黄瓜花叶病毒卫星RNAT1株系的功能研究

黄瓜花叶病毒卫星RNAT1株系的功能研究 科 技 通 报 第 卷 第 期Vol.25 No.5 25 5 年 月2009 9 Sep. 2 009 BULLETIN OF SCIENCEAND TECHNOLOGY 黄瓜花叶病毒卫星株系的功能研究 RNAT 1 *朱丽萍曾蓉廖乾生吴鹏陈集双， ， , ， 浙江理工大学 生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 研究 所 杭州 ,310018, 摘 要采用在侵染番 茄 中 获 得 一 卫 星,RT)PCR,cucumber mosaicviru s，CMV,,Lycopersico esculentunm, ,，登 陆 号, 。 以作 为辅 助 病 毒 ，和分 别 接 种RNAT1satDQ785472CMV)FnyT1satCMV)FnyCMV)Fny+T1sat烟草 和番 茄种寄主植物 接种后检测寄主系统叶中 卫 星发 现 ,Nicotiana tabacum, 2。 3 d，RT-PCRRNA， 均存在于烟草和番茄中 处理寄主的 总电泳分析结果也 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明 以为辅助病毒 在T1sat，RNA,CMV-Fny，T1sat 烟草和番茄中均能高含量积累 。 其中减轻 在烟 草中症状 ，而与混和接种则T1satCMV-FnyCMV-FnyT1sat 和后采用分析对 这种 寄 主 中各接种引起番茄产生坏死症状 7 d14 d，Realtime RT-PCRT1sat2CMV-Fny 。 基因组影响的结果显示 均减 少烟草和番茄中病毒基因组的含量 但在番 茄中的 抑 制 效 应 比，T1sat， T1sat 在 烟 草 中 明 显 。本 研 究 结 果 提 示 ,分别减轻和加重在烟草和番茄中 的 病毒症状反应 ，且T1satCMV-Fny 均降低在烟草和番茄中的 基因组含量 。T1satCMV-Fny 关键词 黄瓜花叶病毒 卫星症状调控 基因组含 量,,RNA,, +中图分类号 文献标识码 文章编号 ,S432.41 ,A ,1001-7119,2009,05-0599-06 Function of Satellite RNA T1 Strain of Cucumber Mosaic Virus *ZHU Liping，ZENG Rong，LIAO Qiansheng，WU Peng，CHEN Jishuang ,Institute of Bioengineering，Zhejiang Sci-Tech Univesrity，Hangzhou 310018，China, Abstract,A strainof satellite RNA ,T1sat,was clonedb y RT-PCR from cucumber mosaicvirus ,CMV,infected-tomato ,Lycopersicon esculentum,and full lengthof T1sat was337 nt ,Accession NumberD:Q78547,2. Mixture of CMV -Fny virion and transcripts RNA from T1sat cDNA clone was-in occoulated on the seedlingsof Nicotianata bacum，Lycopersi- con esculentum, respectively.At 3 days postoculation,dpi,R，T-PCR detection results showed that allT1sat existed in -in the systemic leavesof N. tabacum anL.d esculentum. When relative accumuoflation T1satin the inoculated leavesof host plants was analyzedby Realtime R T-PCR，we foundthat T1sat depressedthe level of CMV-Fny 1a，2a，2b，3a and CP onN. tabacum anL.d esculentum，but the effectof T1sat on CMV-Fny genomicRNAs accumulation