【2017年整理】与乳酸菌具有共生作用酵母菌培养基的优化
与乳酸菌具有共生作用酵母菌培养基的优化
摘要:以对乳酸菌 (LC5) 有促进作用的酵母菌 (YE4) 为研究对象，OD 值和活菌数为测定指标，筛选合适的培养基。通过对 5 种酵母菌常用培养基的初筛及二次筛选，确定在 YPD 培养基中 YE4 生长良好。以 YPD 培养基作为基础培养基，进一步利用单因素试验和正交试
0.4%，胰蛋验的设计方法对其进行优化，得出改良 YPD 培养基的最佳成分是大豆蛋白胨为
白胨为 0.4%，酵母浸提粉为 0.4%，蔗糖为 1.2%，蒸馏水为 100 mL。改良 YPD 培养基活菌计数测得的活菌数可达到 5.01?108CFU/mL，比 YPD 基础培养基高一个数量级;OD 值是 YPD 基础培养基的 1.06 倍。
关键词:酵母菌;培养基;优化
Optimization Medium of Yeast YE4 Having Symbiotic Function with Lactic Acid Bacteria
LC5
Abstract:Yeast (YE4) is taken as research object，which can promote the role of lactic acid bacteria (LC5)，and OD
600
and viable count are as determination of indicators to filter suitable medium of YE4.
By selecting from 5 mediums which the YE4 usually used，the result shows that the YE4 grows very well in YPD medium. So
YPD is selected as the base medium，
by using single factor experiment and orthogonal test design method to optimize it，and the best ingredients of the modified YPD are that:soy peptone 0.4%，tryptone 0.4%，yeast extract powder 0.4%，sucrose 1.2% and distilled water 100 mL. The
viable count of YE4 with modified YPD can reach 5.01?10
8
CFU/mL，which is more than basis medium one order of magnitude，also，the OD value is 1.06 times than the basis YPD medium.
Key words:yeast (YE4);medium;optimization
酵母菌是一种单细胞真核微生物
[1]
，是子囊菌、
担子菌等单细胞真菌的通称。多数酵母可以分离于
富含糖类的环境中，比如一些水果 (葡萄、苹果、
桃等) 或者植物分泌物 (如植物的叶子)
[2]
。比细
菌的单细胞个体要大得多，一般为 1~5 μm 或 5~
20 μm。酵母菌无鞭毛，不能游动。酵母菌的生殖
方式分为无性繁殖和有性繁殖两大类，其在有氧和 无氧的环境中都能生长，即酵母菌是兼性厌氧菌。 在有氧的情况下，它把糖分解成 CO
2
和水，且生长
较快;在缺氧的情况下，酵母菌把糖分解成酒精和 CO
2
。在现代工业中除了用于酿酒外，还用于甘油、 食用酵母、有机酸、酶制剂、石油脱蜡，以及饲料 等的生产
[3]
。酵母菌一般还能利用无机氮源或尿
素来合成蛋白质，已经成为目前最重要的单细胞蛋 白来源
[4]
。
在传统发酵乳制品中，乳酸菌与酵母菌作为益 生菌对产品的发酵过程发挥着主导作用。因此，乳 酸菌与酵母菌作为对人体有益的微生物，它们有着 相似的生长条件和营养需求，即共生基础。例如， 它们都能很好地利用糖来进行糖发酵。有研究表明 酵母泥中的大分子物质通过乙醇提取后，添加在合 成培养基上，可以缩短乳酸菌的迟滞期，增加乳酸 菌的数量，原因可能是酵母大分子物质能诱导乳酸 菌中氨基肽酶的合成，使氨基酸及小分子缩氨酸含 量增加，从而促进乳酸菌的生长;另外酒精发酵或 酵母自溶产生的吡喃甘露糖可以吸收中链脂肪酸， 解除其对乳酸菌的毒害作用，还可能增加乳酸菌的 α- 葡萄糖苷酶、β- 葡萄糖苷酶、N - 乙酰基 β- 表 1 L
9
(3
4
)正交试验因素与水平设计
葡萄糖脱水酶及肽酶的活性，使培养基的营养丰富， 间接地促进乳酸菌的生长
[5]
。
Gobbetti M 等人
[6]
在 MRS 培养基中，通过添加 4 种
不同碳源 (麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖) 来研究 2 株酵母菌与 2 株乳酸菌之间的相互作用。结果显
示，在添加了蔗糖的 MRS 培养基中双菌培养的乳酸 菌活菌数明显高于单菌培养的活菌数，笔者通过蔗 糖分解的动力学曲线分析其原因是酵母菌可以将蔗 糖分解为葡萄糖和果糖，为乳酸菌提供稳定的碳源。 此外，有些酿酒酵母的生理特性 (蛋白酶活性、 大分子物质生成) 及自溶量等，都可能对乳酸菌的
- 乳酸发酵起促进作用，因此添加酵 生长及苹果酸
母提取物对乳酸菌的生长和代谢活性有一定的促进 作用
[7]
，但关于这方面研究的资料很少。
刘敏敏等人
[8]
对内蒙古锡盟地区酸马奶中分离
出的 8 株乳酸菌和 7 株酵母菌，进行潜在共生菌的 筛选。在各自培养基中交互添加代谢物作为试验 组，以各自培养基中添加等量生理盐水作为对照， 分析比较稳定期的浊度值，结果发现乳酸菌 LC5 和 酵母菌 YE4 在脱脂乳培养基中共同培养和 2 者在各 自培养基中交互添加代谢物培养，都表明其具有相 互促进作用。
基于刘敏敏等人的试验，本试验对 5 种酵母菌 常用培养基进行初筛及二次筛选，确定 1 种作为基 础培养基。对该基础培养基进行优化，使培养基的 营养条件更有利于酵母菌 YE4 的生长，为进一步研 究对乳酸菌具有促生作用的酵母菌代谢产物的分离 纯化奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 菌种
酵母菌 YE4 是从内蒙古锡盟地区酸马奶中分离 而来、且与酸马奶中的 1 株乳酸菌有明显促进作用的 酵母菌，由内蒙古农业大学“内蒙古传统发酵乳制品 中乳酸菌和酵母菌互生机理的研究”课题组提供。 1.1.2 培养基
YPD 培养基
[9]
、豆芽汁培养基
[10]
