三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响

三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响 ?l6? 三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响韩万柏解放军大连医学高等专科学校大连1l6017,. 塞塞垦.=5z.弓/ . 第三军医大学寄生虫学教研室重庆630038I /lr/提要本文报告用三种抗凝法取血,观察B株猴疟配子体的活力.结果表明,去纤维蛋白抗凝法对该疟配子体的活力影响较小,其次为肝素抗凝法,而枸橼酸钠抗凝法的影响最大关键词 .堕塞茎壁塞垦拳苎里i芝递食蟹...

三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响 ?l6? 三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响韩万柏解放军大连医学高等专科学校大连1l6017,. 塞塞垦.=5z.弓/ . 第三军医大学寄生虫学教研室重庆630038I /lr/提要本文报告用三种抗凝法取血,观察B株猴疟配子体的活力.结果表明,去纤维蛋白抗凝法对该疟配子体的活力影响较小,其次为肝素抗凝法,而枸橼酸钠抗凝法的影响最大关键词 .堕塞茎壁塞垦拳苎里i芝递食蟹猴疟原虫B株是具有广泛推广价值时每ml血内加入该溶液0.05ml(含肝素钠的猴疟模型"中的原虫,也是国际通用的研究,评价抗疟疾治疗药,根治药和预防药的虫株.采用抗凝法取虫血离体感染蚊媒也是常用的实验手段.抗凝法可采用化学(各种抗凝剂)和物理两种方法进行,而肝素抗凝则是常用的方法..了解各种抗凝法对该虫配子体活力的影响,对恰当选用抗凝手段,保证实验高质量进行,具有实际意义.为此,笔者于 1994年5,6月问进行了实验观察,现将结果报告如下. 1 材料与方法 1.1疟原虫食蟹猴疟原虫B株(简称B株猴疟)1984年由中山大学从英国引进,1987 年引入第三军医大学寄生虫学实验室. 1.2斯氏按蚊由英国引进.1982年引入第三军医大学毒生虫学实验室.实验使用羽化后3,8d龄蚊. 1.3恒河猴1只.体重5.6kg,考性;另1 只体重5.5kg,旱性. 1.4简易蚊饲血器取一厚3ram的软塑料泡沫,剪成圆形,直径为30ram;备细胞培养皿1只,内径为35ram,内边高6ram,罩在剪好的泡沫上使两者问有3ram空隙 I_5肝素钠上海化学试剂站分装厂(tit号 9~1014)效价?140u/mg.用生理盐水配制成 500u/ml溶液,置4l?冰箱内保存备用使用 25u). 1.6枸橼酸钠北京化工厂A.R.级,含量 >99.0用生理盐水配制成3.8溶液,置 4IC冰箱内保存备用.使用时,每mI血内加入该溶液0.1ml(内含枸橼酸钠3.8mg). 1.7实验方法实验共分4组,分别是媒介按蚊直接吸血组(A组)为对照组,肝素抗凝法(B组),枸橼酸钠抗凝法(c组)和去纤维蛋白抗凝法(D组),在26C室温下进行. 在接种B株猴疟后,虫血症显着期的适当时间,全麻后于猴下肢静脉取血,B,c组各用虫血2ml;D组虫血2.5m1.置于细胞培养皿内.用一表面粗糙的小木棍搅动3rain,以脱去纤维蛋白.各组虫血分置于简易蚊饲血器之塑料泡沫上(使泡沫均匀吸饱虫血),将后者放在饥饿12h的蚊笼之顶部.然后罩上细胞培养皿(兼有减少虫血蒸发的作用),在培养皿上放1平底小杯(容量为50m1)或服药搪瓷小杯.内加65Ic水,5rain换水1次.以保持水温(可使血温维持在29.,31c),饲血 15rain.取血后立即用另1笼蚊在猴胸部直接吸血同样时间,作为对照.饲(吸)血后,将饱 *国家自然科学基金资助课题 . Thisprojectreceivedfiaancialsupr~rtf?NationalNatu— ra『scienccsFund I 血蚊逐个捕出另笼饲养.第7d剖验蚊胃,观察疟原虫卵囊,计算感染率和卵囊均数(卵囊数/剖验蚊数)作为判断配子体活力的指标. 2结果与讨论本实验采用相同方法重复4 次,结果见下表. 附衰各抗糙法对H株振疟配子津活力的影响 T~b]eVario~eff~t0rdifferenla口?ic0a,uIa?iOnmetTa~ds .??hPvLlalilyPla*m,~liNmc".mBslriili'Spmeies 为B,c,D组与A组卵囊均敏之此渣.Ther~tioRVeTRgenumber ot…sbe1we~nGroupB(orC.D)日ndGroupA. 本实验No.1,3,A组蚊胃感染率均? 85,卵囊均数亦在15.5以下,表明虫血内配子体活力和密度不甚高,此时并非是感染血餐蚊的最佳时问.c组感染均为阴性. 实验No.1,B.D组蚊胃感染率,两者差异有非常显着性(一9.7.P<0.01).B,D 组卵囊均数相差达5.62倍.此外,B组卵囊均数较A组低95,而D组较A组低73.表明在该次实验中,D组抗凝法明显优于B组抗凝法. 实验No.2.B,D组蚊胃感染率差别不显着(一2.24,P>0.05),但B,D组卵囊均数相差1.7l倍.B组卵囊均数较A组低89, 而D组为8l.实验No.3结果与No.2极为相似,表明在两次实验中,B组和D组抗凝法对配子体活力的影响程度差别不大.但就仅从卵囊均数和比值分析,D组抗凝法仍略优于B组. 实验No.4,A组蚊胃感染率为100,卵囊均数为45,25,表明此次实验中配子体的活力及密度均较佳,即为感染血餐蚊的适宜时问B组感染为阴性.c组蚊胃感染率为 l5,D组为7o,两者差异非常显着(— l2.38,P<0,01);C组卵囊均数为2.15,D 组为6,4,为前者的2.98倍;c组卵囊均数较 A组低95,D组低86,表明在该次实验中,D组抗凝法明显优于c组. 综合上述4次实验结果,去纤维蛋白抗凝法,未加入任何化学试剂,除机械搅动的因素外.对B株猴疟配子体的活力影响最小,其次为肝素抗凝法.但实验No.4中,B组感染为阴性似与吸血蚊数量少(仅为1o只)或同时尚有其他因素影响B株猴疟配子体活力有关.枸橼酸钠抗凝法对该疟配子体活力的影响最大. 本实验使用的是简易蚊饲血器.与王兴相等"曾使用的蚊饲血器比较,具有制作简便,取材广泛,可操作性强,用血量少,勿需生物膜覆盖等特点.不足之处是温度不易恒定控制.尽管如此,在疟疾研究的实验中,特别是在虫血量较为紧张的情况下,本简易蚊饲血器仍是简单,实用,操作方便,有效的蚊饲血工具. 3参考文献 1束宗臣-刘连珠-黄复生,等.太劣拄蚊感染食蟹靛疟原虫B株的实验现察中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1989i7(1)'66—67 2中华人民共和国卫生部地方病防治局编疟疾防治手册第二版北京;人民卫生出版杜,1988:220. 3中华人民共和国卫生部地方病防治局编疟疾防暗手册第二版北京;人民卫生出版杜.1988:18Z. 4王柏-任慧娴疟原虫离件时问的长短琏蝶介拄蚊感染的蟛响.第三军医大学1979;1z33.34

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