常见植物的脱毒与快速繁殖技术(4学时)

常见植物的脱毒与快速繁殖技术(4学时) 第9章 常见植物的脱毒与快速繁殖技术(4学时) 第一节 蔬菜的脱毒与快繁 第二节 果树的脱毒与快繁 第三节 花卉植物的脱毒与快繁 第四节 农作物的脱毒与快繁 第五节 药用植物的试管快繁 第六节 树木的脱毒与快繁 本章小结 目的要求: (1) 掌握马铃薯的生物学习性;马铃薯脱毒培养的过程以及马铃薯脱毒苗的鉴定方法; (2) 掌握番茄的生物学特性及快速繁殖方法; (3) 掌握苹果、葡萄、草莓的生物学特性，建立无性繁殖系以及自然繁殖法; (4) 掌握兰花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牵牛和百合的生物学特性，无毒苗培养方法 以及快速繁殖方法及; (5) 掌握甘薯的脱毒与快繁技术 (6) 了解芦荟、桔梗的组织培养及快速繁殖技术 (7) 了解毛白杨、河北杨的生物学习性，及组织培养快速繁殖技术。 第一节 蔬菜植物的组织培养 一、 马铃薯的组织培养 马铃薯(Solanum.tuberosum)是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。 马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。但是，当发现从外地引种栽培1,2个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的现象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化现象。 危害马铃薯的病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、奥古巴花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯卷叶病毒和马铃薯养病度的一些株系，可使块茎产量减少50%,80%。法国Morel和他的同时们，1955年从患病马铃薯植株中选取到了无病植株，为治疗作物病毒开辟了进途径。 ( 一)、特性和生物学习性 1、 马铃薯的形态特性 (1) 根 马铃薯的根系由出生根和匍匐根两部分组成。出生根在块茎发芽后基部发生，构成其只要吸收根系。水者芽的伸长，陆续在芽的各个叶节处匍匐茎的两侧及下方发生匍匐根，水平生长。 (2)茎 马铃薯分地上部分和地下部分，地上茎的主茎在形成16片叶子后，由花芽封顶，并在花的下部发生两个侧枝，从而构成马铃薯的主要同化系统。地下茎包括主茎的地下部分、匍匐茎和块茎。块茎与匍匐茎相连的一端叫薯尾或脐部，另一端叫薯顶，块茎表面分布着芽眼。薯顶压延分布较密，发芽早，发芽势强，即具有顶芽优势。生产上的整薯播种、带着顶部芽眼切块，都是发挥顶芽优势的有效措施。 (3)叶 马铃薯先出土的叶是初生叶，全缘，心脏形。以后发生的叶奇数羽壮全裂单叶，在叶柄基部与主茎相连处着生有托叶。 (4)花 马铃薯的话为聚伞花序，第一或第二花序开放，恰是块茎强盛膨大之时，此时 是需要不断浇水的形态标志。 (5)果实、种子 马铃薯果实为球星或椭圆形浆果。种子小。扁平肾形。中指可用来繁 殖，但后代性状分离大。 2、 生物学习性 马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻，解除休眠的块茎4?下发芽，发芽适温为12,18?。地上茎叶生长温度为17,21?，25?以上时生长不良，叶变小，超过30?和7?以下茎叶停止生长，-1?时受冻。块茎形成要求昼温14,24?，夜温12,14?，土温16,18?。土温20?以上时块茎形成缓慢，而且容易引起退化，高温下养分多用于芽和匍匐茎生长不易形成块茎，25,30?时已经长成的块茎也会小时而变成细长茎，结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥活以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块表面粗糙和薯形不整。 马铃薯生产中普遍存在有种性退化问题，表现为植株长势衰弱，株形矮化，分枝变少，薯块变小，产量逐降低，造成退化的原因和学说多种，综合而言，主要是薯块生长锥细胞发生阶段性衰老饿导致种性退化，而病毒和细菌病害的浸染，以及肥水、营养条件不良等都会加剧其退化程度。 (二)、 栽培管理 种须经催芽处理，方法是播种前30,40d，将选好的健康种薯装入袋或筐中，放在15,18?和相对湿度60%,70%的火炕上或室外，厚度以2,3层种薯为易，保持15,18?和7%,80%空相对湿度，晚间收回。经15,20d，能形成0.5,1.5cm长、紫绿色粗壮的芽，芽基部已发生根尖和兢的原始体。 将催芽种薯纵切成4,5块，每块25g 左右，带1,2个芽。切口抹草木灰;，放20?和80,90%空气相对湿度下，促进伤口愈合，防块茎腐烂。3月中旬左右播种，密度为60,70×15,30cm，开沟10cm深，播后覆土平均，增强 保墒。干旱时，播前或播后浇水。播后覆盖地膜，可早出苗和增加产量。春薯可和棉花或玉米间作。 春薯管理的重点在于促进早出苗 、早发棵、早结薯。80%出苗时中耕松土，提高地温。奇苗后半月左右，行间撒硫酸铵10,12kg，后浇水中耕，促发苗和长棵迅速形成茎叶和地下匍匐茎。发棵初期施肥，以后适当控制肥水，地不汉不浇水，多次浅耕保墒，防植株旺长面延长结薯。封垄前大培土一次，培土高12,15cm，不埋没主茎的功能叶。开花后地下块茎膨大，要求湿润疏松的土壤，在初花、盛花和终花期连浇三水。，这时期缺水会明显减产，后期可减少浇水，更不能大水漫灌。收前5,7d停水，促薯皮老化，以利贮藏。 (三)、马铃薯脱毒技术 马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染，当条件适合时，病毒就会在植株内增殖，转运和积累于所结块茎中，随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般可造成减产50,以上。经科技人员研究发现，有30多种病毒易感染马铃薯，并引起品种退化，严重影响到马铃薯的生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。 因此，采用组织培养技术，通过一定良种繁殖体系，生产优质种薯，是保证马铃薯高产、 稳产的一项有效措施。 1(脱毒种薯生产程序 采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种(或称脱毒小薯)。用原原种在一定隔离条件下产生原种1代，以后逐级称为原种2代、良种1代、良种2代。 2(茎尖培养脱毒 (1) 取材和培养 一般多采用在室内发芽，芽经热处理(38?)2周。然后取顶芽或侧芽1厘米的茎尖，在自来水下冲洗1h左右，无菌条件下先用95,的酒精浸润组织，在用5,的漂白粉溶液浸泡5,10min，然后用无菌水冲洗2,3次。为了减少污染机会，可将块茎彻底消除后，放在无菌容器中培养，然后在去取茎尖。分离茎尖时，把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留2个叶原基，随即接种于MS液体培养基上，每升加0.1mgIAA 、 0.1mgGA3、p H值5.8。也可White培养基，附加0.1,1mg/L的NAA和0.05 mg /L 的BA。培养条件:21,25?、3000 lx、16h/d。 (2) 继代和生根 培养成功的马铃薯脱毒苗，经鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法括繁。取试管苗单节切段扦插在固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右使可发育成5,10cm高小植株，可在进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5,8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。 (3) 驯化 为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。炼苗期温室内的温度:白天23,27?，夜间不低于14?。 炼苗的具体方法是:移植前7d左右，将长有3,5片叶、高2,3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。移植时，将装好基质的营养钵紧密的排放于温室内，已经整好的阳畦内，可采用珍珠岩作为基质，有条件的话，也可采用灭过菌的疏松土壤。每1m2排放营养钵300个左右。排好后用喷壶浇透水，将经光、温锻炼好的试管苗从瓶内用镊子轻轻取出，放到15?的水中洗去培养基，放入盛水的容器中，随时取随时扦插，防止幼苗失水。大的幼苗可截为2段，每个营养钵插一个茎段，上部茎段和下部茎段分别扦插到不同的钵内。一般情况，扦插后最初几天，每天上午喷一次水，保持幼苗及基质湿润。但喷水量要少，避免因喷水过多造成地温偏低而影响幼苗生长和成活。切忌暴热时间凉水浇苗。为提高水温，可提前用桶存水于温室中。随幼苗生长逐渐减少浇水次数，但每次用水量逐渐加大。此外为保持温室中有较高的湿度，以防幼苗茎皮硬化，影响切繁效果，在育苗不需要浇水的时候应将温室内所有空地全都浇上水，在幼苗生长及整个切繁期，温室内的相对湿度保 28，夜间保持在15以上。基础苗切繁前和培育大田持正在85,以上，气温白天控制杂25, 定植苗，一般不在追肥。但基础苗开始切繁后,,,d要喷一次营养液，此后每隔,,d 一次，直至切繁终止。 3. 脱毒苗切繁 基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁量的多少和质量的高低，除与前边提到的水与温湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。 脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段(主茎芽尖和腋芽芽尖)直接扦插。正确的切繁原则是:保证每次剪切后，基础苗仍能保持交好的株型和营养面积与较多的茎节，不仅生长正常，而且又能萌发出多个腋芽供下次剪切，具体方法是:扦插后15天左右，当基础苗长有,,,个展出叶、苗高3.5,,厘米时进行首次切繁。从基础苗茎基部上数,,,个茎芽上方，用锋利刀片将上部茎芽切下(茎段不小于,厘米)，扦插到浇透水的营养钵内。培育供大田定植的脱毒苗，也可以作为供切繁的基础苗。如生产脱毒小整薯，可直接扦插到用营养土做好作为的畦床上或备好的专用的无土培养盘中，扦插方法与扦插后的管理同试管苗扦插方法与管理。第一次剪切后10天左右，基础苗上萌发的腋芽长大时进行第二次切繁，同第一次一样，将剪切腋芽基部的第一个叶片留下继续萌发腋芽，将上部茎尖芽段剪下扦插。如基础苗上出剪取的腋芽外，仍有多个未萌发或未长大的腋芽时，可将牙牙全部切下。如果是高位腋芽，要连同着生腋芽的茎段一起剪下，以便基础苗始终保持较好、有利于继续切繁的株型，延长切繁期，以后无论切繁多少次，其方法和原则相同。在生产需要时间允许，所有切繁培育成的脱毒苗均可作为基础苗进行切繁。 (四)、马铃薯无病毒苗的鉴定材料 1、指示植物鉴定 在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定中是最常用的方法，,病毒、,病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。,病毒、,病毒和,病毒等也可用此法来接种。 2、鉴定寄生的准备 马铃薯病毒的寄生范围狭窄不一，如卷野病毒只能感染茄科少数病毒。而,病毒除茄科外，还能感染笕科的千日红，藜科的笕色藜等。马铃薯常用的鉴定寄生植物有笕科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄生植物应在无虫网室中培养，温度控制在15,25?，提供充足的肥、水、光等条件，保证幼苗健壮生长。系统发病来鉴定寄生，一般用,,,片真叶的幼苗，局部发病的寄主利用充分展开的真叶。每个病毒样品可接种,株，并做好标记。 ,.接种液制备及接种 一般以表现病状明显的叶作为接种材料。叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，在意蒸馏水稀释10倍作为接种物，以防过浓的汁液对鉴定寄生产生伤害作用。 在鉴定寄生植物的叶面，均匀的喷布600目的金刚砂，也可将金刚砂少许混入接种物中，然后用左手心紧靠在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶 24的防虫室中，片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲洗干净，放置在15,一般5,10天可发病。 (五)、马铃薯无病毒株的繁殖和保存 1( 无病毒株的繁殖 通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的方法很多，下面介绍主要的几种。 (,) 直接块茎繁殖 这是常用的方法，把少量无病毒小苗直接移入无虫网室的土壤中，利用产生的块茎继续繁殖，并进行严格的病毒鉴定，一旦发现病毒再侵染，即行淘汰，将经过,,,次繁殖的无病毒块作为一级原种，提供大田繁育体系作进一步扩大繁殖。 (,) 扦插繁殖 把无病毒植株栽于无虫室的营养钵中，,,,个月以后切顶芽做插枝。切去顶芽后，又处进侧芽发生，很快长成侧枝。扦插时，将扦插最下面的叶除去，插入经过消毒的砂壤中，插入深度为两个节间。在插后,周时间内，维持土壤湿润，插枝就能产生新根。有些插枝地下部分会结出块茎，应及时除去，否则这些插枝不能生根，最后会枯死。经过2周多的生长时间，插枝就可以多移栽，或供作进一步切取插枝的母株，或让其块茎提供一级原种。母株应经常更新，防止因太老导致生根很困难。 (,) 组织培养切段繁殖利用试管保存无病毒植株资源是一有效途径。试管植株体积小，占用的空间少，可大量地保存植株。长期保存马铃薯无病毒试管植株的方法有两种: 继代培养: 对保存的无毒不断地继代培养，每个品种可以接种2,10瓶。为便于保存可选用较大的150ml三角瓶，内加入一半以上体积的培养基。基琼脂含量要高于一般培养基， 可用不含激素牟基本培养基，以延缓小苗生长。每瓶接种2,3个切段。培养温度可在5,25?，在较低温度下，保存的时间更长。用不含激素的基本培养基。光照度为1000lx。为样每隔2,3个月继代培养一次，达到保存的目的。 低温保存:当试管的植株长至2cm左右进，放入温度为4?的冰箱中，并放在暗处保存，可达1年左右。 二、番茄的组织培养 (一)、形态特征和生物学习性 1( 形态特征 番茄属茄科草本植物。苗期直立生长，成熟期呈匍匐生状态，植株高大，生长势强。番茄茎节上还能长出不定根，如将一段枝剪下，能发育一株新个体，番茄的叶片为长羽状，在叶轴上生有裂片，顶生裂片，小裂片，间裂片，这些裂片是叶的深裂，缺刻的变化。两性花，聚伞花序，小果型品种多为总状花序。番茄子为扁平短卵形，在一端的边缘有一个向内凹陷， 4年。 种子外面覆以粗毛，呈褐色或黄褐色。种子较小，寿命3, 2(生物学习性 番茄属于喜温性蔬菜，较耐低温，但不耐炎热，在月平均温度18,25?的季节里生长良好，为喜光性作物，需12,14h/d，光照度为40000,50000lx。对水分需求量极大，要求土壤湿度在65%,85%，空气湿度50%-60%为宜，番茄对土壤条件要求不严格，肥沃的壤土利于高产，此外在有机肥充足的情况下，通气良好的砂土壤也能获得高产。番茄对土壤要求酸碱度是pH值5,7，适于微酸性或中性土壤。番茄是最需肥的一种作物，据测，亩产5000kg番茄，需吸氮17kg, 磷5kg,钾26kg。 (二)、组织培养 番茄组织培养的方法是取番茄幼嫩叶片外植体经清水洗涤，在无菌条件下，用0.1%升汞浸泡4min，再用无菌水冲洗3,4次，然后切成0.5cm×0.5cm小块，接种于诱导培养MS+BA2mg/L+IAA1mg/L中。