、麦氏培养基
[11]
、
LB 培养基
[12]
、马铃薯培养基
[13]
。
1.1.3 试验仪器
SKP-01 型电热恒温培养箱，湖北省黄合恒丰医 疗器械有限公司产品;PL303 型电子天平，塞多利斯 科学仪器 (北京) 产品;2004 (C) T6 型新悦可见 分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司产品; SK-1 型快速混匀器，常州国华电器有限公司产品; HIRAYAMA 型立式高压蒸汽灭菌锅，华粤企业集团 有限公司产品;BCN-1360 型微生物洁净工作台，哈 尔滨市东联电子技术开发有限公司北京分公司产品。 1.2 试验方法
1.2.1 菌种的活化
将 YE4 酵母菌冻干粉用接菌环接到 YPD 液体培 养基中，30 ?恒温培养 30 h，活化 2 代后以 3%接 种量分别接种于相应的培养基中，30 ?培养 30 h 后 测定菌体生长情况。
1.2.2 基础培养基筛选
(1) 基础培养基的初筛。以活菌计数、OD 值以
及 pH 值为测定指标，对马铃薯、豆芽汁、YPD、LB与麦氏 5 种常用的酵母菌培养基进行筛选，选出 3 种生长情况较好的培养基进行二次筛选。 (2) 基础培养基的二次筛选。对初筛得出的 3 种培养基进行二次筛选，测定指标同上，确定 1 种 作为基础培养基。
1.2.3 基础培养基的优化
(1) 基础培养基主要成分的单因素试验。在其 他成分不变的情况下，分别采用各种不同的碳源、 氮源及生长因子取代基础培养基中相应成分，配制 培养基，接种培养，依据 OD 值确定碳源、氮源及生 长因子的成分，接种量为 3%，30 ?培养 30 h，以 YPD 基础培养基为对照。
(2) 基础培养基主要成分使用量的单因素试验。 在单因素试验对 YPD 基础培养基的碳源、氮源以及 生长因子成分确定的基础上，对培养基中各种营养 成分的使用量进行确定，当改变某一种成分使用量 时培养基中其他成分的使用量均不改变。培养条件 同上。
(3) 基础培养基主要营养因素的正交试验。在 单因素试验的基础上，以最佳使用量为基准，上下 波动一定范围为选择依据，对基础培养基的成分进 行 L
9
(3
4
)正交试验设计，对其营养成分进行优化。 L
9
(3
4
)正交试验因素与水平设计见表 1。
1.2.4 改良 YPD 培养基与 YPD 培养基对比试验 在确定了改良 YPD 培养基的配方后，将改良 YPD 与 YPD 通过 OD 值、活菌数和 pH 值指标进行 对比，评价改良 YPD 培养基的改良效果。 1.2.5 测定指标
(1) OD 值。发酵培养液直接用可见光分光光度 计测定，其在波长 600 nm 处的光密度 (OD 600
)。
(2) 活菌计数。采用倍比稀释法，每样做 3 个 稀释度，每个稀释度做 2 个重复，酵母菌在 30 ?温 箱培养 30 h。取菌落数为 30~300 个的平板计数，取
大豆蛋白胨 + 胰蛋白胨 B 酵母粉 C 蔗糖 水平 A
1
2
3
0.4+0.4
0.5+0.5
0.6+0.6
0.4
0.5
0.6
0.8
1.0
1.2
/%
? 6?2013 年第 10 期
平均值，结果用每 1 mL 发酵液的菌落数表示。 (3) pH 值。采用 Sartorivts PB-10 pH 计测定，
记录
混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载
数据。
2 结果与分析
2.1 基础培养基的筛选
2.1.1 基础培养基的初筛
以活菌数和 OD 值为测定指标，对马铃薯、豆芽 汁、YPD、LB 与麦氏 5 种常用的酵母菌培养基进行 筛选。
不同培养基中酵母菌 YE4 的 OD 值、pH 值和活 菌数见表 2。
由表 2 可知，比较 5 种培养基的活菌数，YPD 最高，其活菌数为 3.68?10
7
CFU/mL，其次为马铃
薯培养基;活菌数最低的是豆芽汁培养基，活菌数 只有 6.43?10
6
CFU/mL;对数值比 YPD 低 0.75。对
于 5 种培养基的 OD 值，YPD 培养基明显优于其他 培养基，为 1.756?0.009。考虑到 pH 值对培养基的 影响，豆芽汁培养基的 pH 值最低为 3.31，可见该培 养基中的酸度太高，反而会抑制酵母菌的生长，使 得其活菌数较少。考虑到本试验以提高培养基中的 活菌数和 OD 值为目的，因此选择马铃薯、YPD 及 LB 培养基进行二次筛选，以确定是酵母菌 YE4 生长 的最近培养基。
2.1.2 基础培养基的二次筛选
继续用初步筛选出的 YPD、马铃薯、LB 3 种培
3 代后进行活菌计数。 养基培养酵母菌，活化
不同培养基中酵母菌 YE4 的 OD 值、pH 值和活 菌数见表 3。
由表 3 可知，比较 3 种培养基的活菌数，YPD 的最高，其活菌数为 4.38?10
7
CFU/mL，其次为马铃
薯培养基;活菌数最低的是 LB 培养基，活菌数只有 2.11?10
7
CFU/mL;比 YPD 低 2.27?10
7
CFU/mL。对
于 3 种培养基的 OD 值，YPD 培养基明显优于其他培 养基，为 1.796?0.005，且 pH 值接近与酵母菌生长 的最佳 pH 值。因此，选择 YPD 为酵母菌 YE4 生长 的基础培养基，并对其营养成分进行进一步的优化。 2.2 基础培养基中主要营养成分的单因素试验 2.2.1 碳源
以 YPD 基础培养基为对照，不改变其他系统的 成分和用量，用乳糖等糖类作为碳源代替葡萄糖。 接种量为 3%，30 ?培养 30 h，测定菌体的 OD 值。 碳源对酵母菌 YE4 菌体 OD 值的影响见图 1。 从图 1 可以看出，用葡萄糖及乳糖、乳糖、蔗
糖和麦芽糖 4 种碳源与 YPD 基础培养基中的葡萄糖 进行对比时，当蔗糖作为碳源时菌体密度显著高于 另外 3 种碳源，OD 值高达 1.932，比单糖葡萄糖的 OD 值高 0.108。因此，选择蔗糖作为最佳碳源。 2.2.2 氮源
以 YPD 基础培养基为对照，不改变其他系统的 成分和用量，只改变氮源中蛋白胨的成分，以胰蛋 白胨等蛋白胨类产品代替蛋白胨。培养条件同上。 氮源对酵母菌 YE4 菌体 OD 值的影响见图 2。 由图 2 可以看出，酵母菌 YE4 对大豆蛋白胨和胰 蛋白胨的利用需求显著高于对其他组的利用，OD 值 达到 1.823，是 YPD 基础培养基的 1.10 倍。胰蛋白 胨是一种动物蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶 消化，浓缩干燥而成，含有丰富的氮源、氨基酸等; 大豆蛋白胨是一种植物蛋白胨，其营养丰富，主要 成分为低分子肽和氨基酸，有利于酵母菌的生长、 繁殖。因此，选用大豆蛋白胨和胰蛋白胨作为培养 基的主要氮源。
