全自动发酵罐枯草芽孢杆菌产淀粉酶实验报告

全自动发酵罐枯草芽孢杆菌产淀粉酶实验报告 20L全自动发酵罐枯草芽孢杆菌产淀粉 酶实验 实 验 时 间:2012年6月17日—2012年6月28日 学 生 姓 名: xxxxxx 学 号: 院 系: 生命学院 专 业: 生 物 技 术 指 导 教 师: 2012年 6月 30日 第1页 目录 一. 实验目的要求 „„„„„„„„„„„„„„„„„4 二、 实验试剂和仪器„„„„„„„„„„„„„„„„ 4 1、种子培养基:57,培养基 „„„„„„„„„„„„ 5 2、发酵培养基 „„„„„„„„„„„„„„„„„„ 5 3、发酵过程中相关参数的测定 „„„„„„„„„„„„6 三、实验步骤与方法 „„„„„„„„„„„„„„„ 6 1、了解发酵罐系统的结构 „„„„„„„„„„„„„ 6 2、种子培养 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„6 3、发酵罐空消 „„„„„„„„„„„„„„„„„„6 4.PH电极与DO电极的首次校正„„„„„„„„„„„„ 8 5、发酵培养基的配置 „„„„„„„„„„„„„„„ 9 5.1 培养基摇瓶试验 „„„„„„„„„„„„„„„ 9 5.2 种子的摇瓶 „„„„„„„„„„„„„„„„ 9 6.装料 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 10 7、实消 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 10 8.PH电极与DO电极的再次校正„„„„„„„„„„„„10 9、接种 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 11 10、设定发酵参数，运行发酵指令„„„„„„„„„„„ 11 11、发酵过程中相关参数的记录„„„„„„„„„„„„ 11 12、发酵过程中取样及相关参数的测定„„„„„„„„„„12 (1)参数测定所需的溶液的配置„„„„„„„„„„„„12 第2页 (2)取样 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„13 (3)样品处理„„„„„„„„„„„„„„„„„„ 13 (4)残糖含量测定(DNS法)„„„„„„„„„„„„ 13 (5)生物量的测定(比浊法)„„„„„„„„„„„„ 14 (6)淀粉酶发酵活力的测定„„„„„„„„„„„„„ 14 (7)葡萄糖 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线的制作„„„„„„„„„„„„„ 15 (8)麦芽糖标准曲线的制作„„„„„„„„„„„„„ 15 13. 放料, 清洗罐体，空消，保养„„„„„„„„„„„„ 16 四、实验结果与讨论„„„„„„„„„„„„„„„ 17 五. 实验心得体会„„„„„„„„„„„„„„„„ 26 第3页 一、 实验目的要求: 1. 掌握机械搅拌通风发酵罐的基本结构 (1) 发酵罐主体 (2) 蒸汽灭菌系统:正确把握各阀门的操作 (3) 通气系统 (4) 加热冷却循环系统:各管道联络关系 (5) 搅拌动力系统 (6) 智能控制系统 2. 掌握发酵罐小试的基本操作，包括:培养基配制，灭菌，接种， 参数设定 3. 掌握发酵过程中的参数测定和在线控制，包括:pH，DO，温度， 搅拌速度，生物量，残糖含量，产物生成量，消泡，CO2。 4. 运用所学发酵工程基本理论分析发酵过程中的实验数据，讨论某 一特定菌株的发酵规律。 二、 实验试剂和仪器 1、种子培养基:57,培养基 试剂及药品:麸皮 50g 豆饼粉(牛肉浸膏/粉) 30g NaCl 2 g 蒸馏水、斜面培养的枯草芽孢杆菌 器材:1000ml烧杯、玻璃棒、100ml锥形瓶(20个)、天平、粉碎机、电热炉、高压灭菌锅、灭菌枪头、1000移液枪、酒精灯、75% 第4页 酒精、棉球、无菌操作台、封口膜、橡皮筋、恒温摇床、1000ml锥形瓶、标签纸 2、发酵培养基: 试剂及药品: 麸皮 (3,) 320g 12水磷酸氢二钠(0.2,) 70.55g 硝酸钾 (0.2,) 28g 消泡剂(植物油)(0.3,) 42g 蒸馏水 器材:1000ml烧杯、玻璃棒、75%酒精、棉花、一次性口罩、打火机、厚手套、天平 3、发酵过程中相关参数的测定的药品、仪器: 试剂及药品:无水葡萄糖 0.1g NaOH 4g 3水乙酸钠 0.6804g 淀粉 1g 乙酸、蒸馏水、DNS、PH标准缓冲液、亚硫酸钠 