HPLC测定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含量

HPLC测定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含量 HPLC测定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含 量 ? 920? 第22卷第9期 2O09年9月 医学研究生 J0urnal0fMedicalP0stgraduates V0j.22N0.9 Sep.2009 ? 论着? HPLC测定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含量 刘志刚,颜仁梁,梁达,韩丽萍,赵树进 (1.广州军区广州总医院药学部,广东广州51o0l0;2.广州中医药大学2O08级博士班,广东广州 5】0405;3.广东食品药品职业学院中药与生物系,广东广州510520;4.广州中医药大学,广东广 州510405) 摘要:目的:补肾壮骨颗粒为我院院内制剂,淫羊藿是方中君药.文中采用HPLc建立补肾壮骨颗粒中淫羊藿 苷含量的测定 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 .方法:采用HPLc法,色谱柱:AgilentHc一18(150mm×4.6mm,5m),柱温:30,以乙 腈一水(3O:7O)为流动相,流速为1.Oml/min,检测波长27Onm,测定了3批补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含量.结 果:在HPLc色谱中,淫羊藿l苷可与其他成分分离,且在O.0962,O.6734g范闹内与峰面积呈良好的线性关系, r=1(P<0.0o1),样品平均同收率为94.4%,RsD为1.83%(n=6).结论:该法分离效果 好,分析快速,确, 灵敏度高,重现性好,可刚于补肾壮骨颗粒巾淫羊藿苷的含量测定. 关键词:补肾壮骨颗粒;淫羊藿苷;含量测定 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1008-8l99(2()(】9)0992O3 MeasurementOfthec0ntentOfIcarninJ}l聆ZHn,ggHGranulabyHPLC LIUZhi—gang,YANRen一?ang,LIANGDa,HANLi—ping',ZHA0Shu—jin' (1.G『上r上0MGene,ufpnz0厂Gu.,.,2of0),egon,GM0,2鲁05l00l0,GMn,do,, (n0;2.Docornf(.凡d(z0escf.o厂Gr0de2008,Gr上,gz0"巳ne,如y0厂c,G"?,Il2o" 510405,GMnngng,nr上;3.G『上r上如ngoDr%c0n0ZCb,G.,oM5l0520, G『上nng,n;4.GM?o0厂,GM鲫^oM510405,Gu0dong,rz) Abstract:l[61c矗l,P:Bs^en27zMr上 72ggMGI.anulaisamedicinalpreparati0nmadeinGuangzh0uGen- eI.alH0spital,withHer1)Epimediiasthemainingredient.Theaimofthisstudvistoestablisha method f0rmeasuringthec0ntent0fIcariininBenZu0,鲁管『上Gmnulabyhighpe— _0rmance1iquidchr()mat0g- raphy(HPLC).fod:ThI.eebatches0f日nen『上?n譬"GranulaweI? measuredf0rthecontent 0fIcariinbyHPLCwithanAlentHC一18(150mm× 4.6mm,5m)c0Iumnatthec0lumntempe卜 ature0f30?,acetonitrile.water(30:70)asthem0bilephaseandthedetectionwavelengthat2 70nm. 缸:Icarjjncou1dbeis0latedfrommeothercomponents,andshowedago0dlinearrela ,jonshipwith thepeakareaattherange0f0.0962— 0.6734g,r=1(P<O.001).Theaveragerec0very0fIcar- iinwas94.4%(RSD:1.83%,n=6).C,lc:Thismeth0dissensitive,accurate.reproduc. ible,specincandemcientfl0rthemeasuI?ment0fthecontent0fBMen.;0凡MGranula. KeywOrds:senZn,zguGranula;Icariin;C0ntentmeasurement 0引言 补肾壮骨颗粒是由淫羊藿,山茱萸,骨碎补等多 收稿日期 基金项目 作者简介 通讯作者 味中药制成的复方制剂,具有补肾填精,健脾生髓的 功效,主治原发性骨质疏松症.