2.2.3 生长因子
以 YPD 基础培养基为对照，不改变其他系统的 成分和用量，以牛肉膏等生长因子代替酵母浸提粉。 图 2 氮源对酵母菌 YE4 菌体 OD 值的影响 表 2 不同培养基中酵母菌 YE4 的 OD 值、pH 值和活菌数 培养基 OD 值 pH 值 活菌数 /CFU?mL
-1
马铃薯
豆芽汁
YPD
LB
麦氏
1.645?0.015
0.967?0.011
1.756?0.009
1.643?0.007
0.603?0.013
3.63
3.31
4.96
3.92
5.41
1.81?10
7
6.43?10
6
3.68?10
7
1.65?10
7
6.87?10
6
表 3 不同培养基中酵母菌 YE4 的 OD 值、pH 值和活菌数
培养基类型 OD 值 pH 值 活菌数 /CFU?mL
-1
马铃薯
YPD
LB
1.695?0.009 1.796?0.005 1.655?0.008 4.27
4.83
3.28
2.44?10
7
4.38?10
7
2.11?10
7
YE4 菌体 OD 值的影响 图 1 碳源对酵母菌
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
O
D
值
葡萄糖 + 乳糖 处理
乳糖蔗糖蔗糖 对照组
2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
0
O
D
值
处理
大豆蛋白胨 胰蛋白胨 大豆蛋白胨 +对照组 胰蛋白胨
王美霞，等:与乳酸菌具有共生作用酵母菌培养基的优化 ? 7?农产品加工(学刊) 2013 年第 10 期 培养条件同上。
生长因子对 YE4 菌体 OD 值的影响见图 3。 生长因子主要是调节微生物代谢活动的，是微 生物不可缺少的微量有机元素，包括各种氨基酸、 嘌呤、嘧啶、维生素等。由图 3 可知，酵母菌对基 础培养基中酵母浸提粉的利用高于其他组，OD 值高 达 1.902。因此，采用基础培养基中的酵母浸提粉作 为生长因子更有利于菌体生长。
2.3 基础培养基中成分使用量的单因素试验 在单因素试验对 YPD 基础培养基的碳源、氮源 以及生长因子成分确定的基础上，以 YPD 基础培养 基为对照，在其他条件不变的情况下依次改变基础 培养基中碳源、氮源及生长因子的使用量。接种量 为 3%，30 ?培养 30 h，测定各种成分在其不同使 用量下菌体的 OD 值。
YPD 培养基成分不同使用量培养 30 h 后酵母菌 YE4 的 OD 值见表 4。
由表 4 可知，使用单因素试验的设计方法对培 养基成分使用量的确定时，以 OD 值为测定指标，基 础 YPD 培养中各种成分的最佳使用量选择结果如 下:大豆蛋白胨为 0.5%，胰蛋白胨为 0.5%，且二者 的比例为 1?1，蔗糖为 1.0%，酵母粉为 0.5%。 2.4 基础培养基优化正交试验
在单因素试验研究的基础上，选取大豆蛋白胨 和胰蛋白胨、蔗糖、酵母浸提粉为培养基的 3 个因 素，以 OD 值为测定指标进行 L
9
(3
4
)正交试验分析。
以 OD 值为测定指标的正交试验结果与分析见 表 5，方差分析见表 6。
由表 5 可以看出，蔗糖、大豆蛋白胨和胰蛋白 胨及酵母浸提粉是酵母菌生长所需的主要营养成分， 按其对菌体影响的次序为 C (蔗糖) >A (大豆蛋白 胨 + 胰蛋白胨) >B (酵母浸提粉)，且 C 作为碳源对
培养基具有显著影响 (p<0.05)，而 A 和 B 则差异不
显著 (p>0.05)。比较 3 个因素不同水平下的组合，
发现 A
2
B
2
C
3
组合下菌体 YE4 的 OD 值最高为 1.970，
但正交试验结果显示最优组合应为 A 1
B
1
C
3
。上述正
交试验中没有此最优组合，因此需追加试验确定最
优组合酵母菌 YE4 的 OD 值，并将最优组合和正交
试验的最大值 A
2
B
2
C
3
进行比较。结果追加试验表明， 最优组合 A
1
B
1
C
3
的酵母菌 YE4 OD 值为 2.113? 0.021，比 A
2
B
2
C
3
组合 OD 值高 0.143，符合正交试 验结果。因此，可以确定改良酵母菌 YPD 培养基的
最佳组合为 A
1
B
1
C
3
，即大豆蛋白胨为 0.4%，胰蛋白
胨为 0.4%，酵母浸提粉为 0.4%，蔗糖为 1.2%，蒸馏 水为 100 mL。在改良过程中发现，酵母菌 YE4 对蔗 糖的利用远高于对其他单糖或单、双糖的利用，这 与 Gobbetti M 等人
[6]
的研究结果相符。
2.5 改良 YPD 培养基对比试验
通过单因素、正交试验的一系列优化，确定了 改良后 YPD 培养基的组成和用量。将改良 YPD 与 YPD 培养基进行对比试验。
对比试验结果见表 7。
结果表明，改良 YPD 培养基的 OD 值是 YPD 基 础培养基的 1.06 倍;活菌计数测得的活菌数可达到 5.01?10
8
CFU/mL，比 YPD 基础培养基高 1 个数量 图 3 生长因子对 YE4 菌体 OD 值的影响 2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
0
O
D
值
处理
牛肉膏 麦芽粉 豆芽汁对照组
表 4 YPD 培养基成分不同使用量培养 30 h 后 酵母菌 YE4 的 OD 值
大豆蛋白胨
+ 胰蛋白胨
/%
OD 值
蔗糖
/%
OD 值
酵母
浸提粉
/%
OD 值
0.2+0.2 0.3+0.3 0.4+0.4 0.5+0.5 0.6+0.6 1.327?0.012 1.416?0.072 1.526?0.032 1.734?0.017 1.330?0.007 0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.229?0.013 1.378?0.010 1.576?0.009 1.823?0.014 1.698?0.016 0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
1.301?0.008 1.411?0.011 1.580?0.018 1.807?0.009 1.714?0.019 表 5 以 OD 值为测定指标的正交试验结果与分析
试验号 A B pH 值 OD 值
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
1
1
2
2
2
3
3