器材:10mL具塞刻度试管(30个)、100ml容量瓶(2个)、200ml容量瓶(2个)、100ml烧杯、100ml试剂瓶(4个)、100ml锥形瓶(2个)、玻璃棒、1000ml烧杯、标签纸、电热炉、木夹、试管架、PH标准试纸、PH计、枪头、1000移液枪、恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、烘箱、冰箱、上海高机SY-3000发酵系统 第5页 三、实验步骤与方法 1、了解发酵罐系统的结构 (1)(罐体 (2)(发酵罐的搅拌系统 (3)(空气供给系统 (4)(温度控制系统 (5)(pH控制系统 (6)(过程变量的测量 (7)(灭菌系统 (8)测量及控制系统:下位机、上位机、网络通讯 2、种子培养 (1)称取麸皮50g、豆饼粉(牛肉浸膏/粉)30g(用粉碎机搅碎为粉末), 上述成分混合于1000ml烧杯中，加 NaCl 2 g、蒸馏水1.0L 置于电热炉上煮沸1小时，将pH 自然，待温度下降后分装入20个100ml锥形瓶中，每瓶30ml。将装有培养基的锥形瓶与备好的枪头、玻璃棒一起放入高温灭菌锅灭菌2小时后取出待用。 (2)将灭菌后的培养基、枪头、移液枪、玻璃棒、无菌水、酒精棉球、酒精灯放入无菌操作台紫外照射20min后，可将斜面培养的枯草芽孢杆菌接种到新配置的锥形瓶培养基中，贴好标签，放到30?恒温摇床中培养2天。 3、发酵罐空消 第6页 空罐灭菌 注意事项 软件开发合同注意事项软件销售合同注意事项电梯维保合同注意事项软件销售合同注意事项员工离职注意事项 和准备: i. 在灭菌之前一定要先将夹套的水排掉。 ii. 所有罐体上的部件都必须保证是安装可靠的，以防罐压升 高时造成危害。 iii. 空罐灭菌时，pH、DO电极应取下，这样可以延长使用寿 命。 iv. 将罐体及管路上的所用阀门都关闭。 v. 调整好液位和消泡电极的位置并旋紧。如果不用，则可拆 下并用堵头封住;检查蒸汽是否满足要求。 步骤: (1)发酵罐、空压机电源打开; (2)打开蒸汽发生装置，发酵罐与蒸汽发生装置的通水阀门打开，并检查蒸汽发生装置水箱是否满，注意蒸汽发生装置的压力 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 读数。打开蒸汽发生装置的旁通阀使冷空气排出，排完即关。 (3)打开发酵罐水阀，使水淹没温度电极，排空夹套水。 (4)当蒸汽发生装置的压力表读数达到0.4,0.7MPa，可开启空消，下位机参数设置如下: 灭菌温度: 121.0? 灭菌时间: 20min 停转温度: 90.0? 灭菌转速: 0rpm 结束温度: 37.0? 结束转速: 150rpm 结束压力: 0.05MPa 结束流量: 30L/min 尾气开度: 5% 过程流量:5.00 L/min 第7页 (5)当罐温达到100?以上，分别对取样口、轴封、底阀进行消毒，每项10min。取样口消毒:打开取样蒸汽进气阀—取下取样口螺盖—取样口出蒸汽—打开取样蒸汽出气阀—拧上取样口螺盖—计时10min(正常灭菌状态下取样相通管道会发烫)，轴封与底阀的灭菌过程与取样口灭菌操作类似。 (6)空消完成后关闭蒸汽发生装置，降温冷却。 4.PH电极与DO电极的首次校正 (1)配置PH为4.00与6.86的标准缓冲液 (2)配置饱和亚硫酸钠溶液 (3)PH电极的校正: ?. 将PH电极放入6.86的标准缓冲液中，在“测量值1”处输 入6.86，“当前电压”稳定后，点击“第一点确认”，系统会 自动将“当前电压”处的数值记录到“测量电压1”处。 ?. 将PH电极放入4.00的标准缓冲液中，在“测量值2”处输 入4.00，“当前电压”稳定后，点击“第二点确认”，系统会 自动将“当前电压”处的数值记录到“测量电压2”处。 ?. 电击“自动校正”，系统会自动计算出零位和斜率。 (4)DO电极的校正: ?. 将DO电极放入饱和亚硫酸钠溶液中，在 “当前电压”稳定 后，点击“第一点确认”，系统会自动将“当前电压”处的数 值记录到“测量电压1”处。 ?. 将DO电极放入饱和湿度的空气中(用湿润滤纸包裹电极亦 第8页 可)，在“测量值2”处输入标准值98，“当前电压”稳定后， 点击“第二点确认”，系统会自动将“当前电压”处的数值记 录到“测量电压2”处。 ?. 电击“自动校正”，系统会自动计算出零位和斜率。 5、发酵培养基的配置: 用天平称取麸皮320g、12水磷酸氢二钠70.55g、硝酸钾28g、植物油42g，将12水磷酸氢二钠、硝酸钾和植物油用蒸馏水溶于1000ml烧杯中制成营养盐。 5.1 培养基摇瓶试验 5.1.1 材料 4%麸皮: 100ml×4%=4g 磷酸氢二钠:100ml×0.2%=0.2g 硝酸钾: 100ml×0.2%=0.2g 5.1.2 方法 o 将上述药品装入250mL的三角瓶中，35C旋转式摇 床上(150rpm)培养26小时。判断培养基的粘稠度，如 果过于粘稠降低麸皮的含量。 5.2 种子的摇瓶 按上述方案配好培养基3份(或2份)，进行高温灭菌 o30min。