离体蛙心灌流离体蛙心灌流
实验五 离体蛙心灌流
一、实验目的
1、学习离体蛙心灌流的方法;
2、观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。
3、观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
二、材料与方法
(一)动物与器材
, 蟾蜍
, 斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、
0.65%NaCl溶液、 5%NaCl溶液、 2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾
上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液
(二)方法与步骤
1、离体蛙心的制备:双毁髓?...
离体蛙心灌流
实验五 离体蛙心灌流
一、实验目的
1、学习离体蛙心灌流的方法;
2、观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。
3、观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
二、材料与方法
(一)动物与器材
, 蟾蜍
, 斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、
0.65%NaCl溶液、 5%NaCl溶液、 2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾
上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液
(二)方法与步骤
1、离体蛙心的制备:双毁髓?左主动脉结扎?左右两主动脉下方活结备
用?剪口，插管(管内盛任氏液与肝素)?结扎备用线(套管，左右
主动脉)?剪断动脉?结扎并剪断静脉。
2、固定套管并用任氏液换洗血液;进入RM6240系统。
3、观察并记录正常心搏曲线
4、向套管内分别加入以下溶液(0.65%NaCl溶液2d 、 5%NaCl溶液2d 、
1%KCl溶液 1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、
1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ) ，观察并记录曲线变化。 三、实验结果
四、实验原理
1、作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体
失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被仍能产生节律性兴
奋和收缩。另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对
稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。
2、心肌细胞按结构及功能可分为
工作细胞:普通的具有收缩能力的心肌细胞
自律细胞:组成特殊传导系统的心肌细胞
3、各种离子及溶液的影响原理如下所示:
钠离子的影响
钾离子的影响
钙离子的影响:
, 肾上腺素:主要与心肌的β1受体结合，产生正性变时、变力和变传导效
应。
, 乙酰胆碱:与心肌细胞的M2受体结合，产生负性变时、变力和变传导效
应。
五、预期实验结果
六、实验结果分析
图 一和图二所示为灌注氯化钠后的波形图，0.65%的氯化钠引起心肌收缩的微小减弱，5%的氯化钠则使心肌收缩明显下降。原因是心肌外环境中的钠离子浓度升高，钠离子内流与钙离子交换增加，导致心肌内钙离子浓度降低，从而使心肌的兴奋性下降，心肌的收缩力也下降。
图四所示为1%氯化钾灌注，钾离子与钙离子在心肌细胞上有竞争性抑制作用，心肌细胞外钾离子浓度升高会使钙离子内流受阻，从而使心肌收缩力下降。从记录的波形图可以看出这一点。
图六所示为氯化钙灌注后心搏曲线变化，理论上，外源性钙离子浓度升高，钙离子的内流增多，心肌收缩力会增强，从曲线上也可以看出这一点。
图三所示为注入肾上腺素后心搏曲线变化，肾上腺素能激活心肌细胞膜上的ß受体，促进钙离子通道释放，加快钙离子内流，并促进肌浆网释放钙离子，又能促进ATP放能，故可增加心肌的收缩力。从图中可明显看出心肌收缩力的增强。
图三所示为注入乙酰胆碱后心搏曲线变化，乙酰胆碱可通过心肌细胞膜上的M受体，直接或间接抑制钙离子通道，减少钙离子内流，降低心肌的收缩力。从图中可明显看出心肌收缩力的减弱。
总之，各种因素都是通过影响细胞质内钙离子的浓度来起作用的。钙离子浓度升高，心肌收缩力增强，反之，则降低。
七、注意事项
1、制备蛙心标本时，勿伤静脉窦;
2、各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液换洗，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常后方能进行下一步实验;
3、蛙心插管内液面应保持恒定;
4、每次更换或滴加溶液必须做标记;
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