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4.865 4.805 4.765 4.795 4.795 4.955 4.805 4.960 4.870 1.811?0.011 1.884?0.015 1.951?0.009 1.916?0.013 1.970?0.007 1.737?0.009 1.902?0.014 1.718?0.011 1.913?0.016 K
1
K
2
K
3
5.655 5.623 5.533 5.629 5.572
5.601 R 0.038 0.019
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
5.266 5.713 5.823 0.186 表 6 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 临界值 显著性
A
B
C
误差
0.002 0.058 0.005 0
2
2
2
2
2
58
5
19
19
19
*
? 8?2013 年第 10 期
级。因此，YPD 培养基的改良效果是明显的。
3 结论
(1) 对 5 种酵母菌培养基的初筛，发现 YPD 培
养基更加适合酵母菌 YE4 的生长，其活菌数可达到
3.68?10 7
CFU/mL，其次为马铃薯，再次为 LB 培养
基，因此选择马铃薯、YPD 及 LB 培养基进行二次筛
选，结果选择 YPD 为酵母菌 YE4 生长的基础培
养基。
(2) 在单因素试验的基础上，以最佳使用量为基
准，上下波动一定范围为选择依据，对基础培养基进
行正交试验设计，结果显示培养基中营养成分的最佳
组合为大豆蛋白胨 0.4%，胰蛋白胨 0.4%，酵母浸提
粉 0.4%，蔗糖 1.2%，蒸馏水 100 mL。
(3) 对改良的 YPD 培养基和基础培养基进行对
比，改良 YPD 培养基的 OD 值是 YPD 基础培养基的
1.06 倍;活菌计数测得的活菌数比 YPD 基础培养基
高 1 个数量级。因此，选择改良 YPD 培养基为酵母
菌的最佳生长培养基。
参考文献:
白晓婷. 酵母类产品在饲料中的研究与应用 [J] . 中国饲 料，2005 (2):8-10.
孙万儒. 酵母菌 [J] . 生物学通报，2007 (11):5-7. Adams A L， Harrjs B， Van H， et al. Effects of varying
forage types on milk production responses to whole cotton,
and yeast [J] . Dairy Sci，1995，78:573- seed，tallow，
581.
王凯军，秦人伟. 发酵工业废水处理 [M] . 北京:化学 工业出版社，2000:383-436.
Guilloux-Benatier M，Chassagne D. Comparison of compo, nents released by fermented or active dried yeasts after ag, ing on lees in a model wine [ J] . Journal of Agricultural
and Food Chemistry，2003，51 (3):746-751. Gobbetti M，Corsetti A，Rossi J. The sourdough microflora
interactions between lactic acid bacteria and yeasts:
metabolism if carbohydrates [ J] . Appl Microbiol Biotech, nol，1994，41:456-460.
Tendekayi H Gadagal，Bennie C. Volatile organic compounds
in naturally fermented milk and milk fermented using yeasts， lactic acid bacteria and their combinations as starter cul -
tures [J] . Food Technol. Biotechnol，2007，45 (2):195- 200.
刘敏敏，贺银凤. 酸马奶中具有潜在共生性乳酸菌和酵
母菌的筛选 [J] . 食品科学，2011 (11):255-259. 程雷，李梓，王军. 葡萄自然发酵过程中酵母菌的研
究 [J] . 中国食品学报，2010，10 (2):131-132. 杨家华，谢占玲，俞芳. 食用酵母菌生物特性的研究 [J] . 青海师范大学学报 (自然科学版)，2008 (1):57-60. 肖波，王彩梅，戚晓利. 一种高效的酵母菌培养基的设
计 [J] . 生物技术，2005，15 (2):50-52. 沈萍，范秀容，李广武. 微生物学试验 [M] . 第 3 版. 北 京:高等教育出版社，1999:690-692. 明儒成，封新平. 食品中酵母菌计数检验方法的改进 [J] .
中国卫生检验杂志，2007，17 (3):478-491. 表 7 对比试验结果
培养基 OD 值 活菌数 /CFU?mL
-1
pH 值
YPD
改良 YPD
1.845?0.014
1.952?0.003
4.70?10
7
5.01?10
8
4.78
4.65
[1]
[2]
提物和咪鲜胺处理效果且无显著差异，其 POD 活性 低于黄连水提物处理的柑橘。
3 结论与讨论
本试验结果表明，在温度 10 ?，湿度 90%条件 下黄连醇提物和黄连水提物处理能够有效降低柑橘 贮藏期间微生物的感染，从而减少了柑橘的腐烂与 霉变的发生，较好地保持果实原有的新鲜度与色泽， 食用风味较佳，保持了柑橘的感官评分，抑制了柑 橘的呼吸强度;延缓其贮藏后期可溶性固形物、VC、 酸、糖等营养物质含量的下降;可显著抑制贮藏期 间丙二醛含量的积累;降低了贮藏期间柑橘果胶酶 和过氧化物酶的活性。黄连醇提取物处理柑橘的效 果对比黄连水提取物的处理，其在柑橘采后防腐保 鲜方面表现出更好的效果，且与化学杀菌剂咪鲜胺 保鲜效果相近，为替代化学杀菌剂开发新型无害的 保鲜剂提供了新的方向。
参考文献:
张焱珍，潘俊，尚慧，等( 77 种植物提取物对植物病原 菌的生长抑制作用 [J] ( 天然产物研究与开发，2011， 23 (1):136-141(
成爱，孙辉，王呈玉，等( 6 种中草药水提物对黄瓜黑星 病菌抑菌活性的室内筛选 [J] ( 农药，2010，49 (6): 453-455，467(
李锡香. 新鲜果蔬的品质及其分析法 [M] . 北京: 中国农 业出版社，1994:251-255.