再将枯草芽孢杆菌种接入摇瓶培养基中，35C旋转式 摇床上(150rpm)培养26小时。 第9页 6.装料: 将配好的营养盐与称好的麸皮从进料口倒入发酵罐，加水(约5升)至淹没温度电极。 7、实消: 操作步骤与空消类似。区别在于: (1)下位机参数设置如下: 灭菌温度: 121.0? 灭菌时间: 30min 停转温度: 90.0? 灭菌转速: 100rpm 结束温度: 37.0? 结束转速: 150rpm 结束压力: 0.05MPa 结束流量: 30L/min 尾气开度: 5% 过程流量:5.00 L/min (2)实消完由于要取样故蒸汽发生装置不可关闭。 8.PH电极与DO电极的再次校正 (1)DO电极校正:搅拌速度与发酵过程正常转速一致，通气量与发酵过程正常通气量一致，标定溶氧为“100”本实验设定118.3%时为100%溶氧。 (2)取样(参比液):打开取样蒸汽进气阀—取下取样口螺盖—取样口排出蒸汽 —关闭夹套蒸汽阀—取样口蒸汽排完—关闭取样蒸汽进气阀—拧松取样阀(开启方向与正常螺旋相反)—取样口流出发酵液—取样100ml于灭菌锥形瓶(作为参比液存于4?冰箱)—打开取样蒸汽进 第10页 气阀—取样口排出蒸汽(待冲净取样口)—拧上取样口螺盖—蒸汽从取样阀排出—打开取样蒸汽出气阀—拧紧取样阀—灭菌10min—关闭蒸汽发生装置。 (3)测出参比液PH值，以此数值对PH电极校正，本实验测得参比液PH值为7.14，故将下位机此时PH值调为该值。 9、接种: 当罐温降低至40?以下时，采用火圈法接种摇瓶种子。 (1)接种前需将20瓶100ml种子液在无菌操作台上混合成两大瓶，以便于接种。 (2)用75%酒精擦拭进料口的罐面，用蘸酒精的棉花填满进料口凹槽，接种人员佩戴好口罩，点燃进料口棉花(在接种过程中保持或不灭)，将菌液倒入罐中。 (3)接种完成后加入蒸馏水时发酵液体积达到规定液面。 10、设定发酵参数，运行发酵指令 (1)设置参数: 温度: 37? 通气量: 10L/min 维持正压: 0.05MPa 搅拌速度 250rpm pH自然 运行指令 (2)发酵起始参数: 罐温37.4? 转速150rpm PH7.36 DO231.3% 流量14.12L/m 罐压 第11页 0.054MPa 11、发酵过程中相关参数的记录 制定值班表，自发酵开始每半小时记录一次(深夜除外)，记录的内容有:罐温、转速、PH值、DO值、流量、罐压、发酵液颜色、发酵液浊度、泡沫高度、泡沫大小、发酵罐进气压力、发酵罐尾气压力。 发酵过程中的注意事项: ?.发酵罐压力(进气、尾气)应小于0.15MPa ?.出现一般异常情况可临时关闭蒸汽发生装置，但不可关闭发 酵罐与空压机电源 ?.发酵过程中，取样前应打开蒸汽发生装置，待其压力达到 0.4,0.7MPa时才能取样。 12、发酵过程中取样及相关参数的测定 (1)参数测定所需的溶液的配置: ? pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液的配置: 利用公式pH=pKa+lg([AC]/[HAC]) HAC的pKa=4.74 代入得[AC]/[HAC]=7.24 所以只要醋酸钠和醋酸的物质的量之比为7.24即可。 得出需乙酸0.00397 ml，3水乙酸钠0.6804g，将3水乙酸 钠0.6804g溶于适量水中，加入冰乙酸0.00397 mL，用水定容 至100 mL。 第12页 ? 1M NaOH溶液的配置: 于100ml烧杯中加入适量的水(能够溶解就好)，称取NaOH 4 g， 慢慢加入水中，边加边搅拌，直至溶解。再将之移入100ml的容 量瓶中，用少量水清洗烧杯，将清洗的水倒入容量瓶中，最后定 容至100ml。 ? 1, 淀粉溶液的配置: 方法1.取可溶性淀粉0.5 g，加水5 ml搅匀后，缓缓倾入100 ml沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。 (本液应临用新制) 方法2.称取1 g淀粉溶于100 ml 0.1 mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。 (2)取样: 每隔12小时取样一次，进行相关参数测定 发酵过程中取样具体操作: ?.提前打开蒸汽发生装置; ?.待其压力达到0.4,0.7MPa，进行取样口灭菌10min; ?.灭菌时间到达后可取样20-30mL(操作同步骤9取参比液相 同); ?.取样后取样口灭菌10min; ?.关闭蒸汽发生装置。 (3)样品处理: 将取样发酵液4层无菌纱布过滤，取滤液为待测液，贴好标签。 第13页 (4)残糖含量测定(DNS法) ? 取10mL刻度试管2支标记A、B，分别加入DNS试剂3.0mL， A管加入0.5mL待测发酵液，B管加入0.5mL蒸馏水作为空 白对照。 ? 