onN. tabacum was more severe than that on L. esculentum. T1sat attenuated symptoms ibnduy Cced MV -F ny on N. tabacum，and the presenceof T1sat aggravated symptom expression bcay CusedMV -Fny onL. esculentum. Key words,cucumber mosaicvi rus,satellite RNA,symptom modulation,accumlationu of genomicRN As 收 稿 日 期 ,2008-03-10 基 金 项 目 国家自然科学基金 和科技部国际合作重点项目 资 助 ,,30671316,,2004DFA05000,。 作 者 简 介 朱 丽 萍 女 浙 江 宁 波 人 硕 士 生 研 究 方 向 植物病毒学与分子生物学 ,,1982-,，，，，,。 通 讯 作 者 陈 集 双 博 导 教 授研究方向植物病毒与分子生物学 * ,，，, 。 E -mail,chenjs@zstu.edu.cn . 卫 星转 录 试 剂 盒 大 连 是依赖于辅助病毒 RNA ,satellite RNA, altime PCR ,TaKaRa，,Trizo,l、Su- 逆 转 录 酶 美 国 perscriptase? ,Invitrogen， ,T，-easy 复 制 包 被 和 在 寄 主内扩散的一类低 ,helper virus,、 载体转录试剂盒 美国其余 分子量是寄生于病毒的亚病毒 卫 星有 、、RQ DNas,ePromeg，a,，RNA，。 RNA 试剂均为国产分析纯 其特异核苷 酸 序 列 与 辅 助 病 毒没 有 或 很 少 序。 ，RNA ,，,12列 相 似 性 。已报道大多数卫星对 辅 助 病 毒 症 状 的全长 克隆1.3 T1satRNA ,,10起减轻作用 但 同 一 卫 星由于辅助病毒不同而 ，RNA 大 田 自然感病番茄样品按照本实验室 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 对症状调控也会产生不同影响 卫 星与 辅 助 病 提 取 双 链取 含 有 常 规 电 泳 检 测 ，RNARNA ,dsRNA, ， 。 毒在不同寄主上表现不同症状 对辅助病 卫星的 番 茄 样 品 参 照使 用 说 明 。 RNACMV-satRNA0.1 g，Trizol毒症状调控 是 由 卫 星本 身 辅助病毒以及寄主 书 提 取 样 品 总 克隆番茄中的卫星 RNA、 RNA，RT-PCR ,，,13 三者共同决定 方法参考覃玥等方法 扩 增 目 的 片 段 。RNA ,RT-PCR 黄瓜 花 叶 病 毒 ,cucumber mosaicviru s， CMV, 割胶回收 回收产物与载体连接 转 化 参 考 精、T-easy、 ,11,侵染多种植 物 是 寄 主 最 多 分 布 最 广 对 农 作1000，、、 筛 选 阳 性 克编 分子生物学实验指南 菌 液PCR 。 物危害最为严重的世界性植物病毒之一 基 因 ，CMV隆提取阳性克隆质粒并经过酶切鉴定 个克选取，。 5 组 包 含个 基 因 和分 布 于条5,1a，2a，2b，3aCP,3RNA 隆测序 。,3，4,分子上 和亚组的株系中 至少 在亚组。 ??CMV， 体外转 录与接 种1.4 T1sat 有 个 携 带 着 大 小 在 65 CMV 330~405nt ,nucleotid，e 以的克 隆 质 粒为 模 板 用 ，T1satcDNApT1satsatF,3，5,卫星不编码任何基因 尽管nt,RNA。 CMV-satRNA 和 引 物 satR ,satF 5'-TAATACGACTCACTATA-G产物但其与病毒共同侵染寄主植物使寄主的症状 ， GTTTTGTTTGWTGGA-3'G，TAATACGACTCACT-A减轻 加 重 或 无 影 响 而 大 多 数对 辅 助 、,CMV-satRNA为 启 动 子 序 列 TAT7 ，satR 5'-GGGTCCTGTAGA- G ,2-4，6,病 毒症状起减轻作用分在同一个。 CMV-satRNA 按 照克 隆反 应 条 件 获 得 产 物 GA-3,T1satPCRPCR， ' 子中存 在 着 致 弱 黄 萎 和 坏 ,attenuatio,n、,chlorosi,s该产物经过回收后直接作为体外转录 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 体 。