李合生( 植物生理生化实验原理和技术 [M] ( 北京:高 等教育出版社，2000:164-263(
寇晓虹，王文生，吴彩娥，等( 鲜枣采后、VC 含量与氧 化酶活性变化关系的研究 [J] ( 山西农业大学学报，
1):71-74. 2000，20 (
丘麒，罗建军，施楚新，等( 21 种植物提取物对 3 种柑 桔病原真菌抑菌活性的初步研究 [J] ( 安徽农业大学学 报，2008，35 (1):42-45(
方建雄，华雪增，刘愚. 贮藏期状况对苹果果胶、多聚 半乳糖醛酸酶变化的影响 [J] . 植物生理学报，1991， 17 (1):99-104.
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
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[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
[9]
[10]
[11]
[12]
[13]
王美霞，等:与乳酸菌具有共生作用酵母菌培养基的优化 ? 9?
屈光检查(初级)复习要点
38(房水折射率的正常值 一、眼屈光学知识
1( 眼屈光系统的基本组成 39(在简化眼中折射球面的正常位置 2( 静止时眼总屈光力的正常值 40(视网膜成像大小的计算 341( 模型眼的定义 (视角与物体距离的关系 4( 眼轴的定义 42(能动性远视的定义 5( 视轴的定义 43(远视眼主要临床表现 644( 眼调节的定义 (计算近视眼的远点 7( 眼静止状态的定义
8( 调节远点的定义 二、问诊与咨询 9( 正视眼远点的位置 1( 询问顾客的主要
内容
财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容
10(屈光不正的定义 2( 顾客验光的目的要求 11(调节范围的定义 3( 了解儿童戴镜史 12(正视眼的定义 4( 了解中、青年戴镜史 13(远视眼的定义 5( 了解老年戴镜史 14(近视眼的定义 6( 问诊的注意事项 15(全远视的基本组成 7( 常见问题的了解
近视眼依屈光成分的分类 ( 答问的注意事项 16(8
17(散光眼的定义 9( 常见商品知识咨询问题 18(
规则
编码规则下载淘宝规则下载天猫规则下载麻将竞赛规则pdf麻将竞赛规则pdf
散光眼依强主子午线方向的分类 10(回答咨询前的准备 19(屈光参差的定义 11(介绍商品的方法 20(眼屈光系统三对基点的名称 12(介绍商品的注意事项 21(眼屈光系统前焦距的正常值
22(外界物体在视网膜上的成像情况 三、屈光检查 23(简化眼的定义 1( 远视力表的检查距离 24(视角的定义 2( 近视力表的检查距离 25(眼调节状态 3( 视力表检查结果记录法 26(调节力的定义 4( 视力表的照明
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
27(调节幅度的定义 5( 角度计的调整方法 28(集合的定义 6( 目前可采用的视力表种类 29(近反射三联动的定义 7( 裸眼视力的检查标准 30(眼的屈光与调节的关系 8( 客观验光的基本方法 31(显性远视的定义 9( 近视眼成像的特点 32(近视眼依是否有调节因素参与的分类 10(远视眼成像的特点 33(规则散光眼依各经线屈光状态的分类 11(散光眼成像的特点 34(交替视症候的定义 12(放松睫状肌的最佳方法 35(角膜前面曲率半径的正常值 13(客观检影使用的基本工具 36(晶状体曲率半径的正常值 14(客观检影的环境要求 37(角膜折射率的正常值 15(检影时被检者的视标要求
18
16(试镜架的选择 56(裂隙片裂席的常用宽度 17(映光四要素名称 57(验光后试片的操作程序 18(映光为顺动时应加的镜片种类 58(试片时的注意事项 19(映光为逆动时应加的镜片种类 59(远视眼试片时的换片原则 20(检影结果的代表征象 60(马氏杆片的作用 21(观察映光四要素的四个方向 61(十字线片的作用 22(中和点的定义 62(针孔片的作用 23(工作距离与屈光结果的关系 63(同一散光眼在远近距离上测量结果的差异性
24(映光亮度与屈光不正的关系 64(老视与屈光状态的关系 25(映光速度与屈光不正的关系 65(阅读舒适与调节幅度的关系 26(映光形状与屈光不正的关系 66(决定视角大小的因素 27(检影最主要的标志映光名称 67(制作视力表的理论依据 28(检影镜的基本结构 68(检影时被检眼与检查眼的视轴夹角数值 29(普通镜片箱正球镜度数范围 69(验光法的分类 30(普通镜片箱负球镜度数范围 70(小瞳验光法的分类 31(普通镜片箱正柱镜度数范围 71(小瞳主觉验光法的分类 32(普通镜片箱负柱镜度数范围 72(小瞳主觉验光法的分类 33(调节幅度测量方法的种类 73(主客观相结合小瞳静态检影验光法 34(最小调节幅度计算