培养温度25?，每天光照10h，光照度2000lx。6d 后叶片开始膨大，边缘有小突起产生。并向外反卷;16d后长出大量愈伤组织，呈浅绿色或淡白色，质地较密，但无芽产生。当其增至0.8,1cm时，挑选新鲜、上部稍带淡绿色点的愈伤组织转入分化培养基MS+BA4mg/L中，一星期后均有小芽产生;15d后，将较大的芽转接到生根培养基MS+IAA2mg/L中，6d左右下部产生白色小点，并逐渐形成白色根，11d后即形成完整植株。将培养有根试管苗的瓶口打开。煅炼3d后取出，洗去根上带有的培养基，移栽到营养土中，浇透水，并罩上塑料薄膜，以保温保湿，4,5d后去掉薄膜，新叶长出时即定植田间。 (三)、胚的培养 (1)外植体的制备 授粉后30,40d收获果皮完整的果实，果实放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCI中5min，用无菌蒸馏水充分淋洗。果实放在无菌吸水纸上，除去种子上的胶状复被。 (2)培养基 MS培养基类。按常规加蔗糖、肌醇、维生素和琼脂，并附加硫胺素0.3ppm,pH值调节到6.0。用附加2,4-D2mg/L和椰乳100ml/L的MS用做愈伤组织启动和保存培养基。愈伤组织培养基不加维生素。芽再生培养基附加BA1.5，蔗糖浓度降到3%,2%，生根培养基加NAA-2。 (3)培养条件 愈伤组织启动和保存，用暗培，27?。愈伤组织在2周内产生。当见其生长时，应立即继代在新的培养基上。芽再生和生根在室温20,30?.16h/d。每3周芽再生培养一次。3个月内可取得芽，再过3周生根。 第二节 果树的脱毒与快繁 一、苹果的脱毒与快繁 (一)、形态特性和生物学特性 形态特性 1. 苹果(Malus pumila)属落叶乔木，树木高大，生长势强，枝条多直立生长，幼叶和枝上有毛，花淡红或淡紫红色，边缘色泽较深。大多数品种自花不孕，果实由子房和花托两部分组成，果实呈圆、长圆等形状，果皮绿色或红色等。 2. 生物学特性: 年平均温度在7,14?的地区均可栽培，春季8?左右开始生长，平均气温18,24?较为适合。年降雨量600,800mm即可基本满足苹果生长的需要。苹果是喜光植物，需全日照在2200,2800h，可满足其对生长的需要。苹果需要土层深厚，透气性好，保肥力较强，富含有机质，排水良好的沙壤土和砾质壤土。此外苹果喜微酸性到中性土壤，ph值4.0以下生长不良，ph值7.8以上则易发生失绿等缺素症状。易感染苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒等。 (二)、苹果的茎尖培养 (1)从健壮母株上，选取带芽或茎尖的茎段，先用70%,75%的酒精浸30,60s，再用10%的次氯酸钠溶液浸泡10,15min，或用0.1%升汞液浸5,7min，最后用无菌水洗3,5次。 (2)剥取茎尖材料接种。为了培养无病毒苗，取的茎尖材料应小，一般为0.1,0.2mm。为了加速无病毒材料的繁殖，应切取较大的茎尖，约0.3,0.5mm大小，甚至带芽的较大茎段，茎尖的大小同培养的难易有关，大的分化率高，分化速度快。所以除了特殊的目的外，宁肯用较大的茎尖。 (3)把茎尖接种在MS或LS+BA2mg/L+300,500CH或LH+3%蔗糖的培养基上，诱导芽的分化。在25,30?和光照下，先培养7,10d，见茎尖膨大转绿，再培养在黑暗中，可加快分化和绿化苗的生长。一般在暗培养中增殖2,3代。随后要转入光照下 ，以使苗生长健壮。光强以1500,2000lx为宜。 (4)把伸长的芽接种到MS+BA0.5,1mg/L+CH300培养基上，这时苗会长大并产生丛生苗。每4,8周可分别繁殖一次，每个月约可增殖5,10倍。 (5)切取2cm以上的带顶芽的苗切段，插入1/2MS或其他低盐培养基(如White和Nitsh)中，附加IAA1、IBA0.2和GA33，可有效地促进生根。对生根困难的苹果砧木M9的试管苗生根，以先接种在含有IBA2、162mg/L根皮酚的LS培养基上，培养4,7d后，转入无激素的LS培养基，生根快而频率高。 (6)苹果的试管苗也可以不进行生根，而直接嫁接到苹果矮化砧木上，既可保持树体有良好的矮化特性，又可通过采用无病毒繁殖材料妥善地解决无病毒繁殖问题。 (7)生根苗移出进行砂培2,3周，最后移到土壤中，其成活率可达26.7%,56.9%。 (三)、苹果的花粉培养 (1)选取小孢子处于单核期的花蕾。小孢子单核期的花芽外部形态特征是:花芽已充分开放，有4,5片叶完全展开，中心花蕾吐红，周围花蕾明显增大，但花序尚未分离。 (2)把花蕾插入水中，放在1,3 ?的冰箱上预处理。 3)取花蕾在70%的酒精浸约0.5min，再在10%漂白粉上清夜中浸15,20min，无菌水( 冲洗3,5次。 4)胚状体的诱导。从花蕾中取出花药，接种到MS+2,4-D0.4+KT0.2mg/L+IAA4mg/L+3,( 8%蔗糖的固体培养基上培养，每瓶30,50个花药。在25,30?下培养70d后，由变褐的花药裂口处开始产生胚状体。 (5)无根苗的诱导。把产生胚状体的花药接种到 MS+IBA0.5mg/L+GA0.1mg/L+BA1mg/L+3,5%蔗糖的固体培养基上培养，在25,30?和光照3 10h下，约经40,100d以上，胚状体可形成次生胚状体或丛生芽，进而发育成无根苗。 (6)根系的诱导。切取无根苗，转接到1/2MS+IAA1.5mg/L+15,2%蔗糖的固体培养基上培养。约经15,20d，小苗茎基部长出根，形成完整植株。也可用50,100mg/L IBA溶液浸泡苗梢基部15,30min，再插入无生长素的培养基上，也能较顺利地诱导生根。 (7)花粉植株的移栽。在春、秋季进行，保持15,20?和高空气湿度，一般可使成活率达到40%以上。 (8)对有些不易生根和提早开花的植株，可用嫁接法进行繁殖。 (四)、胚的培养 (1)幼胚培养一般在授粉后30,50d内取幼果，因这时种子内的胚已开始发育，较易培养成功。成熟胚培养取自处于成熟期果实的种子。胚培养的材料只需进行表面消毒，一般用70%酒精擦拭即可。 (2)切开果实，取出种子，剥出幼胚或成熟胚，接种在BA0.25+IAA0.5mg/L的1/2MS培养基上。培养条件为25,30?和1500,2000lx光照14h。 (3)分化增殖时，把苗切段移植到加有BA0.5,1.0mg/l和CH300的1/2MS培养基上 ，在光下培养，可使绿苗得到增殖和生长。 (4)苗的生根或嫁接和移栽方法，同茎尖培养。 (五)、栽培管理 1(育苗 苹果育苗主要通过嫁接，需进行砧木和接穗的选育等过程，这里就不再介绍，可翻阅有关书籍。 2(土壤管理 土壤要求深翻，以创造苹果根系生长的有利因素。翻时，表土与底土分别放，填土时，表土放在底层，底土放在上层，翻时最好结合加施有机质肥料、或混施肥料。注意不要伤粗根(直径1cm以上)，还要避免暴露时间太久，防止日晒或冻伤。填土后注意湿度，土干要灌水，雨季注意排水，以免水泡伤根。 3(施肥时期和方法 (1)基肥 主要是迟效性肥料，能较长期的供应苹果吸收。施肥时期，结果树一般在苹果采收后，秋、冬季生长高峰来到之时，即8月下旬到9月，最好在秋稍停长后即进行。基肥以环状施肥法为主。 (2) 追肥 应根据一年生长物候期的需要及时补给速效性肥料，以调节生长与结果的关系，也为下年打好开花、结果的基础。追肥一般分为以下几次:开花前追肥、花后追肥和秋季稍停止生长后追肥。追肥用放射状沟施。 3)根外追肥 也叫叶面喷肥，如一株20年生的苹果树，根部施肥用尿素2.5kg，根( 外追肥一般只要100,200g。根外追肥比根部追肥效果快，如用氯化钾进行根外追肥30s后在叶片内就有钾的成分存在，一般2h后即可被吸收利用。根外追肥，还可以同防治病虫害喷药相结合，可以节省劳力，且简单易行。根外追肥，最好是在较为湿润和无风的天气进行，以早晨露水未干或傍晚时进行较好。干燥多风的情况下，水分蒸发快，浓度容易升高，往往引起药害。 4(灌溉和排水 苹果的需水临界期是在春末夏初新梢迅速生长、叶幕大量形成时。此时正是我国主要苹果产区的干旱季节。当土壤含水量少于土壤田间最大持水量的60%,80%时，就需要灌水。为了防止果园的冬旱，在苹果落叶土壤封冻时，要灌封冻水，以提高果树的抗寒越冬能力。目前苹果园多采用喷灌、滴灌或渗灌等方法。 5(疏花疏果，调整负载量 达到结果期的苹果树，以及进入盛果期的苹果树要促进形成花芽。有了花芽，还要千方百计的保花保果，既要开花良好，又要座果率高。若座果过多，须进行疏花、疏果来调整负载量。疏花疏果的基本理论依据是叶果比。国际上公认的苹果叶果比约为30,40:1。疏花疏果可采用手工和化学疏花疏果等方法。 6(整形技术 现在通用疏散分层形，其主要的结构为: (1) 主干，一般高50,70cm。 (2)全树有主枝5,6或7个。第一层3个主枝邻接或临近，相距在20,40cm之内，在1,2年之内选定。主枝的开张角在60,70度。第二层1,2个主枝，第三层2个主枝(三杈枝落头)。 (3)层间距，第一层主枝(基部3个主枝)距第二层主枝层间距80,100或120cm。2,3层的间距可50,60或70cm。 (4)侧枝，基部3个主枝各有侧枝2,4个，上层主枝各有侧枝1,3个。 (5)树高，中心干全长2,2.5m。树高在4,5m，冠径5,6或7m。从1年生苗定植算起，平均每年留成一个主枝。到落头完毕，约13,15年定形。 7(修剪技术 可分为休眠期修剪(冬剪)和生长期修剪(夏剪)。这里主要介绍前者。冬季修剪在调节生长与结果矛盾中所要达到的主要作用:一是促使一部分枝条加强生长，恢复树势，延缓衰老:二是促使一部分枝条能形成花芽:三是有花芽的结果枝促使其结好果，提高质量。即在树冠中，合理的形成三类枝条，即生长枝、成花枝、结果枝。也就是为了克服大小年，使树冠内形成比例适当的三类枝。具体剪法和反应的主要趋势如下: (1)苹果枝梢自然生长规律是一年比一年短。为了加强生长，对一年生枝在充实满芽部位中截，则有利于中截枝所发新梢的生长。 (2)直立封顶枝(大叶芽枝)能冒条旺长，枝、干所发生的徒长枝，都是自然更新现象，都有利于生长。 (3)回缩修剪多年生枝，缩剪到有向上的壮枝、壮芽处，起到更新复壮作用，有利于生长。 (4)树冠过于郁闭，适当疏剪外围枝，有利于通风透光，对整体生长与成花都有利。 (5)长放是有利于成花的剪法。新梢任其自然生长，必然按其本身生长发育规律，一年比一年短，因而停止生长早，有利于营养物质的积累，促进花芽分化，形成结果枝。 (6)打盲节，在春秋梢交界的瘪芽处短截，它的作用同长放相似。 (7)留橛，剪营养枝留短橛。短橛上留下的都是瘪芽，发出的新梢短，停止生长早，有利于形成花芽。 (8)剪掉封顶枝破顶芽。去掉封顶枝破顶芽使下面一些芽充实饱满程度相似，控制单轴延长生长，可以生成几个短枝，有利于形成花芽。 (9)改变直立枝的方位。拿枝，即修剪时把一年生强旺直立枝，距基部10cm处弯平。拿弯时，使有清脆折裂声，轻伤木质部，改变方位，有利于营养集中于形成花芽。此外，弯、拐、别、压等也起到同样作用。 (10)有花芽的多年生枝，要适当回缩，保留壮枝壮花芽。大年树的一些中长果枝，可破顶芽，减少花量，当年在形成花芽。 二、葡萄的脱毒与快繁 (一)、形态特征和生物学习性 葡萄(Vitis vinifera)在全世界的果品生产中，产量及栽培面积一直居于首位。其果实除作为鲜果食用外，主要用于酿酒，还可制成葡萄汁、葡萄干和罐头等加工品。葡萄不仅味美可口，而且营养价值较高。成熟的浆果中含有15%,25%的葡萄糖和果糖以及多种对人体有益的矿物质和维生素。 (1) 形态特性。葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。长柔弱，髓部较大，组织较疏松。节上具有卷须，使新梢可以缠绕其他树木或支架上向上攀援。叶近圆型或卵型，3,5裂，基部心形。圆锥花序。 (2) 生物学习性:葡萄是深根性作物，其根系在土壤中的分布状况，随气候、土壤型、地下水位、栽培管理方法的不同而发生变化。但在大多数情况下，根系垂直分布最密集的范围，是在20,80cm的深度内，但在不同的栽培管理条件下，根系的分布也将随着发生变化。 葡萄的根富含肉质，髓射线发达，能贮藏大量的有机营养物质，如糖、蛋白质和单宁等。葡萄的枝蔓上很容易产生不定根，故在生产上多采用扦插法繁殖。在大气潮湿的情况下，枝蔓上往往长出气生根。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，大部分欧洲种葡萄的根系在,5,,7?时即受冻，某些美洲种能忍受,11,,12?左右的低温。 (二)、葡萄的组织培养 1.选材接种 从田间生长旺盛的葡萄新梢顶端取1,2?的茎尖。除去幼叶后在5%次氯酸钠溶液中浸泡2,3min，消毒灭菌，以后用无菌水冲洗3次，再在0.1%升汞溶液中浸泡约2min，以后用无菌水冲洗4次。在无菌条件下分离出约2?长的茎尖，接种到培养基上。 2.培养基 葡萄茎尖分化培养基以MS培养基(无机盐减半为好)，再添加BA1,2 mg/，NAA0.01 mg/L，LH100 mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。 3.茎尖的分化 葡萄1,2?茎尖接种后成活率皆较高见表12-1，接种成活的茎尖1个月左右开始分化幼叶和侧芽，2个月左右，由于侧芽的不断增生，形成芽丛。由于不同品种对BA和NAA的反应不同，故生长有明显区别，巨峰、大粒白香蕉、赤霞珠等品种，由于顶端优势强，侧芽生长势弱，故增殖率低，但成苗率高;白羽、白雅、白谢希、贵人香等大多数品种侧芽分生能力强，可在幼茎上多次分枝，故成苗率低;2号大白粒等个别品种，则幼茎短缩膨大呈球形，很难成苗。 4.茎尖苗的生长 在茎尖分化培养中产生的成苗率低和成苗困难，密集生长的芽丛，可将分化培养基中的BA浓度减低至0.5mg/L，同时添加GA0.2mg/L，则经1个月的培养，就3 可长成2,3?高的幼茎。此外黑暗处理对幼茎的伸成，提高成苗率，也有明显的效果。详见表12-2。 5、生根与移栽 切取2,3cm的茎尖苗，接种到MS+IAA0.4 mg/L+NAA0.05 mg/L培养基中，进行生根培养，其中添加和琼脂0.4%，1,,2周后幼苗开始生根，1个月形成完整的根系，同时具备5,6片新叶，生根率一般在90%以上。移栽时洗去根上的培养基，栽到蛭石基质内，使根系具有良好的通气条件，种后盖上塑料薄膜，经7,10d锻炼适应后可去掉，移栽成活率在90%左右。提高葡萄试管苗移栽成活率要注意:1、幼苗生长要健壮;2、要保持空气湿度;3、根际通气良好;4、要尽量减少杂菌污染;5、浇灌的溶液浓度不能过高。 (三)、葡萄无病毒苗的培养 葡萄受到26种病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少，风味变劣。葡萄卷叶病是危害最大的病毒病，在不同品种上表现不同，但多数叶片变红，自基部起向内卷，似革质增厚，粗糙易脆;有的叶脉绿色，叶肉黄色;有的品种则表现矮化。此病可减产10,50%，造成果实糖分含量降低，成熟期推迟2周，紫葡萄果色变绿。 现在已广泛用茎尖组织培养和热处理结合的方法来培育葡萄无病毒苗。茎尖脱毒的方法也兼有短期大量繁殖的作用，所以应用上具有很大的意义。 1、 热处理理脱毒 热处理可以 有不同的方法: ( 1)葡萄无性系处理材料置于38?，CO21200×10-6的人工空气侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽中除去扇叶病毒。卷叶病毒则处理3个月或更长时间也难以除去。黄点病毒处理11个月也无效。 (2) 将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38?的环境中保持2个月，以后取出枝条和接种芽继续生长。 (3) 直接将葡萄蔓浸泡在50?的 温水中10,20min，可以治疗皮尔斯病，但不能治疗黄点病及卷叶病。 2、 组织培养脱毒技术 茎尖组织培养脱毒要经过7个时期:A茎尖接种后的变绿增长期;B形成畸形叶期;C形成许多芽和芽的伸长期;D许多芽展开小叶伸长期;E诱导发跟期;F地上部和地下部的伸长期;G上盆期。 (1) 茎尖接种后变绿、增大期的培养 从被病毒感染的植株上取材，在5?下冷藏保存。以后在25?，相对湿度80%，16h的长日照条件下水培。再从长出新芽经消毒后切取茎尖进行培养，大小约0.2,0.3mm(带一个叶原基)。以MS培养基作基本培养基本能添加GA3，否则培养的茎尖大部分黄化，生成膨软的组织，一转移就完全损失。实验结果以1/2MS，添加NAA0.1 mg/L，BA1.0 mg/L，Kt0.5 mg/L，腺嘌呤4.0 mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6.0，pH5.8为好。培养的茎尖成活率较低，仅13.3%。 (2) 从畸形叶和茎叶伸长期 处于变绿、增大起的茎尖如继续在上述培养基进行继代培养。不仅不生长，最后还会枯死。将原来培养基中的NAA0.1 mg/L，改换为IAA0.2 mg/L，采用1/2MS，添加IAA0.2 mg/L，BA0.1 mg/L，KT0.5 mg/L，腺嘌呤4.0 mg/L，蔗糖30g/L的培养基。则有34.1%的茎尖可生长到达畸形叶期。 (3) 小叶展开到到上部分和地下部的生长期(从D期到F期) 为诱导生根，将2cm左右的芽切下，转入Galzy(1964)培养基，添加NAA0.1，经60d的生长，发根率可达到89.8以上，而地上部分也进行生长的只占10.2%。为促进地上部也同时进行生长，在诱根培养20d，根长0.5cm左右时转入无激素的Galzy(1964)培养基，，则有73.7%的植株地上和地下都可以同时生长，经1个月培养，地上都可达4,5cm，叶数可达5片左右。 (4) 上盆(G)期 从培养瓶中取出苗时要注意绝对不要伤根，家昂琼脂冲洗掉，以后种在以蛭石为基质，直径6cm的塑料钵中，栽培温度15,25?，光照度为3000lx;光照时间为一天16h,相对湿度80%的锻炼室中进行。约培养20天，地上部开始伸长，发绿，则可移至通常的温室中进行隔离栽培。 ( 无病毒苗的大量繁殖 2 处于小叶展开期的材料，茎叶常集中在一起，成为丛状，可以一个个进行分离，再接种到1/2MS培养基上，添加IAA0.2 mg/L，BA1 mg/L，KT0.6 mg/L，腺嘌呤4.0 mg/L，蔗糖15g/L的培养基，即可使小叶展开、伸长，得到植株。这样反复继代培养，可繁殖得到大量的无病毒苗。 3、 葡萄无病毒苗的鉴定和生产 从组织培养得到的葡萄无病毒苗，要经过指示植物法等鉴定途径，确认无病毒存在，才可以繁殖生产，推广应用。葡萄卷叶病毒尚无草本寄主。常用芽接指示植物，品种有Baco、Mission和Ln-33，其中以Ln-33反应较灵敏，有的每株嫁接后当年秋天发病，而Mission需经4年才表现症状。Ln-33易繁殖，易嫁接，抗霜霉病，无自然感染的黄点病，嫁接后只表现温和症状，是现有的最好指示植物。葡萄黄点指示植物有Ln-33、Baco-22A、E sparte是最好的指示植物，春天嫁接，第二年秋天即出现症状。 (四)、子房(Ovaary)的培养 葡萄的子房培养无论对葡萄基础生理研究和园艺方面的应用皆有一定意义。 (1) 分离培养。取开花前两天的花，经灭菌后，小心地去掉花冠和雄蕊，而不要伤害子房，用小刀将子房从基部切下，接种到Nitsch培养基上。培养室保温25?，光照2500kx, 每天照明12h。 (2)有机添加物的作用。有机添加物对培养子房的发育皆有促进作用，依其作用大小依次为麦芽提取液、鲜葡萄汁、黄瓜汁和葡萄蔓汁。 (3)生长调节物质的作用。葡萄子房培养在添加有植物生长调节物质的培养基中，可促进单性生长，并在培养15周后在有些处理中可以观察到浆果变色的情况。 从培养子房的体积看，在基本培养基中添加有BA0.2的处理，要超过对照(无激素)。子房体积最大的为添加BA0.2 mg/L、NAA0.2 mg/L、GA1 mg/L。 3 (六)、栽培管理 1、 栽植前的土壤准备 葡萄是深根性作物，必须在定植前对土壤进行深耕熟化与改良，为根系创造适宜的生长条件，才能使植株保持健壮和稳产，高产。在平地建立葡萄圆，一般采用大棚架栽培的情况时带壮栽植沟的深度为1m左右，宽度为1.5m左右，长度与行长相等。如土壤结构不好，则采用客土法或填入粗有机质加以改良。深翻一般在秋季进行，在土壤结冻前，将取出之土填入沟内，然后充分灌水，使土壤下沉，以2便与在次年春定植苗木。 2、栽植密度 影响葡萄栽植密度的主要因素包括:气候、土肥大会条件、品种、架式和管理方法等。 以架式与整枝形式为例，架式与整枝形式一般棚架栽培要求的行距较大，而篱架栽培要求的行距较小。在行距超过4 m的情况下，为了更有效的利用行间的土地面积则以采用棚架栽培为有利。整枝形式与栽植密度有密切关系。大型整枝要求株行距要大，反之则较小。棚架龙干式整枝，往往是根据主蔓的数目确定株距。篱架上应用龙干式整枝，则根据龙干式的长度确定株距。篱架在采用大型农机具(如果收机、修剪机)、高主干整形的情况下，行距不能小于2.7,3m，在采用以手工劳动为主的情况下，行距还可适当缩小。 4、 定植时期和方法 我国北方各省一般以春植为主，当昼夜平均温度达到10?左右时即可栽植。苗木自储藏室内取出后，最好在清水没浸泡1,2d，然后根据栽植深度以及苗木质量进行修剪，地上部剪留长度以栽植后地表上能露出2,3个节为度。栽植后露出地面的枝条需要用土覆盖，培土高出顶芽2,3cm即可。以防止春季早的风将枝条抽干。带芽眼膨大后，再逐步弄松或撤去浮土，如覆土浅而不板结，幼芽可自行拱出土面。栽植深度一般多在30,40cm左右，在气候炎热而干旱，土壤为沙性时，或在严寒地区，为了减轻根系冻害，可适当深栽。 5、萄的架式、整形和修剪 葡萄的架式主要可分为柱式架、篱架和棚架。整形主要有头状整枝、扇形整枝和龙干整枝。修剪方式可分为短梢修剪(结果母枝剪留1-4节)，中梢修剪(5-7节)，长梢修剪(8-15节)三者应协调组合，有条不紊。 (1) 架式 葡萄是多年生蔓性植物，，枝蔓细长而柔软，因而在栽培上须设立支架。葡萄的支架主要有柱式架、篱架、棚架三种类型。棚架是在垂直的立柱上架设横梁，横梁上牵引铁丝，形成一个水平或倾斜的棚面，葡萄枝蔓分布在棚面上，故称为棚架。这种架式在我国的历史最悠久，分布也很广泛，在平地及丘陵上都可采用。 (2) 整形 葡萄的整枝形式有头状、扇形及龙干形我们 主要介绍龙干整形中的"高宽垂"模式。 (3) 修剪 冬季修剪对结果母枝剪留的长度有:短梢修剪，中梢修剪和长梢修剪。在采用中、长梢修剪时，为了控制结果部位的外移和保证每年获得质量较好的母枝，一般都采用双枝更新的修剪方法。即在中梢或长梢的下位留一个具有2个芽的预备枝，上发出的2个新梢，靠上位的仍按中、长梢进行修剪，下位的仍剪留2个芽作为预备枝。短枝修剪2则不需另外留预备枝，短梢本身起到结果母枝和预备枝的双重作用。但在每年冬季修剪时仍应尽可能选留靠近主蔓的新梢作为短梢结果母枝，使结果部位不至外移。当枝组基轴过长时，宜及时利用下部潜伏芽发出的新梢进行回缩更新，使结果部位不致远离主蔓。 5、施肥方法 基肥主要采用池内撒施或沟施，或两种方法交替使用。 (1) 池面撒施 棚架栽培的葡萄，为了便于灌水，在植株周围往往垒有池埂，池面宽 30cm厚的一层，以少伤根为原1.5,,2.5m，长3m左右。施肥时将池内的表土取出15,, 则。再将肥料均匀撒施于池内，然后将表土填回至地面高度。 (2) 沟施 在距根干50,100cm处挖条沟、轮状或放射状沟，棚架也可在架下与架后，每年轮流施肥，沟深宽各30,40cm，施入肥料后覆土。开沟的深度、宽度及与根干的距离，可根据根系分布的深浅及远近加以伸缩，以不大量伤根为原则。 6、灌水 葡萄在新梢迅速生长期和浆果迅速膨大期对水分的反应最为敏感。生长前期缺水，会造成新梢短、叶片和花序小、座果率降低，对当年产量有严重影响。在浆果迅速膨大初期 缺水，往往对浆果的继续膨大产生不良影响。即使过后有充足的水分供应，也难以浆果达到正常大小。在果实成熟期轻微缺水可影响浆果成熟和提高果汁中糖的浓度。但严重缺水则回延迟成熟。并使浆果颜色发暗，甚至引起日烧。浆果成熟期水分过多，常招致含糖量和品质降低。 灌水时期、次数和每次的灌水量应根据当地的具体情况，予以灵活掌握。一般可参考下列几个只要的时期进行灌水。 (1) 出土后至萌芽前灌一次水。这次灌水可促进植株萌芽整齐，有利于新勺早期的迅速生长。 (2) 花序出现至开花前灌水1,2次，可促进新梢、叶片迅速生长和花序的进一步分化与增大。 (3) 开花后至浆果着色以前，可根据降雨量的多少和土壤类型灌水2,3次。这一时期内进行灌水有利于浆果迅速膨大，对增产有显著效果。酿造及制干用品种，在采收前1,3周不宜灌水，以免降低浆果的含糖量。 (4) 防寒前灌一次封冻水，有利于减轻根系越冬冻害和减轻下一年早春的干旱。 7、采收 鲜食用葡萄如采收过早，色泽与风味均差，而且会使产量受到损失，采收过迟会降低浆果的贮运性，一般在浆果接近或达到生理成熟时就应及时采收。酿造用葡萄一般需要根据不同酒类所要求的含糖量进行采收。 (1) 采收方法 采收时用手指捏住穗梗，用疏果剪留穗梗3,5cm左右剪断，随即放入果筐，送到果场分级包装。 (2) 包装 远途运输的葡萄必须加以妥善包装，外销主要采用小型木箱或塑料箱，内径长40cm宽30cm，高13,15,cm，箱内四周上下均衬垫瓦棱纸板。纸板上留有通气孔，每穗葡萄先用一张蜡纸包好，逐穗放入箱内，最后加盖钉牢或缚牢。 (七)、葡萄的冬季防寒 一般欧洲种葡萄的芽眼，在冬季只能忍受-16,,-18?左右的低温，根系的抗寒力更低， 一般在土温达到-5,-7?时即发生冻害。因此，在我国北方大部分地区葡萄越冬时需要埋土 地上实埋防寒法。将枝蔓压倒顺着行向平放在地面上，用草绳捆成一束，然后直接防冻。 用土覆盖，这是在华北、西北和东北南部地区广泛采用的方法。在比较寒冷的地区，可在枝蔓上先盖一层有机物，然后覆土，覆土时土块一定要打碎盖严，不使透风，取土部位尽可能离植株远些，以减轻根系冻害。埋土防寒通常是在冬剪之后至土壤结冻以前进行，华北地区大致在11月上、中旬，东北中部地区在10月下旬。东北北部地区在10月中旬。 三、草莓的脱毒与快繁 (一)、形态特性和生物学特性 草莓为重要的浆果植物，栽培分布很广，其总产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位。草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质，维生素等。草莓可鲜食，也可加工成果酱，果酒等。其颜色鲜艳，是良好的配餐食品。草莓繁殖容易，结果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光温室，使草莓的成熟期大大缩短，从11月份到次年的6月份，都有新鲜的草莓上市，填补了水果的淡季市场。 1. 形态特性 草莓(Fragaria)属多年生草本植物，植株矮小，呈半平卧丛状生长，根系属须根系，在土壤中分布较浅。草莓的茎呈短缩状，分地上和地下部分，地上短缩茎节间极短，节密集，其上密集轮生叶片，叶腋部位着生腋芽。地下短缩茎为多年生，是贮藏营养物质的器官，也可发育成不定根。匍匐茎是草莓的特殊地上茎，是其营养繁殖器官，茎细，节间长，一般座果后期发生。叶属于基生三出复叶，呈螺旋状排列，在当年生新茎上总叶柄部与新茎连接部分，有两片托叶顶端膨大，圆锥形且肉质化。离生雄蕊20,35枚。雌蕊离生，呈螺旋状排列在花托上，数目从60,600不等。花序为二歧聚伞花序至多歧聚伞花序。果实为假果，主 要是花托膨大肉质化形成，瘦果以聚合果形成生于花托上。果实成熟时果肉红色，粉红色或白色。 2. 生物学习性 草莓根系在土壤温度达到2?时开始活动，在10?时开始形成新根，根系生长的最适温度为15,20?，秋季温度降低到7,8?时生长减弱。春季气温达5?时植株开始萌芽，茎叶开始生长。草莓是喜光植物但又比较耐阴。光照充足，植物生长旺盛，叶片颜色深，花芽发育好，能获得较高的产量。相反光照不良，植株生长势弱，叶柄及花序柄细。叶片色浅，花朵小，果实小，着色不良。草莓的根系分布较浅，加上植株矮小，叶片较大，因此蒸发量大。在整个生长季节，叶片几乎都在不断地进行老叶死亡、新叶发生的过程，叶片更新频繁。这些特点，决定了草莓对水分要求较高，但在不同的生长发育时期，对水分的要求不同。开花期土壤的含水量应不低于最大田间持水量的70%。果实膨大及成熟期土壤含水量应不低于 10月份，土壤持水量达60%即可，草莓不耐涝，要求土壤既有充足的水分80%，而秋季9， 供应，又要有良好的通气条件。草莓对土壤适应性强，在各种土壤上都能生长。但由于是浅根性作物，要求肥沃、疏松、透水、通气的中性微酸性或微碱性土壤。 (二)、栽培方法 在自然条件下，草莓用匍匐茎分株法繁殖，这种方法繁殖系数高，保持了母本的优良性状。在繁殖囿设1m宽行距，50,60cm株距定植，从5月到9月均可繁殖。囿内保证肥水供应，保持土壤湿润、疏松，减少结果量。匍匐茎发生后，将其向母株四周拉开，排列均匀，并在偶数节上压土促发根系，每条匍匐茎上可形成3,5个壮实的子幼苗，待茎苗长到3,4片叶时可以移出，作为定植苗用。移出时每株小苗靠母株一侧的匍匐茎留2cm长剪断。起出的苗可进行假植，假植宽度以15×15cm为宜，假植深度以根和叶柄分界线埋入土壤1cm为宜，假植后要做好管理工作。 (三)、草莓脱毒苗的培养 1.热处理脱毒 将草莓植株在40,41?温度下处理4,6周，然后取微茎尖培养。 2. 微茎尖脱毒 (1) 初代培养 取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2,4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透。在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度。0.2mm的茎尖无病毒率可达到100%，但接种后的成活率下降，并延长培养时间。茎尖分离后，迅速接入MS+BA0.25+NNAA0.25或White+IAA0.1培养基中。培养条件为22,25?，日照16,18h光强3000lx。经2,3个月的培养，可生长分化出芽丛，一般每簇芽丛含20,30个小芽为适。注意在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠，所以较高的温度和充足的光照时间必须保证。 (2) 继代培养 把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，以利分株，待苗长大到 1,2cm时，可将芽丛小块分成单株，再转入前述的分化培养基中，又会重复上述过程，达到扩大繁殖的目的。 (3) 生根培养 在培养基中加入NAA1或IBA1，使发根整齐，由于草莓地下部分生长加快，发根力较强，也可将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根。 (4) 驯化 用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带琼脂培养基。事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂。栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合。 栽后的试管苗要培养在湿度较大的空间内，一般加设小拱棚保湿，并经常浇水，以增加棚内湿度，以见到塑料薄膜内表面分布均匀的小水珠为宜。约过7,10d后。当检查有一定的根系生出，可逐渐降低湿度和土壤含水量，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。 3(花药培养 花药培养操作简单，因经愈伤组织途径，再分化得到的即为无病毒苗，所以可免去病毒鉴定工作。 (1) 取材与培养 取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿。将处理放入3,4?冰箱中低温保存3,4d。经预处理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒10min，用无菌水冲洗3次。