T1sat死等不同功能区域 卫星对辅助病毒,necrosi,s，RNA 外转录按照试剂盒说明书进行 体外转录产物 。T1sat,,7-9 症状的调节通过其特异性序列或结构来实现的。用酶消化去 除模 板 酚氯 仿 抽 提 异RQ DNaseDNA，/， 在浙江省湖州市采集番茄植株中 我 们 发 现 了 ，丙醇沉淀 真空干燥 最后用溶解用、，DEPC-H O。 10 2 一受侵染样品携带卫星本研究克隆了该CMVRNA。 浓 度 为病毒粒子磷酸缓冲 μL100 mg , mL CMV-Fny 卫 星并 且 将 其 与假重组于烟草和番 RNA，CMV-Fny液加的转 录共 同 接 ,50 mM， pH 9.2,1 μgT1satRNA茄中分析该卫星的存在对辅助病毒症状的调控情 ， 种 烟 草 和 番 茄 同 时 以 磷酸缓冲液接种为阴性对 ， 况 并 采 用 分 析 该 卫 星 对 ， RealtimeR T-PCR RNA 照株植物 重复次实验 所有寄主植物 每个处理。 3，2， 各个基因组积累量的影响 CMV-Fny。接 种 后 在 白 天光 照夜 晚 生 长 培 养，28?，16 h，22? 箱中培养 接种后与假重组检测 。 CMV-FnyT1satPCR ,12,材料与方法 1 按照方法Liao。 基因组 相对定 量分析 1.5 CMV-Fny 毒源和 寄主植 物 1.1 接 种 和 3 d ,days pos-tinoculato，n dpi, 7 d，4 侵 染 性 克 隆 和 CMV-Fny cDNA pF109、pF209 打孔器等量采集各个处理的接种 叶 和mm,7 d14 d， 由苏格兰作物研究所 教 授 提 供 pF309 Palukaitis ， 打 孔 器等量采集各个处理的所有系统叶 所 4 mm, 基 因 组克 隆 体 外 转 录产 物 共 同 CMV-FnycDNARNA有样品保存于冰箱中 提取各个样品总 。 ，-80?RNA接 种 于 烟 草 中 接 种 提 取 病 毒 粒 子 病 毒 粒 子 ，15 d，分 光 光 度计测定浓度和纯度 样 品 要 求, RNA 保存于寄主植物为烟草 -80?。 ,Nicotiana tabacum, 采 用 OD260, OD280, 1.95,。 RealtimeR T-PCR ,ABI 和番茄 温室中烟草培育 ,Lycopersico nesculentum, 。各 美 国 分析各个处理中的 PRISM700，0 , CMV-Fny 至叶期番茄培育至片真叶期用于病毒接种 3~4，2。 个基因组和的含量 的T1sat。Realtime R T-PCRcDNA 酶与试 剂 1.2 模 板 合 成 定 量 引 物 反 应 条 件 数 据 分 析 按 、、PCR，TM 酶 抑 制 剂 RNA 、PyrobestDNA Polymeras、e照 ,12,,13,回 收 试 剂 盒 大肠杆菌感受态 细 胞 、、DNAHB101Re-和 等方法 。LiaoFeng 第 期5 601 朱丽萍等黄瓜花叶病毒卫星株系的功能研究.RNA T1 与假重 组2.2 T1satCMV-Fny 侵 染 性克 隆 转 录与病 T1satcDNARNACMV-Fny结果 2 毒粒子共同接种于烟草和番茄 接 种 后 。 3 d，RT- 检测寄主系统叶中和存 在 情 况 PCRCMV-FnyT1sat， 的克隆2.1 T1sat 对大田自然感病番茄植株样品 分 析 发 在烟草和番茄的系统叶均能检测到 结 果 如 图3A， dsRNA 与烟草和番茄寄主上 因 此 现 其中有一个样品被 侵 染 并 且 携 带 卫 星 CMV-FnyT1sa。t ，，CMV- ，CMV， 能够作为辅助病毒 支持其在寄主中复制 命 名 为 命，、图 该 卫 星 RNA , 1A, ,CMV CMV-T1， RNA FnyT1sat 移 动 和 积 累 接 种 后提取烟草和番茄组织中 。14 d， 名 为样品以汁液摩擦重新接种于番 含T1sa。t CMV 总电 泳分析结果如图这 表 明 在 烟 草 茄 上 接种的植株培植在 温 室 中 接 种 后的 番 RNA，TBE3B。 ，, 21 d 和番茄中 在寄主内是高丰度积累 并 且茄表现典型花叶症状 并 且 植 株 矮 化 如 图 所 示 ，T1sat，CMV- ，，2。 参照已发表卫星序 列 设 计 扩 增 卫 星 CMVRNA，RNA 与进行假重组后 ，其基因组含量降低 。