公式
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35(调节需求的计算方法 开具处方
1( 试戴不清楚的调整方法 36(老视验光的基础状态
2( 试戴调整的注意事项 37(测量调节近点视标的移动速度
3( 试戴时间的选择 38(大致出现老花的年龄
4( 瞳距测量的方法 39(老视的原因
5( 远用瞳距测量时被检者的视标选择 40(老视与远视的区别
6( 检查者与被检者的距离要求 41(老视的矫正方法
7( 视远视近瞳距的换算关系 42(用角度计对被检者所戴眼镜的检测内容
43(一致性映光的定义 8( 近用PD的视标选择 44(出现亮而快映光的屈光状态 9( 眼镜处方PD的定义
10(眼镜度数的表示方法 45(出现暗而慢映光的屈光状态
11(远视眼配镜处方的确定原则 46(出现椭圆映光的屈光状态
12(近视眼配镜处方的确定原则 47(出现圆形映光的屈光状态
13(屈光参差眼镜处方的确定原则 48(出现条状映光的屈光状态
14(处方内各缩略符号的含义 49(高度复性近散检影时的表现
50(复合远视散光检影时的表现 15(屈光检查的一般程序
16(影响试戴调试的因素 51(高度远散检影时的表现
17(对试戴不适应症状的处理方法 52(高度近散检影时的表现
18(高度散光眼的矫正原则 53(映光为顺动的屈光状态
19(轻度散光眼的矫正原则 54(映光为逆动的屈光状态
20(斜位散光的矫正原则55(裂隙片裂席宽度的理论依据
19
屈光检查(初级) 复习题 一、 选择题
1. 办事公道是指从业人员在进行职业活动时要做到( )
A.追求真理，坚持原则 B.有求必应，助人为乐
C.公私分明，一切平等 D.知人善任，提拔知己
2.企业创新要求员工努力做到()
A不能墨守成规，但也不能标新立异 B大胆地破除现有的结论，自创理论体系
C大胆地试大胆地闯，敢于提出新问题 D激发人的灵感，遏制冲动和情感 3 ()、晶状体、玻璃体等是眼球内容物
A房水 B角膜 C巩膜 D虹膜
4 两块或两块以上的各种眼用透镜的()叫做透镜的联合
A叠合 B密接 C叠合、密接 D叠合、连接 5 ( )眼球内腔和内容物构成眼球
A 眼内肌 B视神经 C 眼球壁 D 玻璃体
6 正常眼角膜外表面周边曲率半径逐渐增大，呈( )
A 球形弧面 B 椭圆形弧面 C 非球面形 D 球弧形
7 位于眼球后方5/6部分，质地兼任的乳白色不透明纤维组织是( )
A 视网膜 B 睫状体 C 巩膜 D 虹膜
8 ( )是角膜在炎症，感染，外伤等原因喜爱出现的不透明无定型白色疤痕。
A 干燥斑 B 混浊 C 白瘢 D 云翳
9 ( )组织包围着一个肉状隆起的组织，成为泪阜。
A 内眦部 B 外眦部 C 睑裂 D 睑缘
10 早期老年性核性白内障可使用( )提高视力。
A 近视镜 B 远视镜 C 散光镜 D 三棱镜
11 ( )是我国人眼球的突出度的一般平均值。
A 11.6毫米 B 12.6毫米 C 13.6毫米 D 14.6毫米 12 ( )是用光学方法测量活体角膜中央部厚度的正常值。
A 1毫米 B 0.8毫米 C 0.78毫米 D 0.52毫米 13 晶状体宛如洋葱，由外向内分为囊膜、前囊下皮，基质皮层和( )。
A 内皮 B 核层 C 带状纤维层 D 径线纤维层 14 由葡萄膜炎症、视网膜出血、外伤、肾炎、( )及年老等原因所致玻璃体混浊。
A 高度近视 B 高度远视 C 泪囊炎 D 角膜变性 15 ( )是用来表达透镜对光线曲折力大小的，在数值上等于透镜焦距的倒数。
A 顶焦点 B 顶焦度 C顶焦距 D 顶焦线
16 同轴位柱面镜的联合，其结果用( )的方法来获得。
A 代数和 B 代数差 C 代数 D 几何
17( )是指目标的动向与镜片平移方向一致。
A顺动 B逆动 C移位 D移心
18.三棱镜是组成一切球面透镜和柱面透镜的()
20
A最基本单位 B最小单位 C最基本的光学单位 D最基本的镜度单位 19 由顶相对的大小不同的三棱镜旋转所组成的透镜为()
A 正球面透镜 B负球面透镜 C正柱面透镜 D负柱面透镜 20.()是由底相对的大小不同的三棱镜单向排列所组成。
A正球面透镜 B负球面透镜 C正柱面透镜 D负柱面透镜
平行光线进入散光眼后，不能形成一个焦点，而形成()
A一交线 B二交线 C三交线 D一点与一交线
21 ()静止时曲率半径的正常值为10mm.