淫羊藿苷为淫羊藿药 材主要活性成分,也是质量控制常用的指标成分. 20o8.?一03;修订日期:20o9.05—18 全军"_卜一五"军队中医药研发推广专项课题基金资助项目(批准号:2006062O05) 刘志刚(1976一),男,河南汤阴人,主管药师,医学硕士,从事中药化学,分析学研究. 韩丽萍(1958一),女,河北石家庄人,副主任药师,医学硕士,从事中药新药,质量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 研究.E—nail:hanliping@163.c0m 第9期刘志刚,等HPLC测定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含量?921? 淫羊藿苷的含量测定方法主要有TLC.荧光分光光度 法和HPLc法等,本研究采用HPLC法测定补 肾壮骨颗粒中的淫羊藿苷含量. 1材料和方法 1.1仪器与试药waters高效液相仪:2487双通 道紫外检测器,Breeze色谱工作站;德国Sartorius— BP21lD型电子天平(精度为十万分之一).淫羊藿 苷对照品(中国药品生物制品检定所,ll0737— 20040414);补肾壮骨颗粒(自制,071201,0802l4, 0805l5);乙腈(色谱纯)为sIGMA产品;其余化学 试剂均为分析纯,水为重蒸水. 1.2淫羊藿苷含量测定 1.2.1色谱条件和系统适用性试验色谱柱:Agi. 1entHC—l8(150mm×4.6mm,5m);流动相:乙 腈一水(30:70);柱温:30?;流速:1.0ml/mi";检测波 长为270nm,进样10l. 1.2.2溶液的制备?对照品溶液:称取淫羊藿苷 对照品适量,精密称定为13.8mg,置50ml量瓶,加 甲醇溶解稀释至刻度,精密吸取2,20ml量瓶,加 甲醇稀释至刻度,得每1ml含0.0276mg的淫羊藿 苷对照品溶液.?供试品溶液:精密称取补肾壮骨 颗粒500mg,置于50ml的量瓶中,加30ml甲醇浸 泡120min,超声30min,放冷至室温,以甲醇定容至 刻度.滤过,精密吸取续滤液25ml置蒸发皿中,水 浴蒸干,残渣用10ml水溶解,置聚酰胺层析柱,用 蒸馏水60ml洗脱,水洗液弃去,用95%乙醇80ml 洗脱,收集醇洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解,定量转 移至10ml量瓶中并定容,过0.22m微孑L滤膜,即 得供试品溶液.?阴性对照液:取处方缺淫羊藿各 药材,按补肾壮骨颗粒生产工艺制备缺淫羊藿阴性 对照样品,取缺淫羊藿阴性对照样品适量,同供试品 溶液制备方法制备阴性对照液. 1.2.3专属性试验取对照品溶液,阴性对照溶液 及供试品溶液分别进样10l,记录色谱图. 1.2.4线性关系考察称取淫羊藿苷对照品适量, 精密称定9.62mg,置100ml量瓶,加甲醇溶解得每 1ml含O.0962mg的淫羊藿苷对照品溶液.精密吸 取1,2,3,4,5,6,7ml对照品溶液,分别置10ml量 瓶,加甲醇稀释至刻度,得淫羊藿苷对照品系列浓度 溶液.分别精密吸取10l注入液相色谱仪,记录峰 面积,以峰面积Y为纵坐标,淫羊藿苷进样量(g) 为横坐标,以sPss软件(版本13.0)进行线性回归. 1.2.5精密度试验精密吸取供试品溶液l0l, 在上述色谱条件下,重复进样6次,以峰面积A计 算RSD. 1.2.6稳定性试验精密吸取供试品溶液10l, 分别在0,1,2,3,4,5,6h进样,按上述色谱条件测 定峰面积A,计算RsD. 1.2.7重复性试验取本品同一批号样品(cr7l201) 6份,按供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测 定,计算淫羊藿苷平均含量. 1.2.8加样回收率试验取已知含量的补肾壮骨 颗粒适量(07l201)约250mg,精密称定,共计6份, 分别加入0.0488mg/ml的淫羊藿苷对照品5ml,加 25ml甲醇浸泡120min,同供试品溶液的制备方法 制备,进样10l,依法测定,并计算平均加样回收率 及RSD. 1.2.9样品含量测定取补肾壮骨颗粒(07l20l, 080214,O805l5),照1.2.2项下供试品溶液制备方 法制备供试品溶液,照1.2.2项下对照品溶液制备 方法制备对照,分别进样10l,记录峰面积,计算淫 羊藿苷的含量. 2结果 2.1系统适用性试验及专属性试验在该液相条 件下测试,淫羊藿苷的保留时间为l0.6min.理论 塔板数以淫羊藿苷计不低于2000.