采用FnyT1sat 分析接种后和寄主接种叶中 ReatimeR T-PCR3 d7 d 以 侵 染 的 番 茄 总 为 模 板 全 长 引 物 ,CMV-T1RNA ， 的 积 累 量 图在 烟 草 以 及 番 茄 接 T1sat,4,3， d， T1sat扩 增 结 果 如 图产 物 克 隆 并 测 序 发RT-PCR1B。 PCR 种叶种的相对含量分别为 和 2.35、1.47 0.02,7 d， 现,该卫星全长为,序列登陆号,。RNA337 ntDQ785472 在烟草和番茄中含量略有上升 T1sat。 均 明 显 降 低 图在 烟 草 中接 种 后,6, 。 7 d，CMV-Fny 的 和 含 量 分 别 比 高1a，2a，2b，3a CP CMV-Fny+T1sat ，，，和 倍 , 以番茄作为寄主植 物 ，2.92.31.93.0 3.3 各 个 的 含 量 比 高 CMV-FnyORFCMV-Fny+T1sat 2.3~ 提 取 株 接 种 和 寄 主6 CMV-Fny CMV-Fny+T1sat 植物总以为 内 参 照 采 用 不 同 的 引 RNA。 18s rRNA， 物 通 过分 析在种 寄 主 的 相Realtime RT-PCR T1sat3 ?)C 对含量 相对含量的计算按照法如。 Ct,2, T )aver T1sat C) aver 18s C,。T1sat=2, TT 对症状 的影响2.3 T1satCMV-Fny 接 种 后 在烟草新长叶出 现 花 叶 5 d，CMV-Fny 症状而接种则还未 表 现 症 状 这 表,CMV-Fny+T1sat, 明在延缓在烟草上的症状反应 接种 T1satCMV-Fny。 后 烟草出现重花叶症状 接 种 而14 d， CMV-Fny ， 诱导寄主产生轻花叶 图 因 此 CMV-Fny+T1sat , 5 , ， 可以减轻在烟草上的症状 病毒接种 T1satCMV-Fny。 早 期 和 在 番 茄 的 症 状 无，CMV-Fny CMV-Fny+T1sat 明 显 差 异 均 引 起 植株产生花叶症状 接 种 后 ，,，21 d 接 种 番茄出现蕨叶症状 CMV-Fny ，CMV-Fny+T1sat 则在寄主植株则产生坏死症状 。 对 基 因 组 在 寄 主 上 积 2.4 T1satRNA CMV-Fny 累量的 影响 接种后和采 用 荧 光 定 量对种 不 同 7 d14 dPCR2 寄主中各个积累量进行相对定量 以CMV-FnyORFs， 明 确 对 基因组积累量的影响 发 现 T1satCMV-Fny。 携 带后 烟 草 和 番 茄 各 个积 累 量CMV-FnyT1sat，ORF 第 期5 603 朱丽萍等黄瓜花叶病毒卫星株系的功能研究.RNA T1 倍之间 图均抑制辅助上述结果表明 图影 响在 寄 主 上量则降低 因 此6.3,6A, 。,T1sat ,6, 。 T1satCMV-Fny 病毒在烟草和番茄基因组的积累量 但 在 番 茄 寄 主 ，症状反应与病毒本身的 基因组含量的高低无直接 关系的株系和株系序列 。 CMVY-satRNA D-satRNA 中病毒基因组含量受到 抑制效应更明显 接 种 后。 研 究 表 明 致 死 区 位 于 端 区 域 该 区 域 核 ，3′ 150 nt ，种寄主中病毒各个含 量 均 上 升 在 烟 草 ，，14 d2ORF 苷酸高度保 守 稍有碱基变化就影响卫星在 番 ，RNA和番茄寄主 中 同 样 表 现 对基 因 组 积 ，T1satCMV-Fny,2，8,茄上的表型 在番茄上坏死反应可能因此。 ，T1sat 累量抑制效应 但比在接种后抑制效应弱，7 d ,19, 图携带后各个 在烟草中 是 由 其 本 身 结 构 所 决 定 发 现引 起,6B, 。 ，CMV-FnyT1sat。Wang Y-sat 含 量 分 别 为 的 、、、在番茄上症状反应 其 原 因 是 因 为 ORF CMV-Fny 62.5% 54.0% 69.0% CMV， Y-satRNA 自 身产生小分子干扰性 RNA ,Small interfering 和 对 在 番 茄 寄 主 中 ,，51.1%61.7%T1satCMV-Fny1a 同番茄中转录因子相结合 抑 制 了 番 RNA，siRNA,， ，，和 的 含 量的抑制效应分别为 ,、、2a2b3aCP2.12.5 茄相关基因的 表 达 影响寄主生长发育从而使得番 ， 和 倍 基 因 组 定 量 分 析 结 果 表 2.5、2.9、2.82.4。 CM V 茄表现相应症状 与共 本研究中发现。 