MS培养基的配制与灭菌 11

MS培养基的配制与灭菌 11MS培养基的配制与灭菌 11 MS培养基的配制与灭菌一、目的要求 1(熟悉组培母液吸取量的计算、琼脂、蔗糖的配制、各种母液的吸取、pH的调节培养基的分装与包装。 2(掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、仪器与试剂器材: 高压灭菌锅、移液管、量筒、培养瓶(三角瓶)、烧杯、玻璃棒、1. 标签、pH试纸、电炉、电子天平。 2.试剂:配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、自来水、浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L NaOH以及浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L的HCl。三、...

MS培养基的配制与灭菌 11 MS培养基的配制与灭菌一、目的要求 1(熟悉组培母液吸取量的计算、琼脂、蔗糖的配制、各种母液的吸取、pH的调节培养基的分装与包装。 2(掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、仪器与试剂器材: 高压灭菌锅、移液管、量筒、培养瓶(三角瓶)、烧杯、玻璃棒、1. 标签、pH试纸、电炉、电子天平。 2.试剂:配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、自来水、浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L NaOH以及浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L的HCl。三、方法步骤 (一)MS固体培养基的配制 1.按实验说明进行MS大量元素的称量配置成1000毫升的大量元素母液配置于试剂瓶中。 2.按培养基配方计算用量，称好凝固剂和糖的用量，取出母液，按顺序放好，准备好称量用具和溶解用具。试剂名称用量琼脂 8g/L 蔗糖 50g/L 大量元素 50ml/L 维生素和氨基酸 5ml/L 微量元素 5ml/L 铁盐 5ml/L 6-BA 0.5ml/L NAA 0.2ml/L 3.在容器内加入相当配制量1/3的水，加入琼脂溶煮，再根据计算依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质等，最后加入蔗糖并搅拌均匀,加水定容，搅拌均匀。 4.调整pH值，使PH为5.5,6.0。 5.尽快分装，培养基占容器的1/5--1/4为宜，尽量避免培养基沾到容器内壁或容器口，标记日期。 6.封口。 (二) MS固体培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌(湿热灭菌法) 1.洗涤:把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾干或烘箱干燥。 2.包扎:用纱布把培养皿包扎好。 3.装水:在高压灭菌锅内装入一定量的水。 4.装物品:在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶，以及包扎好的玻璃器皿。 5(灭菌:于温度为121?时，维持20分钟，即可达到灭菌的目的。四、注意事项 1(6-BA，NAA用量甚微，取用时要使用移液管，移液管越小越精确。 2(注意配制大量元素母液时防止钙盐与硫酸盐和磷酸盐产生沉淀; 3(铁盐母液用棕色瓶保存。注意pH的调节; 4(灭菌时间和压力、温度的控制; (分装要干净，灭菌时锥形瓶尽可能放正，不要使培养基流出。 5 6(若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。 7(开盖后应尽快转移培养瓶，使培养瓶冷却、凝固。一般应将灭菌后的培养瓶储藏于30?以下的室内放置3d，观察灭菌效果。如果无细菌等的产生，即可使用该培养瓶。

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