免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D

免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D 免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D 【摘 要】探讨免疫比浊法和免疫荧光定量法测定d-二聚体的可行性以及在临床的应用价值。 在stago血凝 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪上采用免疫比浊法测定d-二聚体，在美国博适triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定d-二聚体，对两种不同方法测定d-二聚体进行比较。试验数据表明:免疫比浊法测定d-二聚体的重复性好于免疫荧光定量法;两种方法测定d-二聚体在线性范围、灵敏度、抗干扰能力接近，试剂稳定性均能保存一年;美国博适triage检测仪的免疫荧光定量法使用方便，是一种准确、简捷的测定方法，适用于临床的急诊心肺功能五联检验;stago血凝分析仪的免疫比浊法定量检测d-二聚体含量方便、快捷，敏感性高，易在大多数医院普遍推广 【关键词】二聚体;血栓形成;免疫荧光定量法 【中图分类号】r446 【文献标识码】a 【文章编号】1004—7484(2013)10—0074—02 d-二聚体(d-dimer，d-d) 是纤维蛋白单体经活化因子xiii交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，d-二聚体就会升高。其对静脉血栓形成高度敏感，在排除静脉血栓形成的诊断中具有极其重要的价值。另外，d-d在心血管疾病、dic、恶性肿瘤等疾病也有明显变化，足反映疾病严重程度、发展变化、以及疗效和预后的有用指标[1-2]在全血或血浆中，利用d-d的抗体可以很容易的检测到d-d含量。已建立了多种有价值 的d-d的检测方法[3]。但临床上迫切需要一种取样简单、操作方便、时间节约、结果准确的d-d测定方法。其中临床实验室常规检测方法是免疫比浊法。笔者采用丽水中心医院检验科2种测定d-d的方法并加以对照分析，为临床采用正确的d-d检测方法提供依据，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本:样本来源于丽水中心医院门诊患者和病房患者2012年6月至12月收集的80例血清标本(其中无溶血、黄疸、乳糜的正常人血浆60例，无溶血、黄疸、乳糜的d-二聚体高值血20例，浓度在8,16μg/ml之间)。仪器采用法国stago血凝分析仪;美国博适triage检测仪。 1.2 试剂:stago公司提供的免疫比浊法所用试剂、定标液和质控液;免疫荧光定量法所用试剂为杭州丽珠医疗器械有限公司生产。 1.3 方法:d-d测定在法国stago血凝分析仪上采用免疫比浊法，在美国博适triage检测仪上采用免疫荧光定量法 。两种方法均按照试剂盒说明书、仪器说明书来设置相关参数进行测定。 1.4 统计学处理:应用spss20.0统计学软件，对所测有关精密度的数据进行正态分布检验，用均数?标准差(x?s)表示，进行成组t检验，对回收率进行卡方检验 。 2 结果 2.1 线性与灵敏度:取d-d配制浓度为6.0μg/mld-二聚体标准液，用生理盐水稀释成5种不同浓度的标准液(0.25，0.5，1.0，2.0， 3.0，4.0)。分别用免疫比浊法和免疫荧光定量法测定d-d，进行线性试验。结果表明，免疫比浊法测定d-d，回归方程为y=0.024x+0.054，r=0.9992，线性关系良好。线性范围为0.22,4μg/ml。免疫荧光定量法测定d-d，线性范围为0.1,5μg/ml，回归方程为y=0.024 x+0.046，r=0.9996。在低于4μg/ml范围内两种方法测定d-d的线性范围接近。免疫比浊法的灵敏度为0.22μg/ml，免疫荧光定量法的灵敏度为0.1μg/ml。如需检测更高浓度的血浆d-d水平，则需对血浆标本进行预稀释。 2.2 精密度:将患者血浆配制为中、低2种不同浓度，各测20次。在stago血凝分析仪上采用免疫比浊法测定d-d.