A角膜前面 B角膜后面 C晶状体前面 D晶状体后面 22 依据眼的光学常数所模拟的人眼屈光模型称( )
A 简化眼 B 模型眼 C 简略眼 D 简约眼 23正视眼的( )为无限远距离。
A近点 B远点 C 像点 D 结点
24 远离5米外物体发出的或反射的平行光线经眼屈光系统折射后能在( )上成一焦点，是
为正视眼。
A 角膜 B 晶状体 C 视网膜 D 脉络膜
25 ( )指当眼调节静止时，使平行光线经眼曲折后聚焦于视网膜后，外界物体在视网膜上
不能成清晰物像。
A 近视眼 B 远视眼 C散光眼 D正视眼
26 ( )指当眼调节静止时，使平行光线经眼曲折后聚焦于视网膜前，外界物体在视网膜上
不能成清晰物像。
A 正视眼 B近视眼 C远视眼 D散光眼
27()至透镜的距离为物距。
A像点 B物点 C焦点 D光点
28棱镜的()为两个平面相交的角。
A顶角 B棱 C底 D顶
29镜片的透光率越()，视物越清晰
A差 B高 C弱 D小
30 ( )曲率半径的正常值为7.7毫米
A 角膜前面 B 角膜后面 C玻璃体前面 D 晶状体后面 31 ( )为房水折射率的正常值。
A 1.336 B 1.376 C 1.406 D 1.437
32 与物体距离远近成反比的是( )。
A 视轴 B 视角 C 光轴 D 固定轴
33( )处是4.00屈光度近视眼的远点位置。
A 眼前12.5cm B 眼前25cm C 眼后12.5cm D 眼后25cm 34 由( )折射面构成的透明介质成为透镜
A 一个 B 两个 C 三个 D 四个
35发光点或会聚点在无穷远时，光束中的所有光线相互平行，称( )。
A 会聚光束 B 平行光束 C 像散光束 D 发散光束
21
36 从光源投向分界面上光线投射点之间的一段光线为 ( )。
A 反射光线 B入射光线 C折射光线 D法线
37 凹透镜能使平行光线发散，使光线好像是从透镜( )一点发出。
A 前 B后 C上 D下
38 镜架的金属材料有( )、镍合金、和贵金属三大类。
A 铝合金 B铁合金 C铜合金 D钢合金
39(镜架的非金属材料主要采用合成树脂为原材料，可分为( )和热固树脂两大类。
A可塑性 B热塑性 C柔软性 D耐磨性
40(锌白铜的性能特点是密度8.8、耐酸性、弹性好、成本低、易加工、( )呈铜绿色。
A易变性 B易生锈 C易断 D重量大
41(问诊要注意尊重顾客的( )，不要把验光师主观意向强加给顾客。
A客观要求 B客观意见 C主观要求 D主观判断 42(戴金属架皮肤过敏的人，如不考虑换材料应介绍( )。
A塑料架 B碳素架 C玳瑁架 D钛金属架
43(用肉眼观察患者眼外观一般应( )
A先右眼后左眼 B先左眼后右眼 C双眼同时检查 D以上都不对 44(近视力表检查时可采用( )
A自然光线 B人工照明 C白织灯 D自然光线或人工照明 45(焦度计零位矫正是指( )。
A目镜调整后如手轮刻度正对零位无须矫正。
B目镜调整后如手轮刻度正对—1.25无须矫正
C目镜调整后如手轮刻度正对+0.25无须矫正
D目镜调整后如手轮刻度正对—0.25无须矫正
46(球结膜检查时可发现()
A充血水肿 B青光眼 C白内障 D角膜炎
47视力表的照明标准应该是其表面照度不小于()
A200 LX B300 LX C400 LX D600 LX
48目前最常用的检影镜种类为( )
,点状光检影镜 ,带状光检影镜 ,环状光检影镜 ,多点状光检影镜 49(客观检影的暗室要求( )
A被检查者双眼能注视无限远 B被检查者双眼能注视2米远
C 被检查者双眼能注视1米远 D被检查者双眼能注视50厘米远 50(试镜架平面与镜腿的夹角约为( )左右。
A、50度 B、60度 C、70度 D、80度
51(映光四要素包括动向、形状、速率及( )
A 灰度 B 亮度 C 色度 D 变化速率
52(映光的动向( )提示检影结束。
A顺动 B不动 C逆动 D不变
53(如果一患者检影时映光为顺动，则应选择()镜片加上
A-1.00度 B零度 C-2.00度 D+1.00度
22
54()是映光逆动时应加的镜片
A+1.00D B+2.00D C-1.00D D+0.50D 55.观察映光四要素至少要在()方向上
A一个 B二个 C三个 D四个
56.在中和点处()
A映光逆动 B映光不动 C映光最暗 D映光椭圆 57(对于七十岁的人来说，映光的亮度与()无关
A屈光不正的程度 B晶体浑浊的程度 C玻璃体浑浊的程度 D瞳孔大小 58.检影时，判断加正镜还是负镜主要是看映光的()
A速率 B动向 C亮度 D形状
59()是检影镜的基本构成
A镜筒 B灯光与镜头 C镜筒与镜头 D镜头
60.()为普通镜片箱中的最大正球度数
A+10.00D B+12.00D C+14.00D D+20.00D
61.在普通镜片箱内小于-1.00D的负球镜片度数递量为()
A0 B-0.25D C-0.50D D-0.12D 62.()在普通镜片箱内找不到
A+6.00D散光单片 B+5.50D散光单片 C+6.50D散光单片 D+5.00D散光单片 63(医师工作距离为0.67米，检影结果为+1.50D，患者眼屈光为( )。
A平光 B+1.50D C+1.00D D—0.50D
65(—2.00D的眼与—4.00D的眼相比前者比后者映光速率( )
A快 B慢 C变化快 D变化慢
66(( )是检影镜的基本构成。
A形状 B亮度 C动向 D速率
67(老视患者的眼镜()
A一定是远视镜 B一定是近视镜 C一定是平光镜 D有可能是近视镜 68(调节需求的计算方法是( )
A工作距离 B以米为单位，工作距离的倒数
C工作距离的2倍数值 D工作距离的1/2倍数值
69(屈光不正矫正为老视验光的( )。
A起始状态 B最终结果 C可省略的步骤 D什么都不是 70(一般，人们在( )左右出现老视。
A 40岁 B 50岁 C60岁 D70岁
71(( )是用焦度计对被检查者所戴眼睛的检测内容。
A镜片厚度 B镜片折射率 C顶焦度 D透光率
72(所谓一致性映光是指检影镜的转动方向与映光的方向( )时的动向。
A互相平行 B相交 C互相垂直 D不一致
73(检影时出现亮而快的映光常见于( )。
A人工近视 B近视 C小于人工近视的近视 D高度近视 74(出现暗而慢的映光常见于()
23
A平光 B近视 C远视 D散视
75.()时检影出现条状映光
A远视 B高度远散 C散光 D近视
76复性远散检影时映光表现为()
A椭圆 B圆 C方形 D条形
77.()是高度远散时检影的表现
A椭圆形 B圆形 C方形 D条形 78.()是高度近散时检影的表现
A椭圆形 B圆形 C方形 D条形
79(( )是常用的换片级距。
A(0.75D B 0.50D C 0.25D D 3.00D
80(马氏杆可用来对( )进行定量分析。
A近视 B远视 C散光 D斜视
81(( )为十字线片。
A在通明平光圆片上刻有两条互相垂直的直径刻线。
B在通明近视圆片上刻有两条互相垂直的直径刻线。
C在通明平光圆片上刻有两条互相平行的直径刻线。
D在通明平光圆片上刻有两条互相交叉的直径刻线。 82(针孔片为( )
A在透明圆片中央有针孔 B在半透明圆片中央有针孔
C在不透明圆片中央有针孔 D带孔的镜片
83(同一散光眼在远距离与近距离测出的散光( )
A略有差距 B相同 C相差25% D相差50% 84(老视出现的迟早与其原屈光状态( )
A无关 B略显有关 C正相关 D负相关 85(视角是由( )决定的。
A视细胞 B视细胞体积 C视细胞直径 D物体大小 86(眼的调节幅度最宜为视近所需调节的()否则易出现视疲劳
A1,2倍 B1倍 C2倍 D3倍
87.1′视角是人们用来制作()的理论依据
A视标 B裂隙灯 C眼底镜 D视力表 88()是小瞳验光法
A主觉、他觉与主客观结合小瞳静态检影法 B他觉与电脑验光仪法
C主觉与他觉验光法 D主觉与电脑验光法 89.小瞳主觉验光法包括()
A他觉验光法 B激光散斑图法 C检眼镜检查法 D图象法 90.()是主客观相结合小瞳静态检影验光法的特点
A迅速但复杂 B客观准确 C客观复杂 D复杂准确 91.试戴镜片后不清楚的调整方法有()
A增加凹面透镜，每次0.50D B增加凸面透镜，每次0.50D
24
C增加凸面透镜，每次0.25D D增加凸面透镜，每次1.00D 92(试戴调试是( )
A多余的 B结合视觉心理因素与临床解决能力的过程
C被检者自我调整的过程 D视光师调整的过程
93(真性近视不论轻重均应( ).
