实验一红细胞ABO血型鉴定实验原理：抗体分子在相邻的细胞表面抗原决定簇之间搭桥，使之形成肉眼可见的颗粒状凝集团块。试剂：1、抗A、抗B试剂血清2、5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液3、受检者血清4、5%的受检者红细胞悬液实验方法：5%的受检者红细胞悬液制备：取少量受检者红细胞（约0.2~0.5ml）用生理盐水洗涤3次，然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。实验方法：（一） 玻片法1、 正定型：（1）取玻片1张，用记号笔在玻片左上角标记“抗A”，右上角标记“抗B”。（2）先按标记分别加试剂血清抗A、抗B各1滴，再在抗A、抗B血清中各加1滴受检者红细胞悬液，充分摇动、混合，10分钟后观察结果。实验方法：（二） 试管法：1、 正定型：（1）取洁净小试管（10mm×60mm）2支，标记“抗A”“抗B”，用滴管分别加入相应的分型血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴，混合。（2）立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。（3）轻轻扣动试管底部，观察有无凝集（溶血）现象，如有必要在显微镜下观察凝集。实验方法：2、 反定型：（1）取洁净小试管（10mm×60mm）3支，分别标明Ac、Bc、Oc，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液1滴，混合。（2）立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。（3）轻轻扣动试管底部，观察有无凝集（溶血）现象，如有必要在显微镜下观察凝集。微柱凝胶血型卡法：微柱凝胶血型卡即可检测红细胞表面的抗原，又可检测血清中的抗体。实验结果：ABO血型正反定型结果: 血正定型反定型型抗A抗BA细胞B细胞O细胞O——++—A+——+—B—++——AB++———注意事项:1．试验用血清和试剂红细胞都应
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化。2． 所有试管都要标记，不要依靠用染料标记血清。3． 因盐水反应性（IgM型）抗体属冷反应性抗体，因此试验温度不要高于室温（20~24摄氏度）。4．一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。5．要在光亮的背景下观察凝集。6． 观察后立即
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结果。7． 可使用光镜检查小的凝集。8． 应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现。思考题：1、 ABO血型正反定型不一致的主要原因有哪些？ 一般有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见以下几种原因。1.离心速度及时间不合适。2.红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显误判为阴性反应。3.受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（如白血病或恶性肿瘤）等。4.受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或试验时温度过高，常引起细胞呈缗钱状排列。5.受检者血清中缺乏应有的抗Ａ或抗Ｂ抗体，如丙种球蛋白缺乏症，6.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。7.有细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集。8.血清中有意外抗体，如自身抗Ｉ，常干扰定型。9.老年人血清中抗体水平大幅度下降。
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