然后在超净工作台上剥取花药，立即接种。花粉发育时期可采用醋酸洋红压片鉴定，培养基为MS+2，4-D0.4+IAA2。去分化阶段培养条件为24,26?，10h/d，1500lx,20d后可产生乳白色的愈伤组织。 (2) 植株分化 将诱导出的花药愈伤组织转移1/2A基本培养基，添加GA0.5，BA0.5和三十烷醇4。愈伤组织经培养后很快转绿，以后微带淡紫红色，15d后在表面分化出半球形小突起，转为绿色。20d后分化出幼叶、幼茎，并有不少突起物，以后陆续分化出新梢。 (四)、草莓无病毒苗的鉴定 草莓花药培养得到的为无病毒苗，而用生长点培养得到的植株，则必须经过病毒鉴定，确定其不带病毒，才可以大量繁殖，用于生产。 1. 草莓病毒的种类 草莓病毒主要有四种，为斑驳病毒，皱叶病毒，脉结病毒和轻型黄边病毒。斑驳病毒在EMC指示植物上表现不整齐的黄色小斑点;皱叶病毒在指示植物UC-1上产生不整齐的小斑点，以及不整齐的叶脉，叶柄暗褐色;脉结病毒在指示植物EMC上表现小叶向后反转成风车状，尖端卷曲，叶脉呈带状褪绿;轻型黄边病毒对EMC指示植物产生红叶，数日即枯。 2. 草莓病毒的鉴定方法 因草莓的病毒在通过汁液接种不感染，所以通常采用小叶嫁接法来进行鉴定。 首先从被鉴定的草莓采集长成不久的新叶，除去两边的小叶，中央的小叶带1,1.5cm的叶柄，把它削成楔形作接穗。而指示植物则除去中间的小叶，在叶柄的中央用刀切入1,1.5cm，再插入接穗，用线把接合部位包扎好。为了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。为保证成活，在2周内，可罩上塑料袋，置于半见光的场所。约经2周时间，撤去塑料袋。若带有病毒，嫁接后1,2个月，在新展开的叶、匍匐茎或老叶上会出现病症。 (五)、草莓无病毒苗的繁殖和利用 1. 防止蚜虫的危害 草莓无病毒苗的繁殖重要的是要防止无病毒苗的再度污染。由于草莓病毒主要是蚜虫传播的，所以要搞好防蚜虫工作。传播草莓病毒的主要有草莓茎蚜、桃蚜和棉蚜。其中分布最广泛的是草莓茎蚜，身体着生有钉状的毛，可以寄生寄主的全株各个部位上。草莓病毒通过蚜虫吸吮汁液而得到传播，短时间即可完成。防治时可使用马拉松乳剂，氧化乐果乳剂等接 ,10月，特别是9,10月一次，可防止蚜虫的越冬。 触杀虫剂，防治期5,6月，9 为保证种苗的无病毒，在原种种苗生产阶段，应在隔离网室中进行。传播草莓病毒的蚜虫较小，可以通过大于1mm网眼，故应采用0.4,0.5mm大小的规格，其中以300号防虫网为好。 2.程序及提高繁殖率的措施 草莓无病毒苗的繁殖程序可分五步，包括:脱病毒鉴定生产出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖，生产用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔离室中进行，后一步在露地进行。为提高无病毒母株的繁殖株数可采用赤霉素处理和摘蕾的方法。赤霉素处理用5×10-6的浓度，在5月上旬和6月上旬分两次进行。摘蕾可减轻母株的营养负担，促进匍匐茎的大量发生，田间地每一株可繁殖150,200株。 3( 生产管理工作 母株必须保证每株有大于3.3m2的营养面积。再是注意匍匐茎排列位置，不要交措重叠，这不利采苗，采苗也要适时进行。无论秋季或春季种植，繁殖床必须要进行土壤消毒，小面积可用蒸气剂料盒消毒，防治草莓萎缩病、根腐病、萎凋病等的发生。隔离繁殖囿通常施缓放性肥料，每公亩用3ton;为促使匍匐茎发生，要经常灌水。 第三节 花卉植物的脱毒与快繁 一、兰花的脱毒与快繁 兰花系兰科(Orchidaceae)植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。 (一)蝴蝶兰属(Phalaenopsis)的培养 1.茎尖的培养 (1) 将芽除去叶后，用水冲洗，再用10,的漂白粉表面灭菌15min。除去叶原基后，用 5,的漂白粉中灭菌l0min，以后用无菌水冲洗3,5次。 (2) 切取茎尖和各叶基部的腋芽，约2,3mm大小，用小刀切取后直接接种到培养基中。 (3)培养基采用Vacin和Went培养基，添加15,CM进行液体培养，或加9g,L的琼脂进行固体培养皆可。 (4)培养条件为温度25?，光照强度2000Lx，照明16,24h。液体培养基用60r,min的速度进行振荡培养，培养7,10d再转移到新的培养基，培养1个月后转移到固体培养基。在这种条件下培养1个月即可形成原球茎球状体，以后再进行继代培养，不断繁殖原球茎球状体。 2.花梗腋芽的培养 (1)采芽 将带腋芽的花梗进行冲洗，用10,的漂白粉溶液表面灭菌20min，除去腋芽的苞叶，再在5,的漂白粉溶液中表面灭菌3min，无菌水冲洗净。经过灭菌的材料放在培养皿内的滤纸上保存，这样可减少操作转移时空气的污染。 (2)不带花梗组织，仅取腋芽，接种到培养基上。 (3)培养基和培养条件，禾芽用德兰属1号培养基为好，原球茎球状体的繁殖也用采芽所用的培养基;育苗用卡德兰属1号加10,香蕉汁为好，育出的苗鲜重可比不加的重3倍。培养条件是光照强度2000Lx，光照时间每天13h，保持恒温25?。 (4)继代培养，用原球茎球状体繁殖，用培养基进行数代继代培养，不能中止。也不会白化，继代培养时不要切得太小。 (5)育苗，不切成小块继续培养就分化产生叶片，发根前分切移到育苗的培养基，3,6个月可得到能栽植的苗。 3.叶片的培养 从开花植株叶片的培养产生原球茎球状体，这个方法最有希望，但目前较为困难。这首先要从花梗腋芽培养得到植株，再从其切取叶片培养。 (1) 培养准备和接种，采开花或开花后的花梗，表面灭菌后切成约4cm长，除去各节的 叶接种到培养基上。 (2)培养基和培养条件，用Vacin和Went(1949)培养基，添加CM20,，蔗糖2,，琼脂1,，也可不用CM，而加BA5.0温度28?，20?的低温花芽伸长，芽多。光照度500Lx，日照16h。芽不长时，可转移到加BA的培养基，可再生带营养芽的植株。 (3)叶片是从试管内培养的材料上切取，故不必要再灭菌。用 Kyoto改良培养基，加复合肥料3.5g,L、肌醇1000、烟酸1、维生素B11、NAAl、腺嘌呤10、BAl0、蔗糖2,、琼脂1.0,。 (4)叶片的切取培养，切取展开叶最上部先端、中央或基部约6,8mm2大小，接种到培养基上。培养条件为25?恒温，光照度500Lx，照明16h。 (5)继代培养，为繁殖原球茎球状体，用改良的Kyoto培养基进行继代培养，或在Vacin和Went培养基中去掉蔗糖和琼脂，加20,的CM的液体培养基进行振荡培养。 (6)育苗用培养基和育苗方法，育苗可在简单的培养基进行静置培养。原球茎球状体2,3个月即可萌芽，形成叶，以后转移到Kyoto培养基，加10,的香蕉汁，经数月后可得到能移至外面的大苗。 (二)、卡特兰属的培养 1.材料的准备和灭菌 新芽选择5,10cm长，可从基部采芽。先在流水中冲洗，以后切去叶片再行消毒。消毒剂可采用酒精，漂白粉等。 采芽方法是侧芽在除掉1,2个叶后，在节的下面横切，再在叶的两侧纵切，最后再从芽的后面茎1mm深处薄薄切取。顶芽是留一片叶子，余皆除去，再从顶部往下四面进行纵切，最后切1mm3大小。切下的茎尖放在灭菌的培养皿内的滤纸上，接着再接种到液体培养基中。 ,，添加NAA0(1、CMl0,，pH值调整在5.5，速度为2r,采用MS培养基，蔗糖浓度为2 min的液体旋转培养。 2.培养条件和继代培养 培养的温度，以在15,20?为好，这样排出的变褐物质少，成活率高，成活以后，则以保持在25?的恒温以生长好。光照强度以500-2000Lx为好，每天照明16,22h。将采后经2个月液体旋转培养产生的纵切为4，再继代培养，接种的培养基，除基本盐类，还有维生素，氨基酸，NAA0.186 mg/L，Kt0.02 mg/L，GA0.173 mg/L ，蔗糖30g,L，琼脂6g,L，3 不加CM。经营1,2个月所有的球茎球状体可发根。在KC培养基加20g,L的蔗糖发根就慢。长期的液体培养，也会引起材料的变黑、枯死，所以对繁殖不一定有利。 3.防止培养材料变褐 用各种方法防止从茎尖到形成原球茎球状体中组织的变褐，是培养能否成功的一个关键。变褐是由于伤口的多酚氧化酶氧化所致。同时这种物质很快在培养基中扩散，使整个组织变褐枯死。现在还没有防止变褐枯死的方法，但采用下列处理对防止褐变有一定的效果。 (1)采芽后，用无菌水冲洗再接种。 -6(2) 在培养基中加(50,100)×10变褐防止剂芸香甙。 (3) 开始培养到成活，保持温度15,20?。 (4)调整培养基的合适pH值。pH值4.5,5.0时排出的变褐物质最多，而pH值5(5时就少，成活率就高。 (5)6,8月采芽，由于排出褐化物质多，成活率也就低。 二、香石竹的脱毒与快繁 香石竹又名康乃馨，因其花朵绮丽、高雅、馨香，开花时间长，便于包装运输，容易贮藏和保鲜，单位面积产值高，适应于工业化生产，故在世界各地广泛栽培，是世界销售量最高的切花，约占切花销售总额的40,。 (一)形态特性和生物学习性 香石竹为石竹科石竹属草本植物，原产南欧地中海北岸、法国到希腊一带，须根系，茎直立，多分枝，株高70,100cm，茎部半木质化。叶线状披针形，全缘，叶质较厚，上半部向外弯曲，对生，基部抱茎。花通常单生或2,3朵聚伞状排列。 香石竹是一种中日性花卉。喜干燥、通风良好的环境，忌高温多湿，一年四季，除炎热的高温外，其余时间都能开花。香石竹为喜冷凉植物，最适宜的生长温度为19,21?，冬春季节白天宜保持在15,18?，晚间保持在10,12?，夏秋季节白天宜保持在18,21?，晚间宜保持在12,15?。香石竹喜保肥通气和排水好及腐殖质丰富的砂质壤土，土壤通气间隙占30,左右最为理想，最适宜的土壤pH值为6,6.5。 香石竹的主要品系按其来源可分为美国香石竹和地中海香石竹(或称欧洲香石竹)，美国香石竹原产美洲，其适应性强，生长势旺、节间较长、叶片较宽，但耐寒性差，因此适合温室栽培。地中海香石竹原产意大利、法国、美国。植株节间较短，叶片狭长，不易裂苞，较耐低温，产量高。近几年采用美国香石竹和地中海香石竹杂交，培育出一些生长势强、花色艳丽、茎杆强壮、耐低温、抗病性强、产量较高的品种。 (二)、自然繁殖与育苗 香石竹可用扦插、播种等方法进行自然繁殖。 1. 扦插育苗 (1) 插穗 最好采用母本茎中部二三节生出的侧芽作插穗。中部位以下的侧芽较弱，不充实，发根以后生长不好;中部位以上的侧芽，由于节间长，尽管容易发根，但不久生出花蕾，应避免采用。 采插穗时，用左手握住母株，用右手抵住侧芽的中间使之弯曲而扒下，这样不伤母株茎，扒下的插穗需进一步整理。过长的插穗从节的部位折断，保留叶4,6片，插穗长6,8cm。每20,30支扎作一捆，浸入水中，使其吸水30,60min，然后浸入一定浓度的NAA或IBA溶液中，或用市售生根粉处理，以促进生根。 (2)扦插苗床 可采用带有自动喷雾苗床进行扦插育苗。如临时性育苗，最简单的方法是，选择靠近自来水的大棚，做宽度1.2m左右的苗床，里面放人基质。上面安上喷水管道。长度则根据插穗的多少来决定。放入的基质厚约8cm，过厚易潮湿，过薄易干燥。采用珍珠岩与稻糠灰各一份混合的基质，生根效果最好，且生根后苗较健壮;也可就地取河沙、田园土拌和使用。苗床大多建在温室或大棚内，常久用时，可用水泥铺砌成固定式水槽。 (3)扦插方法 扦插事先将基质浇水，株行距1.5×2.5cm，插深1.5cm，插穗垂直于土面，插后立即浇上薄水，使插穗与基质紧密相接。 (4)扦插时间 扦插以春秋两季生根快、成活率高，15,20d左右能起苗，冬季发根较慢，约30,40d左右可起苗。夏季如有自动喷雾的全光浴苗床，扦插成活率也比较高，最快13d左右就能发根。但高温高湿，或排水不畅，很容易烂苗，感病，严重影响成活率。 2.扦插后的养护管理 扦插后的养护管理应根据气候条件而定。通常气温高、苗床水分挥发快，床面喷水间隔时间要求短。反之，冬天喷水间隔要长些。在未生愈伤组织前不得太湿，以防止伤口腐烂，愈合发根后可适当增加水分。在发根前吸水能力较差，必须用草帘遮荫，以防太阳直接照射。 (三)、组织培养育苗 1.取材、灭菌和接种 香石竹组织培养大多取其茎尖作培养材料。从田间或温室中长势健壮无病的植株上选择较为粗壮而处在营养生长阶段带有2,3对成熟叶片的嫩芽，剥去成熟叶片，留下嫩芽，在 ,的酒精消毒1min，再用2,的次氯酸钠消毒15min。，或用0.1,升清水中清洗后，用70 汞消毒8min，最后用无菌水漂洗3,4次，经无菌滤纸吸干水分后，放在干净的培养皿中备用。在超净工作台上剥开茎端，切下茎尖，立即接入预先配置好的培养基上，一般每只三角瓶接人3,5个茎尖。作为快速繁殖，切取0.5cm大小的茎尖进行培养。作为脱毒培养，则要在双筒解剖镜下切取0.3,0.4mm的茎尖进行培养。 2.培养基和培养方法 通常选用MS为基本培养基，也可用White作基本培养基。附加BA或KT 0.5,2mg,L;NAA、IAA浓度为0.2,2 mg,L，2,4-D为0.1,1 mg,L。培养方式有固体培养和液体培养。可采用液体和固体培养交替进行。如选用White(无机盐浓度的5倍)基本培养基附加NAA2，对切取的茎尖进行液体培养，促进愈伤组织的形成和生长。1个月后切除基部部分愈伤组织后转入到附加NAA1的White液体培养基中培养2周，待小苗长到0.5cm左右，把小苗转入到MS附加Kt 0.5 mg,L的固体培养基内进行增殖培养，然后再用MS培养基附加BA0.5 mg,L和NAA 0.2 mg,L进行继代培养，从而获得较高的繁殖系数和高质量的组织培养苗。 3.芽的诱导和繁殖 从茎尖诱导芽的发生通常有两个途径。一是诱导茎尖直接形成芽苗或芽丛;二是先诱导茎尖产生愈伤组织，再使愈伤组织分化产生不定芽。茎尖以何种途径产生芽苗或芽丛取决于所接种茎尖的大小以及培养基中激素的种类、浓度和配比。将较大的茎尖接种于附加BA2 mg,L、IAA0.5 mg,L的MS固体培养基上，经1个月以上的培养可形成芽头众多的芽丛，而若将较小的茎尖接种于附加BA0.5 mg,L、2，4-D1 mg,L的MS固体培养基上，经1个月左右的培养可诱导形成2,3mm大小的愈伤组织，再将愈伤组织转入附加BA2 mg,L，IAA0.5 mg,L的MS固体培养基上，经过2,3周培养可使愈伤组织分化形成不定芽。将茎尖直接形成的芽丛切割成单芽或用愈伤组织分化形成的不定芽接种于附加BA0.5,2 mg,L、IAA0.5 mg,L的MS固体培养基上，经3,4周的培养可诱导单芽增殖产生芽丛。 在继代培养中需根据幼芽的生长状况，调节培养基中激素的浓度，以获得较多健壮的幼苗。 4.生根培养 切取1,2cm长的幼苗，接种在无激素的1,2MS培养基上培养，经15,20d的生长，即可产生根系。温度20,25?，光照强度约20001x(每天维持10,12h的光照。 5.移栽驯化 当组织培养苗发出的新根长约0.5,lcm时可移出移栽。在组织培养苗移出前，应先在室内自然的光照和温度、湿度条件下炼苗2,3d，使之逐步适应外界的气候条件。自然情况下10月中旬至翌年5月为最佳移栽期。移栽的基质要求疏松、通气和排水良好，使用前还需要进行消毒处理。移栽的容器可用塑料软钵内装珍珠岩等基质。移栽时用镊子小心地将组织培养苗取出，尽量不要伤根，轻轻地去掉附着在苗子根部的培养基，以防止霉菌侵染。用细竹签在基质上打孔，将种苗插入基质中，最后将盆钵置于盛有清水的容器中吸水，使根系与基质充分接触。 移栽后的头几天，需要防风、保湿，可设置塑料小拱棚，用喷雾器间歇喷水，以保持一定的湿度。并将温度保持在12,15?。2周后可完全不遮荫，进行全光照正常养护，精心管理，补充肥水，及时防治病虫，培育壮苗。 (四)、栽培技术 1.土壤准备 香石竹喜肥，不耐水湿以肥沃透气好的砂壤土为佳。但砂性较强的土壤影响植株根系的生长，严重时甚至烧根死亡。因此，在定植前，最好测一下电导值和pH值。香石竹生长周期较长、需肥量大，故必须施足腐熟的厩肥、饼肥、过磷酸钙等基肥。一般每棚可施厩肥1ton、过磷酸钙100kg。香石竹最忌连作，因此生产上常采用轮作进行换土。种植田块要求供水排水方便。 