A戴镜矫正 B仔细检查后确定是否戴镜
C散瞳矫正 D间断戴镜
94(( )是试戴调试的目的。
A使患者获得清晰的视力 B使验光结果适应患者需要
C使患者逐步适应验光结果 D将验光结果与被检者屈光问题完善解决 95(引起视力下降及不适，应将其( )
A立即矫正 B可不校正 C偶可配戴缓解症状 D球镜矫正 96(为了减轻斜位散光戴镜的不适，应将其( )
A柱镜换算成球镜 B球镜换算成柱镜
C柱镜轴位接近垂直或水平 D柱镜轴位放在垂直或水平 97看无限远时，眼镜平面与角膜顶点平面瞳距相比( )
A相等 B前者大于后者 C后者大于前者 D前者比后者大2mm 98对出现严重试戴不适的被检者应( )
A减小其屈光度 B轴位定在90? C轴位定在180? D所配镜柱镜轴位尽量靠向原镜
98儿童高度散光者应该( )。
A尽量用柱镜全部矫正 B半量矫正 C全部用球镜矫正 D半量球镜矫正 99(( )适合配戴软性隐形眼镜。
A生活邋遢 B在酸性环境中工作的人 C 在碱性环境中工作的人 D足球运动员 100(( )眼球向下转是配戴隐形眼镜者的姿势。
A面向左转 B面向右转 C面向上传 D面向下传 101(( )是隐形眼镜摘出时应注意事项。
A洗手—清洁—摘镜片—存放 B清洁—摘镜片—洗手—存放
C洗手—摘镜片—清洁—存放 D摘镜片—洗手—清洁—存放 102(( )为去蛋白酶片的使用周期。
A一天 B一周 C每半个月 D一月
103(仪器保养的四项要求是:整齐、( )、润滑、安全。
A方便 B清洁 C安全 D快捷
104试戴时间相对较长的是()
A单纯近视 B单纯远视 C年龄大，有散光 D轻度近视 105 样片法是测量()的方法
A角膜直径 B角膜形状 C瞳孔大小 D瞳距大小 106()是测量瞳距时检查者与被检查者之间的距离
A10-20cm B20-30cm C30-40cm D40-100cm
二判断题
1.( )在市场经济条件下，克服利益导向是职业道德社会功能的表现。
25
2.( )市场经济时代，勤劳是需要的，而节俭不宜提倡。 3.( )顶焦度的单位是屈光度，符号为“DS”。
4.( )眼用球面透镜的顶焦度等于该球面的两面镜度之差。 5.( )沿圆柱玻璃体的轴向切下一部分，这部分就是一个球面透镜。 6.( )球面透镜之间的联合结果，可用求代数差的方法来获得。 7.( )球面透镜有两个界面，各界面对光线曲折的能力用面镜度来表示就成之为顶焦度。
8.( )通过镜片观察目标移动的现象成为视觉像移。 9.( )通过移动负球面透镜观察目标的动向，二者则呈现逆动。 10.( )如果柱面透镜的轴向位于垂直方向上，则最大的屈光力是在90?度上。
11.( )公式Fθ=F×sin2θ是用来计算柱面透镜上与水平线成θ夹角方向上的屈光力。
12.( )眼屈光系统的三对基点为一对近点、一对焦点和一对主点。 13.( )在简化眼中,单一折射球面位于角膜后1.336mm.。 14.( )在均匀介质中，光是沿着平面传播的。
15.( )光波波长范围在380~760nm之间的是人眼可见的光波。 16.( )镜片的阿贝数较大，色散就越小。
17.( )儿童戴镜史的了解需询问用眼卫生习惯。
18.( )验光的准确与否，关键在于验光员的检影技术。 19.( )应询问顾客是否有戴金属镜架过敏史等因素。 20.( )睑结膜可分为上睑结膜与下睑结膜。
21.( )单手也可以独立地翻转上睑。
22.( )出现暗而亮的映光常见于轻度近视。
23.( )高度近散时检影表现为椭圆形。
24.( )试戴时间一般为3小时。
25.( )测量瞳距的方法包括裂隙灯法与样片法。
26.( )远用瞳距测量时要注视5米以外的视标。
27.( )一般来讲，测量瞳距时检查者与被检者相距10—20cm。 28.( )近用瞳距比远用瞳距大4mm。
29.( )测量近用瞳距时，视标应在100厘米处
30.( )眼镜处方瞳距即指眼镜平面上瞳孔距离。
31.( )验光是屈光检查应首先进行的步骤。
32.( )高度散光眼原则上尽量用柱镜全部矫正。
33.( )全功能护理液使用最方便。
34.( )初戴隐形眼镜的不适感一般1—2周后消失。 35.( )视力检查的距离应为4.5米。
36.( )视力表表面不能擦拭，以免影响视力测定。 37.( )镜度表精度下降，可因表内机械部件磨损所致。 38.( )视力表灯箱亮度不够或不均匀，需更换灯管。
26
27
浙公网安备 33021202002483