沸水反应5min，反应后迅速冷却定容至10mL， 用分光光度 计在540nm处比色，测定OD值。用B管作为对照消零。 540nm ? 计算残糖量:根据葡萄糖标准曲线方程，计算并记录残糖量 (5)生物量的测定(比浊法) 以参比液为空白对照，测定待测液OD590nm处的吸光值，以OD值标示枯草芽孢杆菌的生物量。 (6)淀粉酶发酵活力的测定 ? 取10mL刻度试管2支(标记为A、B)，分别加入0.5mL待 测酶液。 ? 在B管中加入0.5mL 1M NaOH灭酶活，A管中加入0.5 mL pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液。然后在两管同时加入0.5 mL 1, 淀粉溶液作为反应底物。 ? 40?恒温水浴锅准确反应5 min ? A管加入0.5 mL 1M NaOH灭酶活。两管加显色剂DNS试剂2.0 mL，沸水反应5 min， 反应后迅速冷却定容至10mL。 ? 用分光光度计再540nm处比色，用B管作为对照，测定OD540nm 值。 ? 根据葡萄糖标准曲线计算葡萄糖含量(G)和发酵液中酶活力。 第14页 ? 酶活力定义:40?，每分钟催化可溶性淀粉水解生成1 mg葡 萄糖所需要的酶量为一个活力单位(U) 计算公式: 单位体积发酵液的酶活力,G(mg/mL)/5(min)*2,(G/5)*2 (U/mL) (7)葡萄糖标准曲线的制作 1. 浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液的制备:在电子天平上准确称取100mg无水葡萄糖放入100mL小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入100mL容量瓶中用蒸馏水定容至100mL，充分混匀。4?冰箱中保存(可用12,15天)。 2. 取8支洗净烘干的10mL具塞刻度试管，编号后按表1加入标准葡萄糖(G)溶液和蒸馏水，配制成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后，向各试管中加入2.0 mL DNS溶液，摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至10mL，充分混匀。在540nm波长下，以1号试管溶液作为空白对照，调零点，测定其它各管溶液的光密度值并记录结果。 3. 以葡萄糖含量(mg)为横坐标，以对应的光密度值为纵坐标，绘制出葡萄糖标准曲线。 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 试 剂 葡萄糖标液(mL) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 蒸 馏 水(mL) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 葡萄糖含量(mg) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 表1 葡萄糖标准曲线制作 第15页 (7)葡萄糖标准曲线的制作 1.浓度为1mg/ml的麦芽糖标准液的制备:在电子天平上准确称取100mg无水麦芽糖放入100mL小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入100mL容量瓶中用蒸馏水定容至100mL，充分混匀。4?冰箱中保存(可用12,15天)。 2.取8支洗净烘干的10mL具塞刻度试管，编号后按表1加入标准麦芽糖溶液和蒸馏水，配制成一系列不同浓度的麦芽糖溶液。充分摇匀后，向各试管中加入2.0 mL DNS溶液，摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至10mL，充分混匀。在540nm波长下，以1号试管溶液作为空白对照，调零点，测定其它各管溶液的光密度值并记录结果。 3.以麦芽糖含量(mg)为横坐标，以对应的光密度值为纵坐标，绘制出葡萄糖标准曲线。 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 试 剂 麦芽糖标液(mL) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 蒸 馏 水(mL) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 麦芽糖含量(mg) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 表2 麦芽糖标准曲线制作 13.放料, 清洗罐体，空消 打开HV1.1和HV1.2，对底阀进行灭菌，保持10,20分钟左右，之后关闭HV1.2、HV1.1。