阴性样品对淫 羊藿苷的测定无干扰,见图l. 2.04o6oo8:00l?li.0000 2604O0600&00l0OOl2O0l4O0 2.?40o6008o010?l2O0l4OO t/min 图1供试品溶液HPLC色谱图 Figur?1HighpeIf0rrnanceliquidchr0matogramsofthesamples A:对照品溶液;B:阴性对照溶液;c:供试品溶液;l:淫羊藿苷 2.2线性关系考察回归方程为Y=2138.1x一 6.414,r=1(P<0.001),结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,淫羊藿苷在 0.O962,0.6734g范围内呈良好的线性关系. ? 922?医学研究生2009年9月第22卷 2.3精密度试验重复进样6次,以峰面积A计 算RsD=0.90%,表明本实验精密度良好. 2.4稳定性试验在考察的6h内,以峰面积A计 算RSD=2.79%,说明样品溶液中得淫羊藿苷在6h 内稳定,可满足测定的需要. 2.5重复性试验取本品同一批号样品(071201) 6份,依法测定,计算淫羊藿苷平均含量为1.1746 mg,RsD=1.60%,结果表明本方法具有较好的重 现性. 2.6加样回收率试验结果见表l,平均加样回收 率为94.42%,RsD=1.83%,表明本法具有较好的 加样回收率. 表1淫羊藿苷加样回收率试验结果(n=6) T-aI】lelRec0veryofIcariin(n=6) 平均回收率RsD (%)(%) 2.7样品含量测定3批次补.肾壮骨颗粒中淫羊 藿苷含量接近,详见表2. 表2样品含量测定结果 Table2Icainc0ntentsjnthethI.eebatchesofsamp1es 3讨论 根据波长扫描图可知,淫羊藿苷在206nm和 270nm波长处都有吸收峰,由于206nm处杂质吸收 峰较多,且文献多采用270nm为检测波长,固本实 验选择波长270nm为检测波长.实验结果表明在 270nm处检测灵敏度高,杂质吸收峰少,干扰较小, 结果理想. 补肾壮骨颗粒由山茱萸,骨碎补,淫羊藿等药材 制成,在溶剂提取淫羊藿苷的同时,也提取出大量的 杂质和其他成分,无法直接进行色谱测定,必须对提 取物进行必要的前处理.淫羊藿苷为黄酮苷类化合 物,可溶于水,甲醇,乙醇等,可被聚酰胺颗粒吸附. 故在供试品溶液的制备过程中参考有关文献,分别 选用甲醇和稀乙醇为提取溶媒进行试验,结果表明, 无论是以甲醇还是以稀乙醇提取,均能使淫羊藿 苷提取完全,但以甲醇为溶媒制备的溶液中杂质峰 较少,基线平稳,故选择以甲醇为溶媒制备供试品 溶液. 经试验确定用聚酰胺柱进行净化处理步骤,先 以水洗脱至无颜色,继以95%乙醇洗脱,收集95% 乙醇洗脱液80ml,进行HPLC测定,在该纯化条件 下,可去除大量杂质,淫羊藿苷洗脱完全,并能达到 基线分离,无杂质峰干扰.取水洗脱部分及80ml 之后的乙醇洗脱部分,进行HPLc测定,均不含淫羊 藿苷. 由表2结果可知,3批次补肾壮骨颗粒中淫羊 藿苷含量接近,说明补肾壮骨颗粒的制备工艺比较 稳定,制剂质量可控性高.根据3批次测定结果,暂 定补.肾壮骨颗粒中淫羊藿苷含量不得少于1.0mg/g (以干燥品计),本研究拟收集更多产地,批次的淫 羊藿药材进行生产,根据更大规模的试验结果以确 定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷含量限度.HPLc法测 定补肾壮骨颗粒中淫羊藿苷的含量,可以排除干扰, 得到较好分离效果,直接采用色谱峰面积定量,结果 准确,且方法简单,重现性较好,便于推广. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和冈药典(一部)[M].北京:化 学T业出版社,2005:229. 杨广德,冯省贤,岐琳,等.薄层色谱?荧光分光光度法测 定淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量[J].天然产物研究与开发, 2002,l4(3):ll—l3. 潘苏华,张丽.雪哈虫草胶囊中淫羊藿苷的含量测定[J]. 江苏中医药,2008,4O(2):63-64. 姜宁,刘晓鹏.淫羊藿中淫羊藿苷的快速提取及测定研究 [J].中华中医药杂志,2oo8,23(1):64_66. 张华峰,高翔,卢大炎,等.HPLc法同时测定淫羊藿中朝 藿定A,B,c与淫羊藿苷的含量[J].分析测试,2007,26 (2):198—2叭. 柯桂萍,程葵.高效液相色谱法测定甜梦胶囊中淫羊藿苷 的含量[J].医药导报,2【x】9,28(1):l07-l08. 孙媛媛,赵陆华,赵舒菡.HPLc法研究配伍对肾通颗粒中淫 羊藿苷溶出量的影响[J].中华中医药学刊,2oo9,27(1): 2l2-214. (责任编辑:李风华;英文编辑:罗永合) 嫜一呻加"船郾=二一%卯舛蛆 一研m一 旭嘲一 m一00i0 槌一矾麟删E一mmOn H一踮卵一m弧mm 1J1;j1j