetin on apoptosis and inflammation in TNF-α-induced HUVECs injury/ Int J Clin Exp Pathol 2015,8(3), 2311-2320 Tie-Long Chen, Guang-Li Zhu, Xiao-Long He, Jian-An Wang, Yu Wang, Guo-an QI Short-term pretreatment with atorvastatin attenuates left ventricular dysfunction, reduces infarct size and apoptosis in acute myocardial infarction rats/ Int J Clin Exp Pathol 2014,7(12),4799-4808 陈铁龙，祝光礼， 赫小龙，齐国安 冠心合剂减少急性心肌梗死大鼠凋亡及对Bax、Bcl-2、p-BAD、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达的影响/中华中医药学刊 2014；32(11)：161-164 陈铁龙，祝光礼， 赫小龙，齐国安 冠心合剂减少大鼠心肌梗死边缘区凋亡及对Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达的影响/中华中医药学刊 2013；31(11)：2453-2455 陈铁龙,祝光礼,盛智超, 赫小龙, 毛立华,许雨良 冠心合剂联合PCI对冠心病患者的症状、安全性及IGF-1影响/中华中医药学刊 2013；31(10)：2197-2199 陈铁龙，祝光礼， 赫小龙，齐国安 冠心合剂对急性心肌梗死大鼠血流动力学、心梗面积及凋亡的影响/中华中医药学刊 2013；31(12)：2711-2713 赫小龙，陈铁龙， 祝光礼，齐国安 黄芪失笑散对急性心肌梗死大鼠Caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响/中华中医药学刊 2012；30(2)：357-359       主要知识产权及发明人：无