实验八 微生物无菌接种技术
一、实验原理
微生物接种就是在无菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上扩大培养的技术。
要想得到大量的菌种，适应生产、科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌的接种室或接种箱或超净工作台内完成。
二、实验
步骤
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1.斜面接种
（1）左手夹住试管 （2）灼烧接种环
（3）拔出棉塞，夹在小指、无名指上，管口过火
（4）取菌、接种，接种后在火焰上方迅速塞好棉塞
（5）写好标签（菌种名、日期、接种者姓名），贴于斜面正上方前端约1cm处.
（6）于37度培养箱中培养24小时。（全班统一装入一保鲜袋）
（7）一星期后观察分离效果，拍照，
分析
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结果
2. 平板培养基（平板）制备
（1）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。
（2）右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。
（3）用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10到20ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
（4）等待平板冷却凝固。
3.涂布平板法（以小组为单位，对混合菌菌悬液进行涂布分离）
(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。
（2）将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
(3) 取少量菌液滴加到培养基表面。
（4）将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s。
（5）用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。
（6）将接种好的平板在皿底做好标记。
（7）涂布分离的平板全班一起放入保鲜袋中，37度培养箱中倒置培养24h。
（8）一星期后以小组为单位观察分离效果，拍照，分析结果
4. 划线分离：从污染平板中纯化细菌菌落（每人1个平板）
(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。
（2）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿接种环，在火焰上灼烧，待冷却后用接种环在长有混合菌落的平板上挑取少量菌种，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条缝隙，划线，其他每区划线之前一定要把残余的菌体烧掉；待接种环完全能却后通过前1区划线。（一般划4个区）
(3)将接种好的平板在皿底做好标记。
（4）划线分离的平板全班一起放入保鲜袋中，37度培养箱中倒置培养48h.
（5）一星期后观察分离效果，拍照，分析结果
三、实验结果
1、斜面接种
实验结果及分析：此次斜面接种无污染，菌体生长较旺盛，形成了较多的单菌落，分离效果较好，这与接种场所进行了严格的消毒处理以及接种操作在超净工作台上进行，接种前用75%酒精对双手进行了消毒处理，接种工具、管、瓶口接种前后要通过灼烧灭菌，塞子不能脱手等因素都有关，有效地防止了杂菌的污染。菌体的生长情况跟培养温度、湿度、pH都有关。但接种时没有使接种面积达到最大，以至于没有最充分地利用培养基，菌体没有长满培养基，还有接种时不小心划破了培养基的表面，下次做斜面接种时要注意尽可能地使接种面积达到最大，最充分地利用培养基，还有就是要避免划破培养基，力求做到操作规范、科学、准确。
2.涂布平板法
上图为稀释100倍的涂布平板法结果
上图为稀释1000倍的涂布平板法结果
上图为稀释10，000倍的涂布平板法结果
上图为稀释100，000倍的涂布平板法结果
实验结果与分析：如上4幅图所示，此次所用菌液中包含两种菌，即大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌，其中菌落较大、数量较多的为苏云金芽孢杆菌，而菌落较小、数量较少的为大肠杆菌，
说明
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混合菌液中苏云金芽孢杆菌的浓度较大。经稀释100倍的菌液所生长起来的菌落数量最多，单菌落数量也挺多，但所占的比例不大，特别是苏云金芽孢杆菌大多数都连在了一起，分离效果不好。经稀释1000倍的菌液所生长起来的菌落数量较多，可以看到苏云金芽孢杆菌依然连成片，有些大肠杆菌菌落生长在苏云金芽孢杆菌菌落之上，就大肠杆菌而言，单菌落较多，分离效果较稀释100倍的菌液好。经稀释10，000倍的菌液所生长起来的菌落数量较少，依然有部分苏云金芽孢杆菌连成了片；大部分大肠杆菌菌落为单菌落，分离效果较好。经稀释10，000倍的菌液所生长起来的菌落数量最少，但苏云金芽孢杆菌依然连成了片；虽然大肠杆菌的单菌落较少，但分离效果是四个浓度中最好的。综上所述，在一定浓度范围内，稀释倍数越大，分离效果越好。
3.平板划线法
实验结果与分析：由上图可见，本次平板划线达到了分离效果，形成了较多单菌落，但是因操作时不慎，相隔的区域出现了部分交叉，使分离效果收到了影响，所以以后操作时要特别注意,做到操作规范。操作过程中要保证无菌环境。
浙公网安备 33021202002483