T1satCMV-Fny明减轻在烟草上的症状可能是由于 ,T1satCMV-Fny 同接种于番茄中所引起坏死症状 是否 与具 有 ，Y-sat病 毒 各 个基因含量降低引起 而同 样 是 降 低 , T1sat 相同作用机制有待于进一步的研究 。 在烟草上的症状反应 但其症状反而加 CMV-Fny， 重因此卫星影响症状反应与病毒本身的 ，RNACMV 基因组含量高低无直接关系 。参考文献 , SimonA E，Roossinck M J and Ha velda Z. Plant virus ,1, satellite and defective interfering RNAs,new paradigms 讨论 3 for a new centur,y J,. Annual. Review.P hytopathology， 2004.42,415-37. 与卫星假重组 后 病毒在寄主植物中 CMVRNA， Garcia A F and P alukaitis P. Structure anfuncd tional ,2, 致病性往往受影响 减轻在烟草上症 。 T1satCMV-Fnyrelationships of satellite RNAs of cucumberos amic virus 状 图这 与 已 经 报道大多数卫星 对 调 ,J,. Current Topics Mic robiology Immunology， ,5,，RNACMV ,1，3，6，14,1999.239,37-63. 控方式相一致 番茄中 明显抑制辅助病 ,，T1satPalukaitis P and GarciAa F. Cucumoviruses ,J, . Ad- 毒 基 因 组 积 累 量 但 加 重 在 番 茄 中 症 状， CMV-Fny ,3, vanceV irus Research，2003.62,241-323. 图卫 星与进 行 假 重 组 引 这 与,, ， 5D-RNACMV-FnyRoossinck M J. Evolutionary history of cucumberos amic virus deduced ,15-17,,4, by phylogenetic analyses ,J,. Journal of 起番茄出现坏死症状相一致 大田自然感病样 。Virology，2002.76,3382-3387. 品转接于番茄中 并 不引起番茄产生坏死 ，CMV-T1Grieco F，La N C and Gallitelli D. Evolutionary dynam- 反应图仅仅引起寄主植物出现花叶症状 引起 ,2,，。 ics of cucumber omsaic virus satellite RNA during natu- ,5, ral epidemics in Italy,J,. Virology，1997.229,166-174. 番 茄 坏 死 反 应 与株系进行假重组 Y-satRNACMV-O ,,18 Gal-On A，Kaplan I and Palukaitis P. Differential effects烟 草 上 寄主症状反应同样表现为加重 而 ，，T1sat of satete RNA on thea ccumulaton of cucumber omsa- llii则表现为减轻在烟草中症状 这些结果表 CMV-Fny。 ,6, ic virus RNAs andthe ir encodedp roteins in tobacco vs 明与以报道大多数卫星番茄株系对辅助 ,T1satRNAzucchini squash w ith two s trains of CMV helper virus 病毒症状影响不一致 其可能是由于不具有功 ，T1sat,J,. Virology，1995.1,208,1,58,-66. 能区域 也可能是因为辅助病毒种类和寄主生长环 ，Co F，Fnett-Siaer M M，Papanice M A and Gateilliilllilli ,,13-境条件等其它因素所引起 。 D. Analysis of mechanismis nvo lved in the Cucumber ,7, 减 轻 在烟草上症状并且 T1sat CMV-Fny CMV- mosaic virus satellite RNA-mediated transgenresicis - ,12,tancei n tomato plants ,J ,. Molecular Plant Microbe In- 的各个基因的积累量都降低 图等发 ,, 。