旋下放料口帽，用容器接或用软管引，打 第16页 开HV1.0，适当提高罐压，即可将物料放出。物料放尽后要及时清洗罐体。 四、实验结果与讨论 一、摇床阶段 1葡萄糖标准曲线(大组数据) 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 试 剂 葡萄糖标液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 (mL) 540nmOD 0 0.196 0.563 0.856 1.172 1.435 1.652 1.773 2麦芽糖标准曲线(大组数据) 第17页 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 试 剂 麦芽糖标液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 (mL) 540nmOD 0 0.287 0.647 1.021 1.301 1.574 1.824 1.959 3摇床数据整理与分析 取样时间 生物量 OD残糖 PH OD酶活 麦芽糖 12h 1.796 0.407 5.5 0.081 0.016 24h 1.796 0.408 6.0 0.126 0.047 36h 2.027 0.415 6.0 0.201 0.099 48h 2.445 0.421 6.5 0.665 0.417 60h 2.631 0.451 6.0 0.627 0.391 第18页 十九周进行摇床实验。共收集六组如上数据。其中，第一次和第六次未进行稀释。做酶活时由于稀释倍数不够，造成对照组并没有达到灭活的要求，后来测的OD差太少。 二、发酵阶段 1.发酵下位机数据: 下位机读取的各项数据 发酵批发酵时罐转速罐压流量 次 间h 温? rpm PH Mpa L/m 2012/06/209:00:00. 5 0 48 0:0 28.2 0 14 0.001 0 2012/06/210:00:00. 5 0 48 0:0 27.4 0 7.78 0.002 0 2012/06/211:00:00. 5 0 48 0:0 67.71 99.6 7.134 0.039 30.38 2012/06/212:00:00. 5 0 48 0:0 37.6 100 7.064 0.078 30.3 2012/06/213:00:00. 5 0 48 0:0 37 100 7.095 0.068 30.32 2012/06/214:00:00. 5 0 48 0:0 36.8 100 7.094 0.066 29.55 2012/06/215:00:00. 5 0 49 0:38 33.2 200 7.031 0.047 5.459 2012/06/216:00:00.49 1:38 33.4 200 6.979 0.043 5.746 第19页 5 0 2012/06/217:00:00. 5 0 49 2:38 33.4 199 6.736 0.042 5.759 2012/06/218:00:00. 5 0 49 3:38 33.4 200 6.457 0.041 5.846 2012/06/219:00:00. 5 0 49 4:38 33.4 200 6.207 0.041 5.912 2012/06/220:00:00. 5 0 49 5:38 33.4 198 5.918 0.044 5.584 2012/06/221:00:00. 5 0 49 6:38 33.4 199 5.88 0.047 5.512 2012/06/222:00:00. 5 0 49 7:38 33.4 200 5.875 0.042 5.678 2012/06/223:00:00. 5 0 49 8:38 33.4 200 5.923 0.041 5.753 2012/06/200:00:00. 6 0 49 9:38 33.4 200 5.799 0.056 5.187 2012/06/201:00:00. 6 0 49 10:38 33.4 200 5.863 0.051 5.35 2012/06/202:00:00. 6 0 49 11:38 33.4 200 5.915 0.053 5.29 2012/06/203:00:00. 6 0 49 12:38 33.4 200 5.946 0.057 5.287 2012/06/204:00:00. 6 0 49 13:38 33.4 200 5.955 0.058 5.328 2012/06/205:00:00. 6 0 49 14:38 33.4 200 5.905 0.057 5.3 2012/06/206:00:00. 6 0 49 15:38 33.4 200 5.797 0.057 5.309 2012/06/207:00:00. 