2.作畦与定植 作宽1.0m、沟宽50cm的畦，尽可能作高畦面以增高地势。定植密度在15X18cm左右，1000m2约栽植15000-8000株。定植深度要浅，因为浅栽的幼苗容易成活。且发根、发棵快。在生长旺盛时，再结合松土进行培土。 3.摘心 香石竹摘心后就会从丛节上发生侧枝，所以可用摘心来决定分花枝的枝数以及调节开花时期和生育状态。第一次摘心在定植后约30d，幼苗6、7节长时进行。摘心尽可能在中午高温、太阳光足时进行，以利伤处收口。摘心时，从基部起5、6节处，一手揪紧中心叶，用力快速摘取生长点;另一手牢固地握住幼苗的基部，使摘取时不致于将根提升起来。第二次摘心在第一次摘心后，发生的侧枝长有5、6个节时进行，其方法与要领与一次相同。各侧枝也分别摘心。由第一侧枝摘心后又能长出2,3个第二级侧枝，因而第一级侧枝如有3,5个，则第二侧枝为6,10个。所以当原分枝数较多，也可进行半次摘心。即只对一半侧枝 进行摘心，另一半侧枝数保留。一般每株保留3,6个侧枝，将其余侧枝从基部处剪去。最后的摘心时期，根据不同的品种和切花时期而不同;对于12月至翌年2月的切花，一般7月中旬结束摘心;要求“五一”节盛花的，摘心务必在2月初结束。 4.张网 为避免外面的侧枝弯曲而妨碍生育，要提前张网，使茎正常发育。当苗高距畦面15cm时，张第一层网，以后随着茎的生长而张第二、三、四、五层网，同层之间相距25cm。目前市场上有售香石竹的专用尼龙网，可节省劳力，这种专用网在拉第一层的时候，可同时安上能调节到第四、五层的网。张网时需每隔3m2距离树一桩子，用以缚扎尼龙网，使尼龙网绷紧不松弛。 5.肥水管理 小苗定植后随即浇透水，使土壤与根系充分接触，提高定植后的幼苗成活率。但根际土过湿容易发生茎腐，高温期间更是如此。因而从定植后不久，必须在行间浇水，使根际土壤经常保持几分干燥。但过于干燥，生育会明显变差。 在9月中旬至10月下旬气温15?左右时期，可增加浇水量。夏季浇水时间，必须掌握在清晨和傍晚进行;冬季浇水则在中午前后进行。但在11月或翌年2,3月，由于昼夜温差大，如浇水过多，花朵容易开裂，因此浇水量要严加控制。 香石竹苗期要掌握薄肥勤施，可用稀粪水、菜饼水或含氮、磷、钾、钙、镁的液肥。当9,10月或3,4月生长旺盛期需要大量养分时，可在张网之前结合中耕进行一次施肥，即用菜籽饼、骨粉或速效性的复合肥，在植株根穴处施入。张网后再结合浇水进行追施。随着植株的不断生长，在中后期逐渐减少氮肥用量，而适当增加磷、钾肥用量。花蕾形成后，可每隔一星期喷一次磷酸二氢钾，以提高茎杆硬度。 香石竹对养分的吸收量在品种间有很大的差异，但一般吸肥规律的趋势是，钾(K2O)>氮>氧化钙>五氧化二磷>氧化镁。香石竹以硝酸钙、硝酸钾、磷酸铵、硼砂等溶解于水作液肥施用，效果最好。 6.摘芽和摘蕾 香石竹摘心后萌发的侧芽，除保留5,6个作为开花枝外，其余健壮的嫩芽可打下作为插穗，以繁殖下一代用。对于一些不健壮或节位较高的侧芽，应尽早摘去，否则影响植株的光照和通气。开花枝上的花蕾，留下最顶端的一个，其余在长到豆子大小之前铲除。 7.花萼破裂的防止 大花系比中花系花萼破裂发生的多，有时会出现50,以上萼裂泡，其原因主要是花瓣生长迅速，致使花萼被挤破。这也就是花瓣达60片以上的大花种特别容易发生萼裂的原因。一般认为，萼裂与温度、土壤水分的关系很大。在成花阶段，若遇持续的低温，由于花瓣数或花朵数增加。再加上昼夜温差大，萼裂较多发生。在低温时期多量浇水，或者肥量过多，或氮、磷、钾三元素不均衡，尤其磷成分过多时，都会造成花蕾破裂。 为了防止花萼破裂，要提高栽培棚内夜间温度，白天充分换气，使昼夜温差小;适当浇水，避免从过干急剧地变成过湿，同时降低白天的温度。 近年已有物理防止花萼破裂的办法，即在开花的1,2周内，用塑料带把花萼部分捆卷成钵状，或者安上铁丝环，用(30,50)×10-6赤霉素处理黄豆大小的花蕾，也能起到减少花萼破裂的作用。 (五)、病虫害的防治 1.病害 香石竹是一种比较娇气并易感病的植物，易感染的病害有茎腐病、叶斑病、锈病和病毒病等。 茎腐病:高温时易发生，由于镰刀菌侵入导管，根茎部分变软弱，白天萎缩，不久即枯死，大多通过土壤传染。其预防方法是，采用排水良好的地块，并全面消毒，避免深植，谨慎浇水，不要长时间淋雨，苗床要求通风良好，移栽时不伤茎。此病如果发生，即将病株带根土拔除，并使其周围土干燥，而后灌注甲氧乙氯汞800,1000倍，或者土壤消毒剂“敌克松”500倍液。 2.虫害 蓟马，蚜虫等为主要害虫，还有红蜘蛛、夜盗蛾、斜纹夜盗娥等。 (1)红蜘蛛 高温干燥时发生，若大规模发生则不易绝灭，因此，早期可喷施杀螨剂。使用敌敌畏等杀虫熏烟剂，能有效地防治。但在高温多湿和整个开花期易产生药害，要避免使用。此外，使用喷雾装置，对植株连续喷雾，也能起到一定的防治效果。 (2)蓟马 高温干燥时易发生。蛀食尚未展开的心叶，使展开的叶产生斑点、萎缩，叶色浓淡不匀。也寄生在花和花蕾上，造成花瓣边斑点。其防止方法与红蜘蛛相同。 (3)蚜虫 多发生在高温、透气差的时候，苗和新叶受害显著，造成发育不良。蚜虫又是病毒病的传染媒介，因而需要及早防治要反复喷药，药剂以毒性低的有机磷剂马拉松、敌敌畏、氧化乐果、乙酸甲胺磷为好。夜盗蛾、斜纹夜盗蛾可采用苯硫磷、敌敌畏等驱除。 (六)、切花及保鲜 香石竹切花的剪取在夏季可每天进行一次，冬季一般每星期一次，剪花宜在下午进行。香石竹的切花适期为低温期花开六成，高温期花开四成。剪取后，每20支花扎成一束，翌晨即可上市。暂时不出售的切花，可将茎下2,3对叶除去，更新切口，然后立即插入水中吸足水。在5,6?的冷藏室中贮藏。但要注意，不能和水果、蔬菜、月季、郁金香、紫罗兰等放在一起。 当5,6月与9,10月香石竹产大于销时，可在香石竹花苞露色、十字开口时剪下，用保鲜剂处理贮藏，以使淡季不淡，旺季不弃花。具体方法:在1000g蒸馏水中加入硝酸银50mg，硫代硫酸钠500mg、蔗糖70g将溶液加热到40?，剪去香石竹末端2,3cm。并立即插入溶液中，再在温度约10?的黑暗冷库中放置20h后取出，在0,1?的温度下吸于水，再装入塑料薄膜袋中，贮藏在1?的冷库中，可贮藏12,16个星期。 三、菊花的脱毒与快繁 菊花为原产我国的多年生宿根草本花卉，已有三千多年的栽培历史，现广泛分布于世界，深受人们的喜爱，成为世界栽培面积较大的一种重要花卉。 (一)、形态特性和生物学习性 菊花系多年生植物，株高60,180cm，茎直立粗壮，多分枝，青绿色或带紫褐色，上被灰色柔毛，具纵条沟，呈棱状，半木质化，节间长短不一。叶形大，互生，叶片有深缺刻，基部楔形，表面粗糙，叶背有绒毛。花单生或数朵聚生，边缘为舌状花，中部为筒状花，也有全为舌状或筒状花的，花序形状各异，有球形、莲座形、卷散形等。花色分为黄、白、红、紫、粉几个色系。种子为细小的瘦果，中间膨大，两端突出。 菊花适宜的生育温度为15,25?，5,12?是开花持久的适温，较能耐寒，宿根地下茎能耐-10?以上的低温。其喜阳光充足，通风良好，在光照条件下生长健壮。夏菊为中日性植物;秋菊、冬菊为典型的短日照植物，只有光照长度在12h以下时才能开花。光照的强弱对花期及花色有一定影响，开花期过长能促进花青素的形成，使一些深色、白色品种的花色更鲜艳。 菊花比较耐旱，不耐潮湿，忌低洼积水。特别是夏季暴雨后，闷热闭气天气，易造成植株死亡。 菊花栽培适宜肥沃的砂土壤，但其适应性较强，只要有排水良好的土壤都能生长。菊花花芽分化需要生长到展叶10片左右，株高25cm以上。而开花需要有叶17片左右，株高60cm。 菊花育苗多采用扦插繁殖，一般都在5,6月扦插。当株穗间株顶芽长到15,18cm时，摘取长6,8cm的一段，在节附近下剪，将基部大叶去掉，使插穗带有3,4片已展开的叶最好。如扦插材料不足时，也可用中段，但生根缓慢。切取的接穗及时扦插，可吸水1,2h，在水 -6-6中加入荼乙酸200×10或吲哚丁酸20×10，以促进生根和防腐。顶芽切后，从原母株基部生出的侧芽，又可作为插穗。扦插介质用砂土或珍珠岩。扦插介质不宜重复使用，以防接穗病变，腐烂。插深约2cm，间距3,4cm，插后在苗基部轻轻压紧介质，并立即浇水。一般15d可开始生根，待25d左右，根长到1(5,2cm时，便可移苗。 (二)、菊花的组织培养快速繁殖 1.外植体的选取、灭菌和接种 用于快繁的外植体很多，如茎段、侧芽、叶、花序梗、花序轴等，但最好采用茎尖或侧芽，其次是花序轴。下面以茎尖、茎段和花序轴为外植体说明。选取无病虫害、粗壮的茎尖和茎段，要求叶密茎粗，以利于将来分化迅速，无性系后代质量好。如以花序轴为材料，应选取具该品种典型特征的、饱满充实的蕾，最好要开放而未开放的花蕾，这时花瓣外有一层薄膜包围，里面洁净无菌，采后便于表面灭菌。过于幼嫩的花蕾，不易灭菌和剥离。茎尖嫩叶不要去掉太多，以免伤口面过多，造成灭菌时过多伤害，过多的叶可在灭菌后、接种之前 除去。茎段除去叶，留一段叶柄，无菌水洗后，将茎段面及叶柄再切去一小段，以减少灭菌药物的毒害。接种时按材料生长极性的上下端，正放培养基上，尤其是茎尖不可倒置或侧植。 2.培养基及培养条件 适用于菊花的培养基种类很多，如MS、B5、N6、White等等。但大多采用MS培养基，添加BA2,3mg,L，NAA0.02,0.2mg,L。菊花对激素的要求并不是很严格的，适用的范围很广。菊花培养的温度范围较宽，22,28?都可以，以24,26?最好。培养室光照时每天12,16h为宜，光强1000,4000Lx较好。 3(继代培养 外植体经培养后，一般经4,6周，茎尖直接分化出新芽，或经愈伤组织分化出新芽;茎段、花序轴侧芽萌发，可产生一至数个芽。最初分化率及分化数量都较少，但随继代次数增加。增殖方式除诱导丛生芽增殖外，也可用茎切段作微型扦插繁殖。丛芽增殖时，将芽丛切或小块，转到分化培养基中即可。微型扦插则以嫩茎梢作材料，将嫩梢剪成1节带1叶的茎段。然后将切段基部插入 MS或MS+NAA0.1,1 mg,L的培养基中培养，4,5周后，腋芽即生长成小植株，再照上述方法切剪茎段，重复培养。 4(生根和移栽 菊花无根苗生根一般较容易，通常在增殖培养上久不转瓶，即可生根，但这种根的根毛较少或无，不利将来移栽和生长，所以常用下列方法处理: 一是无根苗的试管生根，切取3cm左右无根嫩茎，转插到 1,2MS+NAA(或IBA)0.1 mg,L的培养基中，经两周即可生根。然后移栽驯化。移栽初期保持高湿度条件，营养钵基质浇透水，取出生根的试管苗，洗掉附着在根部的培养基，用竹签在基质上打一小孔，将幼苗插入基质中。然后加设小拱棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空气湿度和基质含水量，转为正常苗的管理阶段。 二是无根嫩茎直接插植到基质中生根。利用菊花嫩茎易于生根的特点，可免去试管生根一道之序。剪取2,3cm无根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基质事先用生根激素溶液浸透，l0d后生根率可达95,,100,。 菊花用组织培养片快速繁殖，一般4,6周为一个周期，增殖倍率均在5,10倍以上。若以5倍计算，平均以40d为一个周期，一年可获得100,900万株苗，比常规繁殖快数千倍。 (三)、菊花花瓣的培养 菊花茎尖培养是在适宜的条件下，大多经培养直接诱导产生植株。而花瓣培养则要去分化，先形成愈伤组织，从愈伤组织再分化产生完整的植株，有的则可产生胚状体而长成完整植株。由于在培养中需经过愈伤组织途径，有去分化和再分化的过程，因而由花瓣培养产生的植株往往有变异产生，表现在植株、叶形、花色、花形等多方面变异，如小苗叶片的叶形、厚薄、缺刻深浅变化，光周期从短日性变为中日性，株型、花色、花型、瓣型等变化，所以花瓣培养可用来进行菊花新品种的繁育。与杂交育种和辐射育种相比，有节省设备和人力、 简便易行、机遇高等优点。此外花瓣植株是通过愈伤组织途径产生的，不带病毒，所以对没有产生变异类型的菊花来讲，也可起到复壮提高种性的作用，故花瓣植株表现也生长健壮，花大而艳丽。 1.菊花花瓣培养的方法 在菊花开花前2,3d将已露白的花蕾，整个剪下，在自来水下冲洗十几分钟，然后在无菌条件下，用75,的酒精浸泡10,15min进行表面灭菌，后用无菌水冲洗两次，再用10,的漂白粉澄清液浸泡20min，再用无菌水冲洗3,4次。然后用无菌滤纸吸干水分，剪取舌状花，再用解剖刀切取舌状花约5mm见方大小，接种到MS基本培养基上，添加BAl,3mg/L，NAA0.5,2mg,L。接种后置于温度25?左右，光照强度2000Lx，每天照光12h的条件下培养。 花瓣培养10d左右，开始产生愈伤组织，呈圆块状，色淡黄至嫩绿，培养20,30d后，从愈伤组织分化产生根系，以后又分化出芽点，但不成轴状结构。有些品种在愈伤组织生长30d左右，表面可出现大量绿色圆粒状物，用放大镜可观察到似鱼卵群集，即分化形成了胚 50d后则可见到状体，这是花瓣体细胞产生的，故为无性胚，数量大、成苗多。生长到40,大量的芽生长产生。 有些愈伤组织还需转移到分化培养基中，才能诱导分化得到花瓣苗。分化培养基降低生长素浓度或提高细胞分裂素的浓度。将愈伤组织切成5mm大小接人，约20,30d培养，可分化出植株。 最后需转移到生根培养基，当芽高具3,4片叶时，移人NAA0.3mg,L的MS培养基中，约经2周培养，产生数条根系，即可得到完整的试管花瓣植株。 2. 菊花无病毒苗的培养 菊花为多年生宿根无性繁殖作物，常年靠分离母体的一部分进行繁殖，因此病毒代代相传，在母体中逐代积累，浓度越来越高，影响植株的生长趋势、花形、花色、花的大小和产花量，过去一直没有较有效的方法克服，现已证明用组织培养的方法可根除或减缓病毒的影响。 危害菊花的病毒有:?菊花斑纹病毒，造成叶上有轻斑纹，叶脉透明，花瓣上也有斑纹;?菊花矮缩类病毒，受害株比正常株矮1,2,2,3，叶有黄色斑点或成带状，花小，开花早;?菊花轻斑驳病毒，叶有轻微斑纹，花褪色，也有斑;?番茄不孕病毒，叶片大多无病症，表现花形小，花瓣生长不整齐，有萎蔫现象。此外还有畸花病毒、绿花病毒、褪绿斑驳病毒、花叶病毒等。 (1) 茎尖培养脱毒 首先切取顶芽或腋芽3,5cm，并去掉展卉的叶，只留护芽的嫩芽，然后用自来水冲洗，用0，1,升汞或饱和漂白粉上清液对材料进行表面灭菌，再用无菌水涮洗数次。在双筒解剖镜下剥离生长点，分离到0(5mm以下，一般带2个叶原基。分离出的茎尖，生长点朝上，迅速接种或放置灭菌水表面，以防茎尖脱水。 菊花病毒可用指示植物鉴定法、抗血清鉴定法、电镜检查法等检测。如果检测时仍有病毒存在，就应淘汰该植株。如果已证明脱除了主要危害的病毒，只要取得一株无毒苗即可繁殖大量的无毒种苗。这样经严格鉴定的去毒苗，称为原原种，原原种种源应保存在试管里和有隔离条件和消毒 制度 关于办公室下班关闭电源制度矿山事故隐患举报和奖励制度制度下载人事管理制度doc盘点制度下载 的保护区域里栽培，以防止再度遭到病毒的侵袭。由原原种繁殖产生的植株称为原种。在有试管繁殖的条件下，可以年年栽培原种种苗，保证无病毒的影响。 (2)热处理脱毒 菊花也可采用热处理方法来进行脱毒，在35,36?的条件下栽培2个月，可以达到脱毒的效果。但是热处理只能除去菊花矮缩类病毒和番茄不孕病毒，而不能除去菊花轻斑驳病毒和褪色斑驳病毒，后者只有通过茎尖培养途径脱毒来达到目的。 四、非洲菊的组织培养 非洲菊别名扶郎花，原产南非。1878年英国人在南非脱兰土瓦地区发现，1887年引入英国，以后逐渐推广至全世界。 非洲菊的花朵硕大，花枝挺拔，花色艳丽多样，切花率高，栽培用功省，在温暖地区能周年不断的开花，因此，在国际切花市场上发展很快，成为世界著名的四大切花之一。 987年我国科研人员解决了非洲菊的组织培养的快我国非洲菊早在20年代就有栽培。1 繁技术，使我国的非洲菊生产得到发展。 (一)、形态特性和生物学习性 非洲菊(Gerbera hybrida)属菊科大丁草属，多年生宿根草本花卉，一般株高50,60cm。全株具细毛，叶片基生，竖直向上或斜生，其形状随植株的生长而发生变化，从小到大由椭圆形变为长椭圆形，叶片长15,25cm，宽5,8cm，羽状浅裂或深裂，叶背具细绒毛。花由舌状花和管状花组成单生头状花序，花序顶生。舌状花较大，着生于花序的边缘，排列成一轮或数轮，从而形成单瓣或重瓣花型。 