Bluepippin全自动核酸电泳和片段回收系统注意事项及简易操作手册一．注意事项：DNAmarker和Loadingsolution需要提前从冰箱中拿出，放到室温下。样品准备：A．DNA样品的离子强度要比缓冲液的低，TE或水溶解；B．DNA样品是去蛋白的；C．确认DNA片段大小及回收范围。每次实验前，需要进行光学校正，bluepippin是0.6。程序编辑时，选择合适的预制胶和回收程序，不能出现warning，若出现，需要修改相关参数，否则程序无法运行。预制胶需要检查有无断裂，气泡要全部赶走。电流连续性检查，若分离泳道失败，该泳道不能用了；若洗提泳道失败，有两种处理方式：a.重新加40ul新鲜缓冲液到洗提孔，再test；b.该泳道可以用来跑外标marker。30ulDNA+10ulloadingsolution混匀震荡离心，若为外标marker，需要单独占一个泳道，即加40ulmarker。加样时枪头在液面以下，不要用枪头划到预制胶。SageSciencePippin简易操作手册一、实验前准备1．样品处理：DNA样品的离子强度要比缓冲液的低（TE或ddH2O溶解），DNA样品是去蛋白的，打断的2.30ulDNA样品+10ul上样缓冲液，混匀震荡离心3确认DNA片段大小及回收范围4缓冲液要提前半小时放到室温下，以免影响电流的连续性二、编程根据所需目的片段大小选择预制胶种类，例如，100-600bp用2%agarose+V1小片段选择内标internalstandards，大片段选择外标设置回收方式和片段区域大小，设置运行时间，默认选择“回收完成后终止”。三、光学校正CALIBRATE（PippinPrep是0.8，bluepippin是0.6）将光学校正板黑色一面朝下，放到泳道卡槽内，点击“CALIBRATION”。每次更换预制胶种类时都要校正。四、准备预制胶1检查预制胶a检查预制胶中缓冲液量，不足加满。b检查凝胶柱是否断裂，若断裂该泳道不能用c检查是否有气泡2准备上样a排除回收孔后面的气泡b把预制胶放到检测平台上，左侧向下倾斜，防止回收孔后面的气泡回流c撕掉上样孔和回收孔的密封条d清空回收孔中的缓冲液65ul,加入40ul的新鲜缓冲液e用胶带封闭回收孔，防止回收过程中，样品溢出f检查样品孔的缓冲液水平（不足时，加满）70ul3连续性检查TEST（测试电流。连续性跟温度有关系，所以缓冲液要提前从冰箱中拿出放置在室温下）五、上样检查样品孔的缓冲液水平，不足时加满，共70ul吸掉40ul缓冲液，加入40ul样品，合上盖。内标：样品30ulDNA加10ulloadingsolution(无参考泳道)外标：样品30ulDNA加10ulloadingsolutionmarker:40ul(参考泳道)六、运行点击START七、回收撕掉胶带，用移液枪从回收孔内吸取回收样品。八、关机SHUTDOWN，两个电源插头拔掉
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