Fny6Liao teract，2004.17,1,98,-108. 现减 轻在烟草上的症状 是 由 于 该 Rs-satCMV-Fny， Rodriguez A G and Roossinck M J. Srtuctural analysis of 卫 星主 要 降 低 基因的含量而抑制病毒在寄 RNA2b a necrogenic stra in of cucumber osmaic cucumovirus 主的基因组含量 从而减轻辅助 病 毒 的 症 状 而 本 ，,,8, satete RNA in panta,J,. Vroogy，1997.236,1,15,5 llilil-研究中的对基因的影响效应与其它个基因T1sat2b4 166. 相比较无明显 差 异 因 此降 低的 在 寄 ，T1satCMV-FnyBernal J J and GarcAia F. Analysis of thei n vitro sec- 主中的含量与作用机制不同 加重Rs-sat。 T1satCMV- ,9, 而各个基因组的含 在番茄寄主上的症状反应 Fny， ondary structureof cucumber mosaic virus satelliteRNA 2005.86,8,2359,-2369. ,J,. RNA，1997.3,9,1052,-1067. Xu P，Blancaflor E B and RoossinckM J. In spite of ,15, Qin Y，Chen J S，and Jin B. The effects of a satellite induced multiple defense response，tomatos plantsi n- ,10, RNA of Cucumberm osaic virus onits helperviru s,J,. fected with cucumber mosaic virus and D satellite Acta Phytopathologica ，Si2005.35n ,2,12,9-1331 ,in RNA succumb to systemic necrosis ,J,. Molecular Chinesewith Englishabstrac ,t. Plant-Microbe Interaction，2003.16,6,467,-476. Yan Z Y and WangH L. Editedby Ausubel F. M，Bu-Xu P and Roossinck M J. Cucumber mosaic virus D ,11, ,16, lent R，Kingston R.E ,U.S.A,.Short Protocols Molecular satellite RNA-induced programmed cell deathin toma- Biolog,yM,1998.BeiJin，,gScience Press. to,J,. PlantCel l，2000.12,1079-1092. Liao Q S，Zhu L P，Du Z Y，Zeng R and Chen J S. Xu P，Rogers S J and Roossinck M J. Expression of a n- Satellite RNA-mediated reductionof cucumber mosaic ,12, ,17, tiapoptotic genesbcl -xL and ced-9 in tomato enhances virus genomic RNAs accumulation in Nicotiana tolerance to viral -induced necrosis and abiotic stress tabacum relatedto 2b gene , J,. Acta Biochimica Bi-o ,J,. Proceeding National Academic Science U S A， physica Sinic，2007.a 39,3,217,-223. 