非洲菊性喜冬季温和，夏季凉爽的气候条件。最适生长温度为20,25?，最低12?，最高不超过30?。四季有花，以4,5月和8,10月为盛花期，低于10?则进入休眠期。喜阳光充足的环境，每天日照时数不低于12h，能提高植株的切花率，使花朵色彩更鲜艳。土壤要求有机质丰富、排水良好、pH值为6,6.5的微酸性壤土，在盐碱化严重的土壤中难以生长良好。 (二)、自然繁殖与育苗 非洲菊为异花传粉植物，自交不孕。其种子后代必然发生变异，因此必须采用分株、扦插和组织培养的无性繁殖方法。 1(分株 只适应一些窄花瓣，分蘖力强的品种。分株多在3,4月进行。10月份切花可上市。分株时，新株必须带有芽及根，故不宜分得太小。一般1株18个月株龄可分3,4株。分株后的苗，先剪去部分叶片，以减少水分蒸腾，并除去一些老根，分株一个月后以开始生长。 2(扦插 把健壮的植株掘起，洗净根部泥块，去除叶片，切去生长点，仔细地保留根茎粗大部分。再把植株种在种植箱内。当温度为22,24?、空气湿度为70,80,时，历经10,14d，即可取下枝条进行扦插，25,30d根系形成，再移植于营养钵中培育20,30d，秧苗便育成。 6-BA能促进枝条的形成，在除去叶片和生长点之后立即给母株的根颈部喷100X10-6浓度的BA溶液，要求其母株完全被喷湿。每一次插条后，重新给母株喷6-BA溶液。一般1个母株可反复剪取插条3,4次，一共可剪10,20根插条。 母株应采用1年以上已形成根颈的植株。扦插工作最好在3,4月开始，这样秧苗会在下半年开花。夏天扦插则要到第二年春天才开花。了加快插条生根，可先把插条放入0.2,的高锰酸钾溶液中略微湿，再把基部插入市售的生根粉或500X10-6的NAA溶液中，然后再行扦插。 (三)、组织培养育苗 由于非洲菊的茎尖数目少，剥取较困难，又容易被污染，所以常用花托作为外植体。采取直径lcm左右的花蕾，在超净工作台上用0(1,的吐温浸泡10,15min，取出洗净后再放入0(1,氯化汞中消毒20min。，取出用无菌水冲洗3,4次。用镊子和手术刀剥去苞片，切除全部小花，留下花托，将花托切成2-3mm见方的小块。培养条件为24土2?，光照强度为2000,30001x，每天光照12,16h。 初代培养基为MS+BA2mg,L(单位下同)十NAA0(2+IAA0(2，7,10d后切口处形成愈伤组织，约2周后从花托块中央生出丛生小芽，将丛生小芽移至分化培养基，可进行继代培养;与此同时，余下的愈伤组织约4周后形成丛生芽;分化频率为60,,70,。将丛生芽切割后，转入MS+Kt5+IAA0(2培养基继代培养。待苗高2cm时，剪切转移到I,2MS十NAA0(1生根培养基中，约4周后可发出2,3cm长根系。 移栽基质可用珍珠岩和蛭石(1:1)。移栽后防雨并用遮阳网遮荫。每天喷水1,2次，每周供给1次营养液，2,3周即可成活。随后适当增加光照，培养5,6周可供大田移栽。 非洲菊的组织培养要依各地大田栽植的时间和栽植量做出 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 ，如某地区大田栽植定在4月份，可在9,10月间植株开花上市，当年即可取得效益。如外植体分化出芽在上年10月中旬完成，那么第一次试管增殖应在上年10月中旬至11月中旬;第二次试管增殖在上年11月中旬至12月中旬;每次增殖比例约为1:10，每次增殖时间约1个月，到次年2月可增殖4次。试管苗生根培养在2月下旬进行，为期2周;试管苗苗床移栽在3月进行，养护1个月，即可保证在4月初移栽大田。批量生产时，则可增加接种材料数量或提早增殖培养时期，以增加继代培养的次数，获得更多的生产用种苗。 (四)、栽培管理 1.土壤准备与定植 非洲菊喜偏微酸性的壤土?基肥每1000m2可用300kg腐熟菜饼、150kg过磷酸钙、150kg氮、磷、钾复合肥及1500kg腐熟的牛粪混合后翻人土中。畦宽1(2m，畦高25cm。 2种植密度以每畦种三行，株距30,35cm。1000m共种4000,5000株。定植时间除炎热的夏季外、其余时间均可进行。非洲菊的根系中，具有一种横截面达0.5cm的老根，被称为收缩根。因其具有收缩，并把植株向下拉的能力。因此，非洲菊的定植深度以浅栽为原则。要求根茎露出土表1,1.5cm，并以浇好第一次沾根水。反之，如栽种过深，定植后发棵慢，甚至死亡。 2.肥水管理 在生长期应该充分供给水分。在冬季温室内须视温度和生长情况酌情少浇水。浇水时要注意叶丛中心不能积水，应保持干燥，不然花芽易烂。 非洲菊只要温度适宜，一年四季能不断开花，因而需在整个生育期不断进行追肥，以补给养分的消耗。其营养类型属氮钾型，肥料可以氮、磷、钾复合肥为主。一般每10,15d施1次，当发现花后叶弱、叶小、叶少时，应适当增加氮肥。 3(剥叶与疏蕾 剥叶:非洲菊除幼苗外，整个生长期为营养生长与生殖生长并进，即一边长叶，一边长花。如叶片过于旺盛，花枝数减少，甚至光长叶不开花，叶片过小过少，花枝数减少并因营养不足导致花梗过矮，花朵变小，而无商品价值。因此，在整个生育期要不断地合理剥叶。这不仅可以减少老叶对养分的消耗，促使新叶萌发，还可以加强植株的通风透光，减少病虫发生。更重要的是抑制过旺的营养生长。剥时不能单纯地剥去外层老叶，使得植株只剩下集聚在一起的小叶丛，无正常功能叶。从而破坏了植株本身生理的平衡，造成花少、花小。 正确的剥叶方法是:?剥去植株已被剪去花的那张老叶;?根据该植株分株上的叶数，来决定是否再剥叶，一般1年以上的植株约有3,4个分株，每分株应留3个叶;?将重叠拥挤在一个方向的多余叶片剥去，使叶片均匀地分布在4个方向，以利更好地进行光合作用;?如植株中间长有密集丛生的许多新生小叶，功能叶相对少时，应适当摘去中间部分小叶保留功能叶，以控制过旺的营养生长。同时让中间的幼蕾暴露于阻光之中，这一点对花蕾的发育相当重要。 疏蕾:疏蕾的作用主要是提高切花的品质，使花朵更具有商品价值，疏蕾的方法是，当一棵植株上同一时期具有3个以上相当发育程度的花蕾时，容易养分不足，应将多年的花蕾摘除。此外，在幼苗刚进入初花期时，未达到5张叶以上的功能叶或叶片很小，应将花蕾摘除，不让它开花，使它长足营养体。因为大的叶才能开出大的花，如营养体很小就让它开花，以后就一直不能开出大花。夏季切花廉价时，应尽量少让它开花，以蓄积养分，利于冬季出好花。 4.温度管理 冬季切花，需在11月份盖好塑料薄膜。加强保温和增温。如果冬季夜温保持在1,2?以上，仍可保持持续开花。非洲菊对温差相当敏感。夜间的温度应比白天低2,3?，如果落差太大，会造成畸形花序。灌溉的水温也相当重要，冬季水温最好较土温高出3,4?，夏季高温时忌用冷水。 五、矮牵牛的组织培养 (一)形态特性和生物学习性 矮牵牛(Petunia bybrida)，又名碧冬茄，茄科，矮牵牛属。多年生草本植物，通常作为一、二年生草花栽培，播种后当年可开花。株高40,60cm，茎直立或卧倒，全身被短毛。上部叶片对生，中下部叶片互生，卵圆形，先端尖，全缘无齿。花单生于枝顶或叶腋间，花冠喇叭状，花瓣外缘具上下起伏的波状浅裂，花茎5,6cm，花筒长6,7cm。花色丰富，白色、深浅环同的红色和紫色等，并有复色和间色镶边的品种。花萼5深裂，雄蕊5枚。朔果卵形，先端尖，成熟后2瓣裂。种子细小，千颗重0.16g。花期长，可从4月开到霜降。 矮牵牛原产南美洲，是由野生杂交培育而成的，现在世界各地均有栽培。喜温暖，向阳和通风良好的环境条件，不耐寒，耐暑热，在炎热的夏季仍能正常开花，在连日阴雨和气温较低的环境下开花不良，多不结实。要求排水良好疏松的酸性沙质土地，土壤保持湿润，但不要过湿，否则枝条容易徒长而倒伏。 (二)、栽培技术 矮牵牛育苗可通过种子、扦插及组织培养等方法，在大量栽培的情况下，现多采用后者育苗，其次是通过种子和扦插。 (1)播种育苗 可春播亦可秋播，秋播在9月上旬进行，发芽适温为20?，lOd左右苗可出齐，冬季需移人温床或温室越冬。春播在4月下旬进行，夏季可以开花;如欲提早开花需提早在温室内盆播，4月下旬至5月上旬定植。 矮牵牛种子极其细小，为了保证出苗整齐，最好先播人浅盆内，用盆底浸水法给水，盖上玻璃和白纸保温保湿。长出真叶后间苗1次，然后移栽到三号盆内继续培养，最后脱盆定植。 (2)扦插繁殖 有些大花瓣品种结实困难，即便能采收到种子，播种苗也不能保持原品种的优良特性，因此须扦插繁殖。 为了保存大花瓣品种的母株做扦插材料，每年秋季花谢后应将一部分存放在温室内越冬。准备采集插条的母株应事先将老株剪掉，利用根蘖处荫生出来的嫩枝做插条，15,20d即可生根。发根的适温为20,25?，5,6月或8,9月扦插的成活率最高。 (三)、组织培养育苗 1.叶片接种 矮牵牛选择嫩叶作为外植体效果较好。可从播种、扦插所繁殖的植株上取材。在此之前2,3周，最好把母株置于温室内培养，不喷水。剪下健壮无病的嫩叶，将其进行常规消毒后备用。把已经灭菌的嫩叶切成5mm见方的小块，然后接种到MS+BA0.5 mg,L的诱导培养基上。培养2,3周后会有愈伤组织出现，有时也会直接从外植体上生出小芽。随着培养的继续，在愈伤组织上会出现绿色突起，以后这些突起就会形成芽丛。分离芽丛转接到MS+BA0.05 mg,L的继代培养基上。继代增殖迅速，20d即可继代一次，增殖系数高达30, 50，而且随继代次数的增加，分化系数也逐渐加大。当嫩茎长到1,1.5cm高时，即可把它们剪下诱导生根，接种到1,2MS+NAA0.05 mg,L的生根培养基中。培养条件为22,25?，10,12h,d，1500,2000Lx。 2.茎尖茎段接种 选择茎尖、带芽的茎段作为外植体，先用肥皂水刷洗，流水冲洗l0min，70,酒精消毒30s，在含有数滴吐温-20的1,安替福民溶液中浸泡5min，0.1,升汞中浸3min，无菌水冲洗3,4次，用消毒滤纸吸干表面水分，无菌条件下切取茎尖0.5cm或带腋芽茎段lcm接种到MS+6-BAl mg,L +IBA0.02 mg,L的诱导培养基上。1周后，芽开始萌动，逐渐长大成新梢。继代可用切割茎段法进行。最后，进行生根培养。当嫩茎长出5,7条1,1.5cm左右长的新根时，即可进行移栽，基质可采用经过灭菌处理的珍珠岩和蛭石。移栽前期，要将空气湿度控制在80,,90,间，遮光率为60,，环境温度控制在16,20?间。经1,2个月的管理，即可定植于富含腐殖质的砂质壤土中。矮牵牛喜微潮偏干的土壤环境，浇水不宜过多。在定植时不必施用基肥，随着小苗的长大，可每周追施一次稀薄液体肥料。矮牵牛虽喜阳光充沛的环境，但试管苗在定植后不可接受过强的日光照射。矮牵牛喜凉爽、忌高温，最好将环境温度保持在12,20?。小苗高6,10cm时摘心一次。 六、百合的组织培养 全世界已发现百合约89余种，主要分布地区是中国、日本、北美和欧洲等温带地区。 北美百合协会将百合园艺品种划分为10个种系，观赏栽培的主要是4个种系，即亚洲百合杂种系，包括卷丹、川百合、山丹等;茶香百合杂种系，包括:席香百合与台湾百合的杂种或杂交品种;东方百合杂种系，包括:席子百合、天香百合、日本百合、红花百合及其与湖北百合的杂种。麝香百合杂种系，麝香百合又名铁炮百合、复活节百合，株形端正。花色清白给人以清纯、高雅的印象，是切花中的佳品。 我国近年来，昆明、上海、深圳的百合切花生产发展较快，已形成三大生产基地。目前国内切花栽培的百合大多是亚洲型，主要从荷兰、日本引进，经过几年的栽培试验，已筛选出一批适合我(国生产的品种。 (一)、形态特性和生物学习性 百合是百合科(Liliaceae)百合属植物的统称，为多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径5,8cm，白色或黄白色，茎高30,90cm，直立，上叶多而散生，披针形，叶色从浓绿到淡绿色，光滑。花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒状，有清香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。 百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。而粘重坚实的土壤由于土壤孔隙度小，通气性能差，抑制土壤微生物的活动，养分不能很好分解，造成土壤养分供应不足，影响百合根系生长和鳞茎发育。百合一般喜微酸性土壤，土壤pH值在5.5,6.5最为适宜。但有些种类如王百合、川百合、卷丹等也能耐微碱性土壤生长。 渥丹、湖北百合和兰州百合等能在pH值为8.2的土壤条件下生长。但土壤碱性太大或过酸，对大多数百合种类都不适合。百合一般不耐盐。另外，盆栽土壤以腐叶土、培养土和粗沙的混合土为宜。盆栽百合时，应在每年休眠期将鳞茎上部盆土取出，更换新的肥沃土壤，2年后应翻盆重栽，切忌连年不换。 百合生长的最适温度为15,25?，温度低于10?，百合生长缓慢，甚至停滞。耐寒力强的种类，夜间可耐1.6?的低温。温度超过30?，则会影响百合的正常发育，出现"盲花"现象。生长过程中，以昼温21,23?，夜温15-17?最为理想。开花的适温为15,20?。 百合生长要求湿润，怕干燥。湿润的空气对百合茎叶生长十分有利。但大棚栽培时空气湿度过高，通风欠差，茎叶、花蕾容易发生病害。如果土壤过于湿润、积水或排水不畅，造成土壤空气中氧气的含量低于5,时，就会影响百合根系的发育，造成鳞茎患病腐烂死亡。盆栽百合的水分调控，应随植株的生长而逐渐增加，花期供水要充足，花后应减少，地上部分枯萎后要停止水分供给。盆土过湿，同样导致鳞茎发育不良，甚至腐烂死亡。 百合的根系十分发达，吸收水分和养分的能力很强，因此对土壤肥力要求并不高。生长 :10:5)，还需补充钙、镁、硫等肥料以及铁、期间除需一定数量的氮、磷、钾肥(比例为5 硼、锰、铜、锌、钢等微量元素。为此，栽培百合前，正确地施用肥料和调节土壤肥力，对提高产品的质量关系十分密切。在百合现蕾开花时，氮素营养不能缺少，否则会影响百合花的质量。在石灰质的土壤中，容易形成不可吸收态的硼酸钙，用这种土壤种植百合，很容易造成缺硼的现象，导致百合开花不良。 通风对棚室栽培百合十分重要。百合在大棚或日光温室栽培时，常由于通风不及时，造成棚内温度过高，使百合不抽花薹，开花率降低。另外，北方在3,4月百合采花后，棚内温度逐月上升，特别晴天阳光充足时，白天温度可高达30,35?以上，这对百合地下鳞茎发育十分不利，必须通过遮阴和通风来调节温度。棚室内通风不足，还会导致空气湿度过大，使百合发生病害，及时通风，降低棚内湿度，可减少病害的发生和蔓延。 百合属于长日照植物，每天增加光照时间6h，能提早开花，如果光照时间减少，则开花时间将推迟。百合在生长过程中，喜柔和光照和半阴，也能忍受短时间强光照。但长期阴雨、光照不足，植株易徒长，会引起花蕾脱落，开花数减少，"盲花"增多，花朵色彩暗淡，影响切花质量。若光照充足、适度，百合植株生长健壮，花茎粗壮，叶片肥厚，花色鲜艳。其中卷丹、湖北百合和黎香百合等种类较耐阳光照射。 若9,10月种植，由鳞底盘部发根，于秋冬季发芽，低温期以簇状态越冬，到春暖时分抽薹，花芽分化，而开花、结果、秋冬来临时地上部逐渐枯萎，再以鳞茎休眠状态在深土中越冬。 如铁炮百合是在生育中进行花芽分化的。其鳞茎首先必须解除休眠，然后感受0,20?的低温，花芽分化适温为10,20?。铁炮百合对温度较敏感，在8,30?范围内，花芽分化随温度越高，分化越早。然而在25?以上时，花芽未完成发育以前易发生花萎枯现象:在较近分化温度下限的10,13?下，分化缓慢，但花数增加;当出现低温或昼夜温差大时或30?左右高温，容易发生裂萼现象。 花蕾在现蕾时向上，接着向下;在开花时横向或稍斜向下，由分化到开花间，品种有差异。如乔治品种在分化后3,4周就可感触到其花蕾，其后14,17d现蕾，再过45d左右开花。 (二)、繁殖方法 主要方法是分球和鳞片扦插繁殖，还有采用叶插和分珠芽，新铁炮百合可播种繁殖。 1.分球 百合老鳞茎(母球)生长过程中，于茎轴上逐渐形成小鳞茎，称“茎生小球”，经一年栽培，可分生1,3个甚至7,9个小球，适当深栽及摘除花蕾，均有助于子球发生，小鳞茎待明春播于苗床，大者10年，小者培养2,3年可当种球。 2.鳞片扦插 取成熟健壮的老鳞茎，阴干数日后剥下鳞片，斜插于湿润木屑或颗粒泥炭中，温度以20,25?