6 0 49 16:38 33.4 199 5.683 0.058 5.306 2012/06/208:00:00. 6 0 49 17:38 33.4 200 5.585 0.059 5.306 2012/06/209:00:00. 6 0 49 18:38 33.4 250 5.54 0.059 5.481 2012/06/210:00:00. 6 0 49 19:38 33.4 250 5.649 0.059 5.425 2012/06/211:00:00. 6 0 49 20:38 33.4 249 5.683 0.059 5.665 2012/06/212:00:00. 6 0 49 21:38 30.2 149 5.706 0.034 4.868 2012/06/213:00:00. 6 0 49 22:38 30.4 149 5.728 0.028 4.815 第20页 2012/06/214:00:00. 6 0 49 23:38 30.4 149 5.846 0.025 5.043 2012/06/215:00:00. 6 0 49 24:38 30.6 150 6.01 0.025 5.034 2012/06/216:00:00. 6 0 49 25:38 30.4 150 6.19 0.036 4.996 2012/06/217:00:00. 6 0 49 26:38 30.4 149 6.357 0.035 4.815 2012/06/218:00:00. 6 0 49 27:38 30.2 150 6.502 0.029 4.759 2012/06/219:00:00. 6 0 49 28:38 30.4 150 6.63 0.023 5.153 2012/06/220:00:00. 6 0 49 29:38 30.4 148 6.737 0.027 4.95 2012/06/221:00:00. 6 0 49 30:38 30.6 149 6.832 0.035 4.753 2012/06/222:00:00. 6 0 49 31:38 30.4 149 6.904 0.024 5.1 2012/06/223:00:00. 6 0 49 32:38 30.4 148 6.963 0.032 5.143 2012/06/200:00:00. 7 0 49 33:38 30.4 149 7.012 0.032 4.709 2012/06/201:00:00. 7 0 49 34:38 30.4 149 7.05 0.03 4.968 2012/06/202:00:00. 7 0 49 35:38 30.4 149 7.083 0.025 5.012 2012/06/203:00:00. 7 0 49 36:38 30.4 148 7.12 0.023 5.237 2012/06/204:00:00. 7 0 49 37:38 30.4 150 7.159 0.038 4.746 2012/06/205:00:00. 7 0 49 38:38 30.2 150 7.211 0.033 4.828 2012/06/206:00:00. 7 0 49 39:38 30.4 150 7.263 0.026 5.143 2012/06/207:00:00. 7 0 49 40:38 30.4 149 7.31 0.024 5.131 2012/06/208:00:00. 7 0 49 41:38 30.4 148 7.357 0.027 4.95 2012/06/209:00:00. 7 0 49 42:38 30.4 149 7.403 0.037 4.821 2012/06/210:00:00. 7 0 49 43:38 30.4 130 7.438 0.033 4.728 2012/06/211:00:00.49 44:38 30.4 129 7.477 0.026 5.093 第21页 7 0 2012/06/212:00:00. 7 0 49 45:38 30.4 130 7.508 0.023 5.165 2012/06/213:00:00. 7 0 49 46:38 30.2 130 7.537 0.038 4.84 2012/06/214:00:00. 7 0 49 47:38 30.6 130 7.56 0.032 4.709 2012/06/215:00:00. 7 0 49 48:38 30.4 130 7.584 0.027 5.04 2012/06/216:00:00. 7 0 49 49:38 30.4 130 7.602 0.023 5.234 2012/06/217:00:00. 7 0 49 50:38 30.4 129 7.61 0.032 5.284 2012/06/218:00:00. 