牛乳蛋白在膜反应器中的酶解

④ 食品工业科技 ； ．鸣， 。 珂 v ：， ， !． ! 弓o-3 J 牛乳蛋白在膜反应器中的酶解 李雁群 赵 利 ，王永福 余世望 (中德联合研究院，南昌 330047) 、，1 - 抽 要 用超滤器作为牛乳蛋白酶解反应的反应器，比较了在膜反应器中酶解和在普通反应器中酶解产物的分 子量分布。 ⋯ 关曩词墅 塑 竖巨堕量± 兰呔_ 衅 Abstract A ultrafilter was used as r etor in which milk protein was hydroly钟d with protease．The molecular weights of the hydrolyzed protein in membrane reactor were measured with HPLC．the result was compared with that in corl1mon tank reactor． Key words er~zymatic hydrolysis lu[trafiltration,reactor tmilk ipo[ypeptide 近十年来的研究表明，牛乳中的某些多肽以及一 些从牛乳蛋白水解而手导到的多肽，具有某些生物活 性，对于人体健康十分有益。MauboisC1]和 Nil口 研究 表明，牛乳蛋白永饵物(主要成分为乳蛋白肽)具有免 疫调节、抗凝血、抗过敏、降血压和降低胆固醇等生理 功能。来自牛乳蛋白中的生物活性肽有促进钙吸收的 酪蛋白磷酸肽CPP(Casein Ph0sphopeptide)、降血压 的肽(有 12_肽、6肽和 7肽等)，而且有关的报道 日益 增多，新的肽在不断被发现。 从牛乳蛋白水解制取多肽的过程中，要褥到一定 的肽，水解度的控制十分重要。以前一般是通过控制 水解时闻和加酶量来实现的，而用超滤器作为反应器 来实现对水解度的控制有其独到之处。 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1．1 材料与设备 牛乳 从南昌乳品厂购得鲜乳，经离心脱脂弭脱 脂乳用作实验原料； 分子量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品 Mw：25l 2，6214，8159，10700， 14404，16949Da1，Sigma公司提供 胰蛋白酶 生物制剂级，上海生化试剂公司提 供； 木瓜蛋白酶 食品级，广州酶制品厂提供； 1．398中性蛋白酶 食品级，无锡垦达生物技术 有限公司提供； 超滤器 中空纤维超滤器，膜材 PS，截田分子量 1万，天津纺织工学院产； HPLC Baseline 810工作站，Model 510高压 * 江西省 自然科学基金资助项 目(95307) 30 泵，Model 481检测器，Protein—PAK”60色谱柱， Waters公司产； 离心机 Beckman高速冷冻离心机，4000r／rain 小于10℃下运行。 1．2 工艺流程 普通酶解过程 脱脂乳 酶解一丑酶 过滤一旁于 量溯定 膜反应器酶解过程 f——————] 税稻乳一加酶一超滤器一截留液一补充水 调节pH 透过液一洲定舟于量 1．3 分子量测定 用HPLC，洗脱液为 0 05mol／L， pH7 10的磷 酸 缓 冲液；流 速 0．5mL／min，时 间 40min，检测波长 214nm。 2 结果与分析 2．1 分子量标准曲线 用一组分子量标准品，在HPLC中检测，出峰情 况见表 1。 表 1 舟于量标堆品的保留时间与舟于量 根据表1数据，经回归计算得分子量与保留时间 的关系如下： Rt=--14．721og(Mw)+72．21 (1)式 2．2 脱脂牛乳的分子量分布 维普资讯 http://www.cqvip.com 《食品工业科技》 Science and Technology of Food Industry Vol-21；N。．1 将脱脂牛乳用 HPLC分析得到图 1所示的结 果。从图上可见，大部分集中在保留时间为 10．1rain 的大峰中，根据(1)式，分子量大约在 16000dal左右， 这一结果符合以前的文献关于牛乳蛋白分子量大小 的报道。 ． 反应时闭 iⅡ' 图 1 脱脂牛乳的HPLC谱图 2．3 牛乳在普通反应器中酶解 将牛乳在普通反应器中水解，实验室是用烧杯做 反应器并保持低速搅拌状态。用胰蛋白酶、木瓜蛋白 酶和 1．398中性蛋白酶三种酶共同催化水解，反应终 结后取水解产物进HPLC分析，得到图2的结果。从 图中可见，原来在脱脂牛乳谱图中Rt=10．1的大峰 消失，说明大分子的牛乳蛋白已被水解。在 Rt=15～ 18之间有一组强的多峰，说明水解产物中分子量在 7700~4800dal之间的组分含量很高。同时，在Rt= 19．0，Rt一21．5，Rt一30 5三处有大的峰，它们对应 的分子量分别为4100，2700，700 这个结果说明，在 上述条件下牛乳蛋白酶解所得的产物主要为分子量 为 4800~7700，4100，2700，700的多肽和寡肽。而且 小分子量的寡肽的台量相当高。 图 2 在普通反应器中酶僻产物谱圈 2-4 牛乳蛋白在膜反应器中酶解 以超滤器作为酶解反应器，使脱脂牛乳在超滤膜 装置中循环并同时加酶水解，在这样的反应器中牛乳 的反应有着不同的表现。图3是在膜反应器中牛乳蛋 白酶解产物的HPLC谱图 从图3可以观察到与图2 非常明显的差异。图3中，水解产物的分子量大小分 布非常集中，而且 4000以下没有色谱峰，而在 Rt一 16．5的位置上有一个高峰。说明，在膜反应器中酶解 的产物不会杂乱，非常集中。 图3 在膜反应嚣中酶解产物的谱图 当用超滤膜装置作酶解的反应器时，蛋白质在反 应器中被水解，同时水解产生的小分子降解产物透过 超滤膜随透过液一同移出酶解系统之外，这样实现了 反应和分离同时进行 由于小分子水解产物被及时移 出，它们就无法继续参与反应，因此在膜反应器中酶 解的产物没有出现分子量更小的色谱峰。 由此可见，如果用截留分子量大小不同的超滤膜 作反应器，并按照适当的 规则 编码规则下载淘宝规则下载天猫规则下载麻将竞赛规则pdf麻将竞赛规则pdf 组合，将可以形成一套 反应器来实现对酶解产物分子量的控制。 3 结论 用适当的蛋白酶可以催化牛乳蛋白水解，但是水 解产物大小分布不均匀，然而用超滤器做酶解反应 器，可以得到分子量大小分布集中的酶解产物。这个 结果说明用膜反应器来控制蛋白质的水解度是可能 的。 参考文献 l Siemezlsma，A．D：Weijel"．W．J．；Bak，H．J．Trends in Food，Sc；ence and Techra)|ogy，1993，4：l6～ 21 2 河村幸雄．食品E开发+1991，26(I1) 28～32 3 王文义，高竹臣．食品工业，1993(2)：21~22 4 Nil．食品E开发 ，1991，26(11)：33~36 5 Nil．食品E开发，1991，26(11)l 37~39 6 Maubois，J．D．and Leonil，J．Lait，1989(69)：245 7 日本森永乳业公司内部资料 8 Haque，Z．U．and Mozaffar，Z．Food Hydrocolloids-1992，5 (8)：559～57l · 31· 维普资讯 http://www.cqvip.com