为适，一般8,9月插，经2,4个月生根发叶，并在鳞片基部生长出小磷片，基质含水量在60,, 80,，前期高水分，后期低水分，过分湿润易腐烂。为防止病菌感染，应 60个子球，自鳞片扦插、生根、发芽至植株开花，尽量除去外层鳞片，1片鳞片可获50, 一般需2,3年。 3.叶插及分珠芽 将开花植株的茎生叶自茎上拉下，扦插到湿润介质如蛭石、木屑中，保持20?左右温度，每日光照16,17h，经3,4周后产生愈伤组织和小群茎，一个半月后，小鳞茎产生新根。铁炮百合一般不用珠芽繁殖，但如卷丹(又称虎皮百合)等有叶腋生珠芽特性。铁炮百合经叶插、茎播后，也会形成珠芽。采珠芽贮于砂中，春插于苗床，2,3年后开花。 4.播种 新铁炮百合的最大特点是由实生苗栽培，于12月上旬播种，采用条播或撤播。播种用土以土壤4、腐叶土4、河砂2的比例混合。播后覆土，以不见种子为适，充分灌水、覆盖，温度白天25?以下，夜间10?左右，播后1个月可整齐地发芽。 (三)、百合的组织培养 百合的组织培养繁殖自20世纪70年代后期开始，日本人以叶片为外植体诱导出大花卷丹的小植株，我国于80年代初由兰洲百合的花药、花丝等培育出完整小植株。80年代以后，培养出去病毒的百合种苗和通过胚培养获得远缘杂交的新品种。 1.花器的组织培养 (1) 取材和灭菌 采取开花前数日的花蕾。花蕾的表面用酒精灭菌，再在酒精灯上灼烧数秒钟，以后放在无菌培养皿内剥开花蕾，花丝，子房，花柱等分别切取3,5mm长，接种到培养基上。也可用花瓣和萼片培养。 (2) 培养基及培养条件 采用MS，KC等培养基，蔗糖浓度以7.0,为适，这样发芽和子球形成率可达90,左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保温20?。 (3)生长情况 花器部位 从百合花器不同部位的培养来看，以花丝的部位为好，成活率很高，发芽较多，再是子房和花柱部分。可从各部位发芽，形成子球，通常是经过两个途径，一个是从切中处形成愈伤组织，以后再发芽;再是从切口直接产生芽。 花器培养植株 麝香百合花器培养得到的植株，生长约6个月即可开花，未发现不正常现象，只是母株的花较大，且全株无病毒症状。 培养条件 花柱、花梗、茎段等用MS+IAAlmg/L+BA0.2mg/L培养基，叶片用MS+NAA1mg/L+BA0.1mg/L;分化植株时，MS+NAA2mg/L+IBA0.4mg/L+Kt0.05mg/L，培养基内均加蔗糖3,和琼脂0.7,，pH值5.8,6.5。 2.鳞片组织培养 百合鳞片等培养，对于扩大培养材料来源，加快繁殖速度和培养得到无病毒苗等皆有重要意义。 初代培养 由于其鳞茎材料都生长在土中，受土壤微生物的影响，所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意，可应用次氯酸钠，高浓度漂白粉过滤液、酒精和中性皂等几种 2消毒剂并用的方法。取0.5cm鳞片小块接人MS+2,4-D1mg/L+IAA1mg/L+Kt0.5mg/L诱导培养基中，置于20土2?，照光9,10h,d，光强1200Lx条件下培养。接种后的2周里，即有98,左右的鳞片切块在近轴面或边缘上诱导，也有淡黄色的不定芽原基呈环状突起，多数每块上有2,4个，这些不定芽原基继续生长4周后，可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎，在小鳞茎基部发生一些粗壮的根。将幼苗切成1.5,2cm长的片断，接种到诱导愈伤组织的培养基上。3周后叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出一团团淡黄色的愈伤组织，以叶基部的平均数为多。 继代培养 分化培养时，可用MS+NAA2 mg/L +IBAO.4 mg/L +Kt0.05 mg/L培养基。将愈伤组织转移到分化培养基上，10周后，愈伤组织逐渐膨大，来分化出许多大小不等的鳞茎，并在小鳞茎的基部长出许多粗壮的根。有少数的小鳞茎中间可长出绿芽。将小鳞茎分离出以后，留下的愈伤组织转移到相同的新鲜分化培养基上，一段时间后仍能分化出小鳞茎。 子球的形成能力，与外植体采收时间有关，一般以春季接种效果为好。另外。与外植体分离部位有关见表11-1。在叶尚未展开的基部或花器顶部5cm范围内选取的外植体，其子球的形成情况都较好。此外，子球的形成以百合鳞片外植体的向心面为多，故外植体接种时还要考虑到接种的适宜接触位置。 生根培养 百合试管苗移栽时首先应把根部的培养基清洗干净，以免受细菌或真菌污染而影响幼苗生长。在试管苗移栽前，放在4,10?低温条件下锻炼2,3周，这样移栽后的幼苗生长更加健壮。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基质，移栽用育苗盘必须清洗消毒。同时，移栽后注意湿度管理，相对湿度控制在80,,90,。同时要防止 烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，并及时喷洒药剂预防病虫危害。秋季小鳞茎移栽到盆中的成活率较高，且能继续生长，抽出绿芽。入冬后进人休眠，地上部枯萎。移植前的培养温度及培养基所含的无机盐、激素和蔗糖浓度对新产生子球的发根和休眠有较大的影响，也会影响以后上盆的成活率。 从以上可以总结出百合诱导成苗大致有以下几种途径: (1)鳞片小切块诱导 鳞片小切块接种后，一般先分化出黄绿色或绿色球形突起的小芽点，继而芽点逐渐增大，长成小鳞茎，并可生长出叶片，形成苗丛，生根后即可以从试管中取出，移栽于育苗盘，再过渡到大田。也可将小鳞茎继代培养扩大繁殖。 (2)叶片诱导 在超净台上取无菌叶片，接种于培养基上，培养30d后即可分化出带根的小鳞茎。培养60d后，每个单叶片形成的小鳞茎一般又可分化出带有根系的丛生小鳞茎4,6个。叶片培养可直接插入培养基中，叶片也可平放于培养基上培养。 (3)无菌小鳞片诱导 取试管中的无菌小鳞茎，在超净台上将其小鳞片逐片接种于培养基上，鳞片基部向上或内侧面向上，培养 30d左右即可开始分化，再培养30d左右即可分化出小鳞茎和根系，培养60d后，每个小鳞片一般又可分化出带有根系的丛生小鳞茎4,6个。 (4)愈伤组织诱导 上述的外植体在分化成苗过程中，常常也可伴随颗粒状似胚性细胞团的愈伤组织产生。该愈伤组织可在连续不断的继代培养中，一方面不断地继续增殖相似的愈伤组织，另一方面又不断地分化成苗。 一般每个试管里的愈伤组织可分化成苗20,40个，这样即可周而复始分化出大量的试管苗。百合用组织培养繁殖方法解决了因持续进行营养繁殖而引起的种球退化现象，使百合种球得到提纯与复壮。 (四)、打破休眠的方法 百合切花栽培中首先要解决的技术问题是;避免因球根之休眠而导致发芽率不高及盲花。由于同一圃场生产的球根，其休眠状态各种各样，尤其休眠深的球根，仅靠贮藏无法打破休眠。促成栽培打破休眠的实用方法有: 1.冷藏 13,15?预冷，3,5?冷藏6,7周，于11月定植。抑制栽培可用泥炭苔在冷藏箱填装茎球，以1?预冷6,8周，提高其渗透压后，以-2?的温度贮藏14,15个月，然后以10,15?的温度逐渐解冻，而后定植。但长期贮藏将使切花品质下降。填充材料先浸水以保持一定湿度。 2.温水浸泡 泡入足够量的温水中，使球根心部的温度均一。开始于48?左右的温水中，每隔2,3min提起再泡人，如此反复2,3次，则容易均匀，然后在45?温水中浸泡1h。注意应严格掌握水温，接近50?高温，即使是短时间，也会发病。温水浸泡对麻烦的根螨防除有极好的效果，也有可能加强植株生长势。 3.激素处理 采用1000x10-6GA溶液浸泡，为避免发根阻碍，可先将球根倒置浸泡一半，而后恢复正常位置予以静置。 (五)、病虫害的防治 危害百合切花生产的主要病害是病毒病和球根腐烂病，要定期喷波尔多液，适当轮作，进行土壤和鳞茎消毒。目前，最根本有效的方法是使用由生长点培养的无病毒种球。 百合栽培中还有一种常见的生理性病害，即叶烧病，其主要特征是当植株高约20cm时，幼叶出现黄绿色或白色斑点。叶烧轻微。植株仍可生长;若严重，白斑点变成褐色斑，该处叶片会出现卷曲，更严重者，所有的叶片及幼嫩花苞均受损，植株停止生长。发病的原因主要是根系生长不良或土壤盐分过高所致。此外，若植株生长过快，根系发育慢于地上部分生长，或由于蒸发过大、气温过于干燥或变化过大、阳光过强等都易发病。通常大球比小球易发生叶烧病。 防治方法: (1) 勿选种易叶烧的百合品种，更不要选该品种的大球; (2) 选择发根性好的种球，并宜适当深植; (3) 种植前土壤进行淋洗; (4) 及时做好防治根部病虫害工作; (5) 夏季阳光过于强烈时，应遮荫，并每天洒水两次，以降低蒸腾作用; (6) 不可使植株生长过快，室温最好保持在10?左右。 第四节 农作物的脱毒与快繁 一、甘薯的脱毒与快繁 甘薯(Ipomoea batatas L. Lam)属于旋花科，是一年生植物。我国近年来甘薯种植面积达到666.7万公顷，占世界的80%以上。甘薯是一种杂种优势作物，但采用营养繁殖导致甘薯病毒蔓延，致使产量和质量降低。病毒病已经成为我国甘薯生产的最大障碍之一。如:甘薯花椰菜花叶病毒(SPCLV)，甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)，甘薯潜隐病毒(SPLV)，甘薯脉花叶病毒(SPVMV)，甘薯轻斑驳病毒(SPMMV)，甘薯黄矮病毒(SPYDV)，烟草花叶病毒(TMV)，烟草条纹病毒(TSV)，黄瓜花叶病毒(CMV)等，此外，还有尚未定名的C-2和C-4。 甘薯病毒往往呈复合侵染。受侵染的植株症状为:地上部分长势弱，叶皱卷、花叶、黄化、羽状斑驳或环斑;结薯少、块小，能上能下色淡，表皮粗糙、龟裂;种性退化，品质和产量降低。甘薯病毒尚无药可治，其潜在威胁很大。茎尖培养是目前防治甘薯病毒病的最有效方法。 其脱毒快繁技术 工艺 钢结构制作工艺流程车尿素生产工艺流程自动玻璃钢生产工艺2工艺纪律检查制度q345焊接工艺规程 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 如下: (一)、甘薯脱毒 1(优良品种母株选择 选择适宜当地栽培的高产优质或特殊用途的生长健壮的甘薯品种植株作为母株，取枝条，剪去叶片后切成数段。每段带一个腋芽，含顶芽的2-3节。 2(材料消毒 剪好的茎段经流水冲洗数分钟，用滤纸吸干表面水分后于70%的乙醇中浸泡10秒，再用0.1%升汞消毒10分钟，无菌水冲洗5次;或用10%次氯酸钠溶液消毒15分钟，无菌水冲洗3次。 3(茎尖剥离 把消毒好的芽放在解剖镜下，无菌剥去顶芽和腋芽上较大的幼叶，切取0.3-0.5毫米含1-2个叶原基的茎尖组织，接种在培养基上。 4(茎尖培养 甘薯茎尖培养的较理想培养基为MS+0.1,0.2mg/L IAA+0.1,0.2mg/L BA，加琼脂固化。用的试管，每支试管装约1/3的培养基，接种一个茎尖。保持培养器皿内的温度也是提高成苗率的重要因素之一，用铝箔纸包口比用棉塞包口成苗率高。但在茎尖生长成苗后转入用棉塞等包口的培养瓶内较好，以免因湿度过大而出现玻璃化苗。 培养条件:以温度25,28?，光照度1500,2000lx，光照14小时/天为宜。 不同品种的茎尖生长情况有差异。一般培养10天茎尖膨大并转绿，培养20天左右茎尖形成约2,3毫米的小芽点，且在基部逐渐形成绿色愈伤组织。此时应将培养物转入无植物生长物质的MS培养基上，以阻止愈伤组织的继续生长，使小芽生长和生根。芽点基部少量的愈伤组织对茎尖生长成苗有促进作用，但愈伤组织的过度生长对成苗则非常不利，且有明显的抑制作用。 5(茎尖苗的初级快繁 对来自不同品种的茎尖的薯苗严格按照株系序号进行初级快繁，以便进行病毒检测。 当薯苗长至3,6厘米高进，将小植株切段进行短枝扦插，除顶芽一般带有1,2片展开叶片外，其余的切段都是具一节一叶的短枝。切段直插于三角瓶内无植物生长物质的MS培养基中，条件同茎尖培养。2,3天内，切段基部即产生不定根，30天左右长成具有6,8片展开叶试管苗。 6(脱毒鉴定 茎尖培养产生的试管苗，经严格检测后，才能确认为脱毒苗。初级快繁到一定数量后，将同一株号的试管苗分成三部分，一部分保存，一部分直接用于病毒鉴定，一部分移入防虫网室内的无菌基质中培养。 确认脱毒种薯及种苗是否带毒及其种类常用的鉴定方法有:甘薯病毒病症状学诊断法、指示植物检定法、电子显微镜检定法、血清学检测法等。 (二)、甘薯的快繁 1(脱毒苗的快繁 脱毒试管苗可进行试管切段快繁，也可在防虫条件下于无菌基质中栽培、繁殖。试管繁殖脱毒苗一般30,40天左右为一个繁殖周期，一个腋芽可长出5片以上的叶，系列系数约为5。为降低人工培养的成本，可用食用白糖代替蔗糖;将培养基中的大量元素减半，甚至用1/4的MS(大量元素)培养基;尽可能利用自然光照培养;也可用经检验合格的自来水代替蒸馏水或无离子水。 在防虫温室或网室内，可将经炬苗后的脱毒试管苗移至蛭石、河沙等基质中，待其成活后，连根拔出栽入已消毒的土壤中。缓苗后薯苗迅速生长，之后定期地(约10天左右)剪秧扦插，以苗繁苗，其性能与试管苗无异，以求短期内获得大量脱毒苗。防虫网一般采用35-45目的尼龙网罩在棚架外而成。为加速脱毒薯苗的繁育，可建造防虫温室，使快繁在冬、春照常进行。为防止温室内温度偏低，也可采取铺设地热线或燃料侧基反应等措施，保证薯苗正常生长。 (原原种的繁育 2 在防虫温室或网室的无病毒土壤上种脱毒苗，让其结薯，即为原原种薯，育出的苗即为原原种苗。原原种比试管苗更便于分发运送，以供应生产原种。 3(原种的繁育 原种生产也应在防虫温室或网室的无病毒土壤上进行，以原原种为种植材料，必要时可进行以苗繁苗的方法，而取得较多的原原种苗，培育的种薯即为原种。 4(种薯的繁育 种薯可分为不同的等级，一级种薯的生产要求:在隔离地块上栽培原种，地块四周500米以内的范围内不栽甘薯，生长期及时拔除病株及其薯块，及进喷药治虫，还可在田间种植指示植物，以了解脱毒和病毒传播情况。2-3级脱毒种薯生产地块的条件可适当降低，种薯每种一年降一级。脱毒种薯、种苗用于生产，增产效果一般可维持2,3年。其后就应更换新的脱毒种苗、种薯。 (三)、脱毒试管苗的大规模移栽技术及管理方法 1(培育壮苗 移栽成活率主要和苗子健壮有关。培育壮苗，可以通过降低培养温度、增强光照来实现，以株高达到3,5厘米为宜;若苗过于细长则难以移栽成活。 2(适当炼苗 移栽苗前，将瓶塞打开，置室温和自然光照下锻炼2,3天，使幼苗逐渐适应外界环境条件。 3(精心移栽 试管苗经在瓶内培养已形成大量根系，且较细长。移栽时倒入一定量的清水，振摇后松动培养基，小心取出幼苗，洗去根部的培养基以防杂菌滋生，再移至灭菌的蛭石或沙性土壤中。脱毒苗应在严格防虫的网室内称移栽。待苗生根、长出新叶后再移植于土壤中，有利于苗的快速生长。 4(控制湿、温、光等条件 基质温度是根系成活的关键，但不宜过湿。应维持良好的通气条件，促使根生长。空气也应保持湿润，以锡试管苗失水枯死。移栽初期，可用塑料薄膜覆盖。温度以25,30?为宜，并注意遮荫，避免日晒 5(适时定植 蛭石缺乏植物生长必需的营养，故当薯苗成活后，应及时植于防虫网内已消毒的土壤中，促使其生长。为提高网室利用率，定植的薯苗应适当密植。采取剪秧扦插，以苗繁苗的方式，可在短期内得到数量巨大的脱毒苗。在北方，为克服冬、春温度过低的影响，可建立防虫温室，并辅以取暖升温措施，保证脱毒全年进行繁育。以此法繁育的薯功在防虫网内所结薯块、即为原原种薯。 6(严防病虫害 脱毒苗繁育虽在防虫网内进行，但有时会因封闭不严或土内自生性出蚜，而导致网内有蚜虫等发生，或者出现地下害虫危害。为此，应定期喷洒农药，防治病虫害。 第五节 药用植物的试管快繁 一、芦荟的试管快繁 百合科芦荟属植物共有300多种，为多年生常绿植物，分布于热带和来热带地区。由于芦荟具有多种药用功效和保健美容作用，近年来，芦荟产业已经在国内外成为新的开发热点。芦荟植株生长数年后才开花结实，种子一般也很少，而且种子细小，又不耐保存，存放一年后发芽率就很低。生产上常用的扦插和分株法都不能在短时间内提供大量种苗。因此，只有通过组织培养快繁方法，才能生产出大小一致、性状稳定的优良种苗。 