7 0 49 51:38 30.4 130 7.616 0.035 4.859 2012/06/219:00:00. 7 0 49 52:38 30.4 127 7.627 0.03 4.925 2012/06/220:00:00. 7 0 49 53:38 30.4 129 7.627 0.028 4.868 2012/06/221:00:00. 7 0 49 54:38 30.6 129 7.614 0.025 5.109 2012/06/222:00:00. 7 0 49 55:38 30.41 131 7.598 0.034 5.162 2012/06/223:00:00. 7 0 49 56:38 30.4 129 7.542 0.035 4.759 2012/06/200:00:00. 8 0 49 57:38 30.4 129 7.621 0.029 4.787 2012/06/201:00:00. 8 0 49 58:38 30.4 130 7.651 0.028 4.887 2012/06/202:00:00. 8 0 49 59:38 30.4 130 7.644 0.025 5.215 2012/06/203:00:00. 8 0 49 60:38 30.4 130 7.678 0.028 4.95 2012/06/204:00:00. 8 0 49 61:38 30.4 130 7.688 0.037 4.781 2012/06/205:00:00. 8 0 49 62:38 30.2 129 7.68 0.033 4.853 2012/06/206:00:00. 8 0 49 63:38 30.4 130 7.66 0.03 4.903 2012/06/207:00:00. 8 0 49 64:38 30.4 129 7.614 0.024 5.212 2012/06/208:00:00. 8 0 49 65:38 30.6 129 7.69 0.033 5.168 第22页 2012/06/209:00:00. 8 0 49 66:38 30.2 130 7.774 0.035 4.778 2012/06/210:00:00. 8 0 49 67:38 37.84 49.9 7.841 0.001 4.909 2012/06/211:00:00. 8 0 2 2:2 0.01 0.06 0 -0.1 0 2012/06/212:00:00. 8 0 49 0:0 120.2 0 0.065 0.096 0 2残糖含量的测定 0h 12h 24h 36h 48h 60h 取样时间 540nmOD差1.703 2.021 0.810 1.268 1.855 1.004 值 葡萄糖含量 0.59 0.93 1.25 1.49 1.37 0.74 3生物量测定 第23页 0h 12h 24h 36h 48h 60h 取样时间 590nmOD差0.342 0.38 0.251 0.4 0.585 0.527 值 4淀粉酶活力测定 淀粉酶发酵活力测定 0h 12h(稀释24h(稀释36h(稀释48h(稀释3060h(稀释30取样时间 10倍) 10倍) 30倍) 倍) 倍) 吸光度差值 0.226 0.518 0.227 0.324 0.268 麦芽糖含量 1.157 3.163 3.493 5.491 4.338 (mg/mL) 第24页 5、PH值的记录 如图所示。PH渐渐由中性变为弱酸性再变成碱性。枯草芽孢杆菌的最适pH是pH6.4，pH值对糖化淀粉酶的水解能力有影响，从而pH值的升高影响到酶的发酵。由于后期发酵会产生副产物， 第25页 PH发生变化，菌群进入衰亡期。菌种退化的标志是生物量的下降。共四个阶段，分别为:延迟期、对数期、稳定期、衰亡期。 通过上列图表和数据得出pH是枯草芽孢杆菌产生淀粉酶的重要因素。随着发酵的进行，pH渐渐上升，溶氧降低，酶活提高，生物量由高到低。 五、实验心得体会 在做发酵大实验前,我以为不会难做,就像以前做生化实验一样,做完实验,然后两下子就将实验报告做完.直到做完发酵实验时,我才知道其实并不容易做,但学到的知识与难度成正比,使我受益匪浅. 在做实验前,一定要将讲义上的知识吃透,因为这是做实验的基础,否则,在老师讲解时就会听不懂,这将使你在做实验时的难度加大,浪费做实验的宝贵时间. 做实验时,一定要亲力亲为,务必要将每个步骤,每个细节弄清楚,弄明白,实验后,还要复习,思考,这样,你的印象才深刻,记得才牢固,否则, 过后不久你就会忘得一干二净,这还不如不做.做实验时,老师还会根据自己的亲身体会,将一些课本上没有的知识教给我 们,拓宽我们的眼界,使我们认识到这门课程在生活中的应用 是那么的广泛. 通过这次发酵实验,使我学到了不少实用的知识, 更重要的是,做实验的过程,思考问题的方法,这与做其他的实 验是通用的,真正使我们受益匪浅 第26页