(d-d浓度在0.55?0.05μg/ml的cv为8.8%，d-d浓度在1.75μg/ml的cv值为5.0%)在美国博适triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定d-d(d-d浓度在0.68?0.07μg/ml的cv为10.8%，d-d浓度在1.80?0.11μg/ml的cv值为6.0%)。免疫比浊法的精密度优于免疫荧光定量法，两种检测方法在低、中浓度比较中有显著性统计学意义。结果见表1. 2.3 干扰试验:在体外向正常人血浆中加入不同浓度胆红素、脂肪乳、血红蛋白。根据加入干扰物质前后的测定值判断干扰因素的影响结果。当加入的最高浓度为血红蛋白0.05)。 2.5 试剂稳定性试验 将试剂放置4?冰箱1y，每月抽检，检测d-d正常水平与高值水平。并将试剂置室温22?，7d，同样检测d-d正常水平与高值水平。结果显示免疫比浊法法和免疫荧光定量法所用 试剂在4?环境能放置1y，在室温条件下可放置7d。其检测性能未见改变。 3 讨论 d-二聚体是交联纤维蛋白降解的特异性分子标志物， d-二聚体的检测具有非常的临床意义。 在继发性纤维蛋白溶解功能亢进是常呈现阳性或增高，如弥漫性血管内凝血、肾脏疾病、高凝状态、器官移植排斥反应、溶栓治疗等。d-二聚体在孕产妇的检测中也尤其重要，李帅，吕时铭，汤杰英在“浙江地区汉族孕产妇d.二聚体参考区间的建立及应用”中阐述个孕妇各期的参考区间，对预防孕妇dic具有非常重要的价值[4]。d-二聚体在消化道恶性肿瘤、肺癌、急性白血病等恶性肿瘤患者中的临床意义相继也有学者做过研究。所以检测血浆d-二聚体已成为判断血栓形成危险性直接而实用的方法。d-二聚体检测方法有免疫比浊法、免疫荧光定量法、胶乳凝集法、elisa双抗夹心法、胶体金免疫渗透试验等。然而d-二聚体检测方法不同，在临床应用中存在差异[5] ， 十分有必要进行方法比较和评价。本试验对科内检测d-d的2种方法研究比较:荧光免疫免疫荧光定量法相对于免疫比浊法法更为简便、快捷。且精密度、线性均较好。为笔者科内心肺功能五联检(肌红蛋白、bnp、ctni、ck-mb、d-d)的一个项目，对由于急性心肌梗死、心衰等心血管疾病引起的急性心肌塞、急性dic、肺栓死提供更快、更有价值的信息[6]。但由于价格较贵，对于非心血管疾病引起的急性dic、肺栓死，脑梗死、急性心肌梗 塞、肝硬化、肿瘤、急性非淋巴细胞白血病、败血症等疾病引起的血浆d-二聚体水平的变化stago血凝分析仪的免疫比浊法法是个较佳的选择。免疫比浊法通过不断研究和实验程序优化，通过对预稀释样本提高了检测线性范围至0,16μg/ml.[7]。且对免疫比浊法检测d-d的性能评价已较成熟[8-10]，而免疫荧光定量法检测d-d的性能评价研究较少，两种方法的比对分析也较少。所以免疫比浊法适合于大批量的筛查试验，而免疫荧光定量法测d-dd的检测方法有待进一步优化试验方法。 参考文献: [1] 张海燕，白岩松，李春盛.d-二聚体在急诊急性心血管疾病患者中的应用价值[j].中国医学院科学院学报，2011，33(1):92-95. [2] 张瑜，杨宁榕，王峰.晚期恶性肿瘤患者凝血功能及d-二聚体水平检测的临床意义[j].实用癌症杂志，2012，27(2):165-167. [3] 董怀平，综述，李庆敏.d一二聚体的研究进展[j].国际检验医学杂志，2006，27(12):1134-1135. [4] 李帅，吕时铭，汤杰英.浙江地区汉族孕产妇d-二聚体参考区间的建立及应用[j].中华检验医学杂志，2011，34(7):580-586. [5] 佟广辉，佟威威，温 峰. 不同定量检测d-二聚体方法的比较分析[j].山西医药杂志2012，41(6):609-610. [6] 陈小君，孟淑娟，杨凯. ctnt、ck-mb、fib和dd联合检测在急性心肌梗死中的诊断价值[j].国际检验医学杂志，2012，33(12):1440-1441. [7] 郑卫东，曾淑燕，免疫比浊法定量检测d-二聚体的实验程序优化及试剂价值[j].现在检验医学杂志2005，20(6):42-44. [8] 冯厚德，孙德华，郑磊. sysmex ca 7000全自动凝血仪进行性能评价[j].检验医学，2011，26(01):58-62. [9] 丁钰，郑春喜，李静.不同血凝分析仪的凝血项目校正及比对试验[j].医学检验与临床，2009，20(5):8-10. [10] 许小英，于海涛，周存敏.某型号全自动血凝分析仪的性能评价[j].国际检验医学杂志，2012，33(11):1361-1362，1369.