1(初代培养物的建立 芦荟的组织培养一般采用茎段和腋芽作为外植体，通过侧芽扩大繁殖。繁殖程序为:外植体培养——不定芽的发生和增殖——诱导产生不定根——移栽过渡——大田定植。 大量研究表明:MS培养基是芦荟初代培养中侧芽分化理想的培养基，不仅诱导出的芽数量多，而且出芽早，侧芽粗壮、浓绿。芽的分化和增殖与细胞分裂素的浓度密切相关。在一定浓度范围内，较高浓度的细胞分裂素有助于芽的形成与正常生长。如:在采用MS基本培养基，NAA浓度为0.2mg/L的情况下，分化出的侧芽平均为4个;但BA浓度上升至5mg/L时，分化出的侧芽有下降趋势，但差异不显著;当BA浓度上升到7mg/L时分化出的侧芽数明显减少，平均只有3个，而且芽的生长不正常，矮小，叶子肥厚。在BA浓度达10mg/L时，苗生长纤细，叶片不浓绿。可见，NAA为0.2mg/L的情况下，只有BA浓度为3,5mg/L的的处理条件下，幼苗生长较正常，而且较壮。 芦荟对蔗糖浓度的适应范围较广，在20-50g/L蔗糖的条件下，侧芽的增殖率都很高，以30mg/L最好。通过实验得出，在芦荟初代培养及诱导侧芽分化的过程中，以采用成分为MS+BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖3.0%+琼脂0.7%的培养基，效果比较理想。 2(取材与消毒 选择盆栽芦荟植株或大田植株，截取上端嫩芽或侧芽，将植株的生长点及周围组织切成1-2厘米的小块，将材料置于自来水下冲洗干净，然后用2%洗洁精或饱和洗衣粉摇动5分钟。倒去注入洗涤剂后，用自来水冲洗干净，然后用70%的酒精来灭菌1分钟，立即用0.15%升汞溶液再灭菌10分钟。最后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌滤纸吸干水分后，就可接种在事先配制好的初代培养基上培养。 3(培养条件 芦荟试管快繁的整个过程中，湿度可控制在26?3?，白天以日光灯照明10-12小时， -1500lx，大概相当于1个40W的日光灯直射;晚间保持黑暗。光照过强时，光照度为1000 叶片容易失水而变成棕红色。培养试管内空气湿度大，有利芦荟生长。 4(扩大繁殖 在培养基内，外植体充绿膨大，顶芽、侧芽开始萌动生长，经25-40天的培养后，茎段腋芽生长成不定芽，节痕上和茎段切面边缘也会发生不定芽。当培养基着色逐渐暗灰色，侧芽发生转多后，应转移到新的培养基上。新培养基成分与前相同。25天后，每个芽周围又可长出4-6个侧芽，引时即可切下来再进行继代培养。以后每25天可继代增殖一次。在第一次至第五次继代培养的过程中，随着代数的增加，每个芽平均新增殖芽数亦明显增多，但第五代以后的情况仍需进一步试验研究。 5(生根与壮苗 芦荟需经重要培养后，才能移栽。芦荟试管苗生根采用KC培养基，以KC+IBA2.5mg/L+蔗糖3%+琼脂0.7%+活性炭0.3%较适宜。为了使植株健壮，使之能在移栽后保证较高的成活率，在生根培养基上形成完整植株后即可转移到1/2MS+IBA2.0mg/L+活性炭0.3%+琼脂0.7%的壮苗培养基上进行壮苗培养。此阶段可将光照度增至2000lx，经20天左右培养，平均每个试管植株长出4-5条粗壮的侧根，叶色浓绿。此时即可炼苗移栽。 6(试管苗的移栽与管理 芦荟试管苗移栽前，应将培养瓶搬出培养室，并敞开瓶口，于普通房间内炼苗3,4天。移栽时，可先往瓶中加入少量水分，并摇动培养基，然后用镊子将试管苗轻轻取出，洗净根部带着的培养基，并按种苗大小分开栽于河沙中。为了预防真菌或细菌引起的病害，也可将试管苗用高锰酸钾溶液泡1,2分钟，稍晾干后栽植。由于芦荟的耐旱怕涝，基试管苗移栽时应注意严格控制基质水分，既要保持基质湿润，又要防止水分过多造成烂苗。保水能力较强的基质如黄泥、黏土等，不宜用于移植芦荟试管苗，以透气性好的河沙最好。但河沙保水力太差，应注意及时喷水保温。移栽初期幼苗有转黄现象，这是因为初期不适应所致，并不 影响成活率。经两周的过渡，植株又恢复生长，叶片逐渐转绿。当抽出新叶时，便可移植于大田。 二、桔梗的组织培养 (一)、形态特性和生物学习性 1、形态特性 桔梗为桔梗科属多年生草本植物。株高30,90cm.根肥大肉质，圆柱形，下部减细，外批淡黄褐色。茎直立，全株光滑，单一或分株。叶互生，茎下部叶有时对生或3,4片轮生;有柄或无柄;叶片卵状至卵状披针形，长3,6cm，宽1,2.5cm,先端尖，基部楔形或近圆形，边缘有不规则锯齿，叶面绿色，背面淡绿白色，两面均光滑。花单生或数朵成疏生的总状花序;花萼绿色，长1cm，尖段有与齿状裂片，花冠呈状，蓝紫色或白色，大型的直径3,5cm。 ,2.5mm，宽1.2mm黑褐色。花蒴果倒卵圆形，成熟时先端裂开。种子卵形，有三棱，长2 期为7,9月，果期为8,10月。 、生物学习性 2 桔梗喜欢生长在阳光充足，温暖湿润，雨量充沛的丘陵地区。它对温度要求不严，播种期温度在8,9为好，移栽期气温为10左右较为适合。适于在降雨量在700,2000的地区栽植。土壤以土层深厚，疏松湿润，排水良好，腐殖质高的壤土，砂质壤土为宜。PH值为6.5,7，以磷、钾多，水热条件良好的土壤条件有得生长发育和根系长。粘重或干燥土不宜栽植。 (二)、桔梗的快繁 ,、 播种 桔梗播种的季节一般在寸水前后。在播种前首先在苗圃施堆肥或厩肥2000,2500公斤，深翻细耙整平作畦。播种时应先开浅沟1,3条，然后将种子撒于沟内采用撒播或点播，然后覆盖火烧土或细堆肥至不见种子为宜。亦可把种子拌和其中。条播在畦上按沟心距20,25，以120倍的灰肥加种子撒播于沟内更均匀，用种量0.5公斤。撒播用种量约1公斤。播后畦面盖稻草保湿。播后半月左右即可发芽出苗，选阴天揭去稻草。苗高7时间苗，拨去密弱苗用杂草，施稀淡人畜粪尿，每亩1000,1500公斤，6月下旬及9月各施追肥1次。 ,、 组织培养 一般用茎尖和茎段作为外植体，接种和培养方法参照其他作物的方法。 ,、 移栽 移前将大田深翻25,30，施入堆肥或厩肥1500,2000公斤，过磷酸钼25公斤做基肥，并耙平作畦。春季以尺蛰到春分移栽最好。 桔梗喜肥，生长期间宜多施追肥，一般结合中耕除草时追肥。第一次亩施稀淡人畜粪废水1000,1500公斤，第二次亩施猪烘水1500,2000公斤，促进根部生长肥大，注意雨季排水。 (三)、病虫害的防治 病害。桔梗通常所患的病害有:根线虫病、桔萎病、班病和轮纹病。根结线虫病危害细根、侧根，生长细弱，枯萎病危害幼苗及成年植株，引起料根枯萎死亡。斑枯病，轮纹病危害叶片，引起叶枯黄。对于上述危害的防治措施是:?实行轮作制;?清除病残株烧毁，加强田间管理;?某苗时用3%甲斟民柳大理磷颗粒8,10公斤/亩。或55克线磷颗粒剂4,5公斤/亩施入寺壤杀死线虫;?选用抗病品种，与水稻轮作;?叶斑病可用1:1,100波尔多液或50%多菌灵1000倍液喷治。 虫害。桔梗通常所患的虫害有:拟地甲、白丝虫、蚜虫等，其中拟地甲危害根部，白丝虫蛀食根茎使之死亡，此外对于蚜虫危害的防治措施是:用90%敌百虫800倍液或50%锌硫1000倍液喷治，白丝虫危害可用土壤消毒处理。 第六节 树木的脱毒与快繁 一、毛白杨的快繁 毛白杨是我国的特有种，插枝繁殖成活率低。如采用嫁接、压条或埋棵等手段进行无性繁殖，不仅用材多，费工费时而且成活率低，繁殖系数不大。20世纪80年代初，我国学者首次解决了毛白杨试管快繁问题。目前，毛白杨的试管快繁技术已在造林育苗的生产实践中推广应用。 1.无菌苗的建立 毛白杨在初代培养时一般采用休眠芽作外植体，取当年形成的直径为5mm左右的枝条，用解剖刀切成长度为1.5,2.0cm的节段，每个节带一个休眠芽。将切段先用自来水冲洗干净，再用70%酒精消毒约30秒，倒出酒精后，立即用无菌水冲洗一遍，然后再用5%次氯酸钠溶液消毒7,8min，最后用无菌水冲洗3,4次。用无菌干滤纸吸取残留水分，在解剖镜下于超净工作台上削取长2mm左右，带有2,3个幼叶的茎尖。为了防止部分消毒不彻底的茎尖在接种后污染其他未被污染的茎尖，在接种时可以每瓶(或每管)只接种一个茎尖，即将单个茎尖接种到只装有少量(几毫升)培养基的锥形瓶或试管中进行预培养。预培养所用培养基的成分为MS+0.5mg/LBA+水解乳蛋白100mg/L，经5,6d后，选择没有污染的茎尖再转接到正式的诱导分化的培养基MS+0.5mg/LBA+0.02mg/LNAA+赖氨酸100mg/L上，用2%果糖替代蔗糖。培养室温度25,27?,日光灯连续照光，光照度为1000lx左右。经2,3个月培养，部分茎尖即可分化出芽。 2.扩大繁殖 有两种繁殖方法。 (1)茎切段生芽扩大繁殖法 将由茎尖诱导出的幼芽从基部切下，转接到新配制的生根培养基上。生根培养基为MS，补加0.25mg/L IBA，盐酸硫胺素浓度提高到10mg/L，蔗糖浓度为1.5%。经一个月左右培养，即可长成带有6,7个叶片的完整小植株。选择其中一株健壮小苗进行切断繁殖，以建立无性系。顶端带2,3片叶，以下各段只带一片叶，转接到生根培养基上。6,7d后可见到有根长出，10d后，根长可达1,1.5cm。待腋芽萌发并伸长至带有6,7片叶时，又可再次切 断繁殖。如此反复循环，即可获得大批的试管苗。此后，每次切段时将顶端留作再次扩大繁殖使用，下部各段生根后则可移栽。如果按每个切段经培养一个半月，长成的小植株可再切成5段计算，每株苗每年可繁殖6万株左右。 (2)叶切块生芽扩大繁殖法 先用茎切段法繁殖一定数量的带有6,7个叶片的小植株，截取带有2,3个展开叶的顶段仍接种到上述切段生根培养基上，作为以后获得叶外植体的来源。其余每片叶从基部中脉处切取1,1.5cm?并带有约0.5cm长叶柄的叶切块，转接到新配置的诱导培养基上，培养基成分为MS+0.25mg/L IAA+3%蔗糖+7%琼脂。转接时，注意使叶切块背面与培养基接触。约经10d培养，即可从叶柄的切口处观察到有芽出现，之后逐渐增多成簇。每个叶切块可得20余个丛芽。将这些丛生芽切下，转接到新配置的与茎切段繁殖法相同的生根培养基上，经10d培养，根的长度可达1,1.5cm，此时即可移栽。如果某些丛芽转接时太小，也可继续培养一段时间。利用叶切块生芽法扩大繁殖比用茎切段生芽法扩大繁殖有更高的繁殖速度。如果每株毛白杨试管苗可取5个叶外植体，由这5个叶外植体至少可得到50多株由不定芽长成的小苗(除去太小的芽)，以后又可如此反复循环切割与培养。据推算，其繁殖速度至少比茎切段生芽繁殖法提高十多倍。 移栽与管理 3. 打开瓶口炼苗，逐渐降低湿度，并逐渐增强光度，进行驯化，使新叶逐渐形成蜡质，产生表皮毛，逐渐恢复气孔功能，减少水分散失。初始光照应为日光的1/10,每3d增加10%，经过10,30d炼苗即可移入大田，避免中午强光。湿度，开始3d饱和湿度，其后每2,3d降低5%,8%，直到与大气相同。 二、河北杨的快繁 有关河北杨组织培养的报道始见于1980年。据有关资料，每块河北杨外植体在一年内至少可增殖100万个芽苗。目前这一试管快繁技术已完全成熟并应用与苗木的工厂化生产。 1、无菌苗的建立过程 (1)取材 河北杨在初代培养时，一般以春季萌发的新梢或由根部萌发的新枝条作为外植体来源。同一枝条上部芽分化率高达90%以上，甚至100%，而下部则仅有60%,70%。同时上部分化速度比下部快，不定芽数量多，生长快。故取材时，一截取嫩枝上部4,5cm作接种材料为好。 (2)消毒、接种及培养条件 嫩枝外植体的消毒按常规方法进行，一般以70%的酒精消毒数秒钟后，再用0.1%,0.2%的氯化汞消毒5,10min，然后用无菌水冲洗3,4次。初代接种亦可按照每个小锥形瓶(或试管)只接种一个外植体的做法，这样可提高无菌材料的最后得率。材料接种后置于25?2?培养室内进行培养，每天用日光灯照明13h，光照度为2000,3000lx。 (3)芽的分化 适合芽分化的培养基是1/2MS大量元素+MS微量元素+0.3mg/L BA+0.05mg/L NAA+2.5%蔗糖+0.5%琼脂，pH5.8。较低水平的大量元素有助于芽的分化和发育。在全量MS培养基上，河北杨外植体虽然也能发育成不定芽，但其数量要比1/2MS大量元素加全量MS微量元素的培养基中少得多。在上述培养基上，先长出质地致密、颜色鲜绿的愈伤组织，随后可分化出芽，诱导频率可达80%,82%。在同一块茎段外植体上有两种再生方式同时存在，即既有胚状体，也有不定芽，而且都是在接种后20d左右出现。但胚状体一般很少与外植体分开。偶尔也可观察到在不含生长素而只有细胞分裂素的培养基上，由胚状体发育成完整植株，但大多数情况下还是在同一块材料上既不产生不定芽又产生不定根。 2.扩大繁殖 河北杨扩大繁殖，可采用分割带芽愈伤组织进行继代培养的方法。继代培养基成分为1/2MS大量元素+MS微量元素+MS有机成分+0.3mg/L BA+2%蔗糖+0.6%琼脂。在该培养基上，愈伤组织进一步增生并诱导出大量不定芽。当繁殖到一定数量的芽时，可以从中选择较大的无根苗，从基部切下来转入生根培养基，其余的材料仍可继续用于扩大繁殖。 3.根的诱导 当不定芽长至2,3cm高时，可将其在无菌条件下从基部切下来，然后转接到生根培养基上以诱导生根。生根培养基成分为1/2MS大量元素+MS微量元素+MS有机物+0.02mg/L NAA+1.5%蔗糖+0.06%琼脂。经2,3周培养，生根率可达100%。 4.移栽管理 移栽时打开瓶口，逐渐降低湿度，并逐渐增强光照，初始光线为可见光强度的1/10，每3d增加10%，经过10,30d炼苗即可移栽。移栽基质可按沙河:壤土:草土灰=1:1:1的比例配合，并用0.4%FeSO4消毒。试管苗移栽入土后，要特别注意加盖塑料薄膜罩，以保证湿度。10d后可以揭罩，成活率可达90%以上。 本章小结: (1) 马铃薯茎尖培养脱毒程序:?取材;?消毒;?接种;?培养基;?病毒鉴定。马 铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。影响脱毒效果的因素:外植 体大小;茎尖所处部位;病毒种类及复合感染。 (2) 苹果花粉培养由于以下几个阶段组成:?选取适期花蕾;?花蕾预处理和消毒;? 诱导胚状体形成;?诱导生根;?移栽。 (3) 苹果的栽培管理要注意几个问题:?育苗技术;?土壤改良;?施肥方法;?灌溉 时期;?整形和修剪技术。 (4) 葡萄茎尖培养经过下列变化:茎化、尖接种后变绿，增大期;形成畸形叶期;芽形 成和伸长期;形成小叶和叶伸长期限;生根期;地上部和地下部伸长期;上盆期. (5) 在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。冬季防寒措施常用地上实埋防寒法. (6) 草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。无毒苗在用于生产之前， 必须经过病毒鉴定。一般由嫁接法进行。无毒苗的繁殖程序可以发为五步，即鉴定 出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。 (7) 蝴蝶兰脱毒:茎尖培养——原球茎——继代培养——增殖——生根炼苗。通过原球 茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。 (8) 香石竹的茎尖脱毒培养一般结合热处理:将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内， 采用38-40?高温处理6-8周，再切1mm大小的茎尖培养。 (9) 菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。 菊花生根能力比较强，有两种方法:嫩茎试管生根;无根嫩茎的扦插。 (10) 百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式:?经愈伤组织增殖; ?是诱导分化不定芽。 (11) 侵染甘薯的病毒有十几种，甘薯脱毒快繁技术工艺流程:?脱毒;?快繁。脱毒试 管苗栽培管理注意:培育壮苗;适当炼苗;精心移栽;控制湿、温、光等条件;适 时定植;严防病虫害。 栽培管理注意:?播种;?用茎尖和茎段作为外植体组织培养;?移栽;?桔梗(12) 桔梗的 喜肥，生长期间宜多施追肥。