2004.101,44,15805,-1581. Feng JL ，Chen S N，Chen X N，Tang X S and Chen J Masuta C and Takanami Y. Determinationof sequence S. Quantitative determination of cucumber mosaicvirus ,13, ,18, and structural requirementsfor pathogenicityof a cu- genome RNAs in virions by real- time reverse tra-n cumber mosaicvirus satellite RNA ,Y-satRNA, ,J,. scription polymerase chain reaction ,J,. Acta Biochim- PlantCel l，1989.1,1165-1173. ica Biophysica Sinic，2006.3a8,10,669,-676. WangM B，Bian X Y，Wu L M，Liu L X and Wate-r Yamaguchi N，Seshimo Y，Yoshimoto E，Ahn H I，Ryu house PM. On the role of RNA silencing in the ,19, K H，Choi J K and MasutaC. Genetic mappingof the pathogenicityand evolutionof viroids and viral sate-l ,14, compatibility betweenlily a isolate of Cucumbermos -a lites ,J,. Proceeding National Academic SciencesU S ic virus and a satellite RNA ,J,. Journal of Virology， A，2004.101,9,3275,-3280. 上接第 页,576 , 赵 平 周 秀 骥 一次华南暴雨的中尺度结构及复 孙 健 ,8, ，，. 参考文献 , 杂 地 形 的 影 响 气 象 学 报 ,J,.，2002，60,3,333,-342. 王 安 宇 杨 兆 礼 等 台风暴雨的研究进展 李 江 南 ,1, ，，，.,J,. 热 带 气 象 学 报 增 刊 对流参数在强对流天气潜势预 测 中 的 作 用 刘 玉 玲，2003，,152-159. ,9, .,J,. 气 象 科 技 ，2003，31,3,147,-151. 于 玉 斌 非 地 转 湿 矢量及其在华北特大台风 姚 秀 萍 ,2, ，.Q 刘 健 文 高 守 亭动力和能量参数在强对流天 李 耀 东 ,10, ，，.暴 雨 中 的 应 用 气 象 学 报 ,J,.，2000，58,4,436,-446. 气 预报中的应用研究 气 象 学 报 ,J,. ，2004，62 ,4, ,广 东 台 风 特 大 暴 雨 预 报 贺 忠 气 象 李 献 州 ,3, ， . ,J,. ， 401-409. 1995，21,8,17,-22. 强对流天气短期实时预报及 胡 富 泉 郭 敏 周 君 群 ,11, ， ， . 钮 学 新 李 慧 武 华东台风降水预报的一种集 贡 九 鼎 ,4, ，，. 特 型 法 高 原 气 象 θse,J,.，1997，16,4,440,-445. 成 大 气 科 学 ,J,.，1995，19,1,101,-110. 黄 姚 钦 炎 利 军 台风倒槽局地性强降雨分析 陈 小 芸 ,12, Johns R. H.，Doswell ? C. A.，Severe Local Storms ,5, ，，. 气 象 科 技 Forecasting. Wea. Forecastin，199g2，7,4,588,-612 ,J,.，2004，32,2,71,-75. ,13, Hart J. A，Korotky W. D. The SHARP Workstation- 沈 桐 立 沈 新 勇 碧 利 斯 台风暴雨物理量吴 启 树 ,6, ，，.“” 1.50. A skew T, hodograph analysis and research pr-o 场 诊 断 分 析 海 洋 预 报 ,J,.，2005，22,2,59,-66. gram for the IBM and compatible PC. User's manual. 梅 雨 锋 中 大 振幅重力波的活动及其与环境流 孙 淑 清,7, . NOAA , NWS Forecast office. Charlesto，nM V， 场 的 关 系 大 气 科 学 ,J,.，1990，14,2,163,-172. 1991，62.